γ-干擾素對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者免疫因子及CD69、CD107a影響研究

萬(wàn)清峰，曹華，張文彬

(1.江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，江西 上饒 334000；2.江西省廣豐區(qū)人民醫(yī)院 耳鼻咽喉科，江西 上饒 334600)

?

γ-干擾素對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者免疫因子及CD69、CD107a影響研究

萬(wàn)清峰1Δ，曹華1，張文彬2

(1.江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，江西 上饒 334000；2.江西省廣豐區(qū)人民醫(yī)院 耳鼻咽喉科，江西 上饒 334600)

目的 探討γ-干擾素對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者免疫因子及CD69、CD107a的影響。方法 選取2013年10月～2015年5月診治的遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者76例，隨機(jī)分為對(duì)照組38例，臨床常規(guī)治療，實(shí)驗(yàn)組38例，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用γ-干擾素，治療結(jié)束后檢測(cè)2組患者外周血CD69、CD107a、免疫因子、T細(xì)胞亞群及治療有效率。結(jié)果 與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組外周血CD69、CD107a含量較低(P<0.05)，血清IgA、IgG水平較高，血清IgE水平較低(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較高，血清CD8+較低(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組治療有效率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論 γ-干擾素對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者有較好的臨床療效，能有效降低外周血CD69、CD107a水平，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能。

γ-干擾素；遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)；免疫因子；CD69；CD107a

藥物的不良反應(yīng)主要以過(guò)量反應(yīng)、副作用、藥物間的相互作用、特異質(zhì)、藥物變態(tài)反應(yīng)等幾方面為主，其中藥物變態(tài)反應(yīng)(drug hypersensitivity， DH)是藥物不良反應(yīng)中的重要部分之一[1]，其發(fā)生率占所有藥物不良反應(yīng)的15%。遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)(delayed-type drug hypersensitivity，DTH)是藥物變態(tài)反應(yīng)中最常見(jiàn)的一種類型，又包括發(fā)疹型藥疹、急性泛發(fā)性發(fā)疹性膿皰病、固定型藥疹、斑丘疹型藥疹、藥物超敏反應(yīng)綜合征等幾大類[2]。藥物變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生和已知藥物作用的性質(zhì)無(wú)關(guān)，其發(fā)生機(jī)制可涉及I～I(xiàn)V 4種變態(tài)反應(yīng)類型[3]，DH臨床癥狀多種多樣，為全身性的變態(tài)反應(yīng)，易引起多器官、多系統(tǒng)功能病變。臨床對(duì)于本病的診斷主要有激發(fā)實(shí)驗(yàn)、皮膚實(shí)驗(yàn)以及體外實(shí)驗(yàn)3種方法，激發(fā)實(shí)驗(yàn)雖是診斷DTH的金標(biāo)準(zhǔn)[4]，但是由于具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性并不十分受患者認(rèn)同。研究指出，T細(xì)胞表面分子CD69和CD107a具有較高的特異性和敏感性[5]。本研究通過(guò)觀察γ-干擾素對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者外周血免疫因子和CD69以及CD107a的影響，來(lái)探究γ-干擾素對(duì)DTH的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來(lái)源選擇2013年10月～2015年5月于江西省廣豐區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉科以遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)為診斷而收入院的患者76例，包括發(fā)疹型藥疹、固定型藥疹、急性泛發(fā)性發(fā)疹性膿皰病等各型藥疹，其中男性40例，女性36例，平均年齡(46.3±6.6)歲，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為2組，即實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。其中實(shí)驗(yàn)組38例，男性19例，女性19例，平均年齡(45.4±6.2)歲；對(duì)照組38例，男性20例，女性18例，平均年齡(47.7±6.5)歲。2組患者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，基線可比。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：參照2010年第四版《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)》[6]中關(guān)于遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)以及臨床表現(xiàn)擬定納入標(biāo)準(zhǔn)：①診斷標(biāo)準(zhǔn)：有用藥史；有一定的潛伏期，一般一周左右發(fā)病；發(fā)病較突然，除固定性藥疹外，其他1～7天皮疹即遍布全身；重癥藥疹可累計(jì)心肝腎等重要臟器；皮膚實(shí)驗(yàn)或激發(fā)實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性；停藥后藥疹消失而再用時(shí)又復(fù)發(fā)；②年齡≥12周歲；③2周內(nèi)未使用糖皮質(zhì)激素等免疫功能抑制劑；④自愿參與本研究并簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①不愿參與本研究或不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)者；②重癥藥疹患病期；③患者同時(shí)患有心、肝、腎等器官器質(zhì)性病變者；④孕婦或哺乳期婦女；⑤患有艾滋病等具有較重傳染性疾病患者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：嚴(yán)格按照2010年《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)》[6]中關(guān)于遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)的治療標(biāo)準(zhǔn)予以治療：對(duì)照組予0.5 mg/(kg·d)地塞米松(天津金耀藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020514)2次/天靜點(diǎn)，共治療1周。治療期間輔以各種支持療法及對(duì)癥治療。

