丹參注射液與多巴胺注射液的配伍穩定性考察

湯姝，溫強，朱振峰，張曉堅

(1.鄭州大學第一附屬醫院 藥學部，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學臨床藥理研究所，河南 鄭州 450052)

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丹參注射液與多巴胺注射液的配伍穩定性考察

湯姝1，溫強2，朱振峰1，張曉堅1

(1.鄭州大學第一附屬醫院 藥學部，河南 鄭州 450052；2.鄭州大學臨床藥理研究所，河南 鄭州 450052)

目的 研究丹參注射液與多巴胺注射液在5%的葡萄糖注射液中的配伍穩定性。方法 采用HPLC法考察2藥在5%的葡萄糖注射液中配伍后，于5、25、35 ℃避光和光照條件下，6 h內丹參注射液中4個主成分：丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B和多巴胺注射液中的鹽酸多巴胺的含量變化；并考察配伍前后配伍液外觀、性狀、pH及不溶性微粒的變化。結果 在避光條件下，6 h內配伍液的外觀、pH值均無明顯變化，不溶性微粒均符合中國藥典的要求，配伍液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和鹽酸多巴胺的百分含量均在99%以上(相對于0 h)；在光照條件下，隨著溫度的升高，放置時間的延長，配伍液中鹽酸多巴胺的含量沒有明顯下降，而丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B的含量下降較明顯，配伍液pH值也有一定程度的降低，不溶性微粒則無明顯變化。結論 丹參注射液與多巴胺注射液在5%的葡萄糖注射液中在6 h內、于避光環境中可配伍使用；光照及溫度可能是影響丹參注射液與多巴胺注射液配伍穩定性的主要因素。

丹參注射液；多巴胺注射液；配伍穩定性；高效液相色譜法

丹參注射液是活血化瘀的常用藥物，近年來被廣泛用于治療冠心病等疾病，并取得了較好的臨床療效。該藥適用于胸痹血瘀癥候