實(shí)驗(yàn)組在與對(duì)照組相同的臨床常規(guī)對(duì)癥治療基礎(chǔ)上加用100萬(wàn)IU γ-干擾素(北京四環(huán)生物制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S10980084)皮下注射，連續(xù)治療1周。治療期間輔以各種支持療法及對(duì)癥治療。

1.2.2 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法：2組患者均在治療前、后空腹采集15 mL肘靜脈血，將其中部分血液裝入預(yù)先裝有EDTA的抗凝采血管中，將采血管按3 000 r/min離心10 min，待離心結(jié)束后將上層血清裝入EP管中，放入-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆茫皇Ｓ嘌貉b入采血管的備用。

① 采用雙抗體夾心法檢測(cè)所有研究對(duì)象血清中CD69、CD107a、T淋巴細(xì)胞亞群。具體操作步驟以CD69為例：首先用CD69抗體免疫實(shí)驗(yàn)微孔板，再分次向微孔中加入CD69，與HRP標(biāo)記的白介素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后加底物TMB顯色。顯色后，TMB在HRP酶的催化下發(fā)生連續(xù)的顏色轉(zhuǎn)化，最后變?yōu)辄S色。由于顏色深淺與標(biāo)本血清CD69濃度呈正比例關(guān)系，用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定標(biāo)本的吸光度(A值)，最終可精確計(jì)算標(biāo)品中的CD69含量。試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。

② 采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)血清免疫因子水平。試劑盒由武漢博士的生物技術(shù)有限公司提供，SpectraMax i3x 多功能酶標(biāo)儀[美谷分子儀器(上海)有限公司]，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。

1.2.2.3 治療有效率評(píng)價(jià):①顯效：患者無(wú)新起皮疹，皮疹消退≥80%，或原有糜爛面干燥結(jié)痂；②有效：患者有個(gè)別新起皮疹，或原有皮疹消退≥30%，或原有糜爛面基本干燥；③無(wú)效：患者仍有新疹出現(xiàn)，或皮疹消退<30%，或原有糜爛面未見(jiàn)明顯變化。治療總有效率=顯效率+有效率。

2 結(jié)果

2.1 外周血CD69、CD107a水平比較 本研究顯示，經(jīng)治療后，2組患者外周血CD69和CD107a水平均較治療前降低，且實(shí)驗(yàn)組明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

組別例數(shù)時(shí)間CD69(%)CD107a(%)對(duì)照組38治療前23.42±3.1124.36±3.17治療后57.51±7.17*56.76±7.08*實(shí)驗(yàn)組38治療前23.54±3.0424.18±3.21治療后40.15±6.46*#41.25±6.94*#

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 2組患者治療前后細(xì)胞免疫指標(biāo)比較 治療后2組患者血清CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平均較治療前明顯升高，且實(shí)驗(yàn)組更高于對(duì)照組，2組患者血清CD8+水平均較治療前明顯降低，且實(shí)驗(yàn)組更低于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組患者細(xì)胞免疫指標(biāo)比較±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group post-treatment

2.3 2組患者治療前后免疫因子水平比較 本研究顯示，治療后2組患者血清IgA、IgG水平均較治療前明顯升高，且實(shí)驗(yàn)組更高于于對(duì)照組，2組患者血清IgE水平均較治療前明顯降低，且實(shí)驗(yàn)組更低于對(duì)照組(P<0.05)；2組患者血清IgM水平在治療前后變化差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)意義。見(jiàn)表3。

表3 2組患者體液免疫指標(biāo)水平比較±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group post-treatment

2.4 2組患者臨床療效比較 本研究中，經(jīng)治療后，實(shí)驗(yàn)組患者總有效率明顯高于對(duì)照組，差異顯著(χ2=3.90，P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 2組患者臨床療效比較[n(%)]

*P<0.05，與對(duì)照組比較，compared with control group

3 討論

世界衛(wèi)生組織將藥物不良反應(yīng)概括為“正常應(yīng)用藥物是所產(chǎn)生的對(duì)機(jī)體意外的有害反應(yīng)”[7]，可見(jiàn)藥物不良反應(yīng)的發(fā)生具有無(wú)規(guī)律性、無(wú)特發(fā)性等特點(diǎn)。相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查顯示，藥物不良反應(yīng)的發(fā)生率約為5%，是導(dǎo)致患者病情加重、延長(zhǎng)住院時(shí)間甚至增加死亡風(fēng)險(xiǎn)的因素之一[8]。干擾素(interferon，IFN)是最先被發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，根據(jù)同源性及受體特異性的不同，可分為I、II、III3型，其中II型干擾素即是臨床較為常用的γ-干擾素，又被稱為免疫干擾素。研究表明，γ-干擾素不僅具有廣譜抗病毒功能，還能有效調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)[9]。γ-干擾素具有較高的臨床研究?jī)r(jià)值，在免疫性疾病、腫瘤等領(lǐng)域逐步應(yīng)用，但臨床將之應(yīng)用于治療遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)性疾病的報(bào)道卻較為少見(jiàn)。

本研究結(jié)果顯示，2組患者治療前外周血CD69、CD107a水平均較高。研究顯示[10]，人體正常狀態(tài)下T細(xì)胞并不表達(dá)或少量表達(dá)CD69，只有當(dāng)機(jī)體收到蛋白激酶C的激活物刺激后，才會(huì)釋放大量CD69。劉芝翠等[11]通過(guò)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)藥疹患者CD4+表面大量CD69，本研究結(jié)果正好證明了這一觀點(diǎn)的正確性。與CD69的水平類似，CD107a在機(jī)體正常狀態(tài)下幾乎并不表達(dá)，只有在活化的CD4+、CD8+表面大量表達(dá)。本研究治療后，實(shí)驗(yàn)組患者外周血CD69、CD107a水平明顯低于對(duì)照組，其原因可能與γ-干擾素的免疫調(diào)節(jié)功能有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組患者經(jīng)γ-干擾素治療后，其細(xì)胞免疫和體液免疫指標(biāo)明顯得到改善，其原因可能與γ-干擾素的調(diào)節(jié)免疫功能作用有關(guān)。從本研究中可以看出，實(shí)驗(yàn)組患者治療前具有調(diào)高免疫應(yīng)答能力的CD3+、CD4+比例相對(duì)較低，而調(diào)低免疫應(yīng)答能力的CD8+比例則相對(duì)較高，且CD4+/CD8+<1。而實(shí)驗(yàn)組患者經(jīng)γ-干擾素治療后，CD3+、CD4+比例有所恢復(fù)，CD8+比例開(kāi)始降低。研究顯示[12]，γ-干擾素能夠使靜止的CD4+T細(xì)胞分化Th1細(xì)胞，同時(shí)抑制Th2細(xì)胞的增殖，將天然免疫反應(yīng)與獲得性免疫反應(yīng)有機(jī)的統(tǒng)一起來(lái)，并誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)的發(fā)生。從表2和表3中可以看出，γ-干擾素能有效調(diào)節(jié)機(jī)體體液、細(xì)胞免疫功能，對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者具有較好的臨床療效。

本研究通過(guò)對(duì)76例遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者免疫因子、T臨細(xì)胞亞群、CD69、CD107a和臨床療效的變化，證實(shí)γ-干擾素對(duì)遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)患者的治療具有一定的積極意義。

[1] 耿東升. 藥物變態(tài)反應(yīng)的機(jī)制[J]. 西北藥學(xué)雜志,2012,27(04):385-389.

[2] 李世蔭. 藥物變態(tài)反應(yīng)專題講座之二藥物變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制及其反應(yīng)類型[J]. 藥物流行病學(xué)雜志， 1999， 1(1)： 21.

[3] 顧瑞金.變態(tài)反應(yīng)科主治醫(yī)生525問(wèn)[M].北京:中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2008:31-82,253-579．

[4] 牛軍,鐘華,宋志強(qiáng),等. PBMC中CD69、CD107a表達(dá)上調(diào)在診斷遲發(fā)型藥物變態(tài)反應(yīng)中的意義[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2012,34(06):508-511.

[5] 陳典.利用小鼠嗜堿性粒細(xì)胞活化標(biāo)志研究中藥注射劑的致敏性[D].廣州： 廣州中醫(yī)藥大學(xué)， 2012.

[6] 趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)[M].南京：江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2010.

[7] 丁學(xué)霞，孫嘉陽(yáng)，孫洪善.常見(jiàn)中成藥的不良反應(yīng)及預(yù)防措施[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2009， 3(14)： 197-198.

[8] 李華，慶格樂(lè).藥品不良反應(yīng)56例[J].武警醫(yī)學(xué)，2010，21(11)： 985-986.

[9] 高德宗， 孫靖中， 余之剛， 等.γ-干擾素增強(qiáng)他莫昔芬抗 ER 陰性乳腺癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志， 2006，12(3)： 215-217.

[10] 吳俊英，侯彥強(qiáng)，李柏青.CD69在人外周血活化的γδT細(xì)胞表面的表達(dá)[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，5(27)：377-379.

[11] 劉芝翠，元慧杰，曾維宏，等.天皰瘡患者外周血CD4+T細(xì)胞活化狀態(tài)及其表面共刺激分子的表達(dá)[J].中華皮膚科雜志，2014，47(1)：7-10.

[12] 張彩， 田志剛.γ 干擾素的負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用[J].現(xiàn)代免疫學(xué)， 2007， 27(2)： 89-92.

(編校：譚玲)

Effect of interferon gamma on immune factor and CD69, CD107a in patients with delayed type hypersensitivity

WAN Qing-feng1Δ, CAO Hua1, ZHANG Wen-bin2

(1.Department of Basic Medical, Jiangxi Medical College, Shangrao 334000, China; 2. Department of Ear, Nose & Throat, People’s Hospital of Guangfeng District of Jiangxi, Shangrao 334000, China)

ObjectiveTo investigate effect of interferon gemma on immune factor and CD69, CD107a in patients with delayed type hypersensitivity by interferon gamma.Methods76 cases with delayed type hypersensitivity were selected and divided into 2 groups.38 cases in control group were treated conventional therapy, 38 cases in experiment group were treated by interferon gamma.Peripheral blood CD69, CD107a, immune factor, T cell subsets and the treatment efficiency were compared after the treatment.ResultsCompared with the control group, the serum CD69 and CD107a levels were lower in the experimental group(P<0.05), serum IgG and IgA levels were higher, the serum IgE level was lower(P<0.05), and the CD3+,CD4+,CD4+/CD8+level was higher, serum CD8+was lower (P<0.05).The effective rate of the treatment group was significantly higher than that of the control group (P<0.05).ConclusionInterferon gamma has good clinical effect in the patients with delayed type hypersensitivity, and can effectively reduce the levels of CD69 and CD107a in the peripheral blood, and regulate the immune function of the body.

gamma interferon; delayed type hypersensitivity; immune factor; CD69; CD107a

萬(wàn)清峰，通信作者，女，講師，研究方向：免疫微生物教學(xué)及科研，E-mail：wanqingfengdt@163.com。

R392

A

1005-1678(2015)10-0082-03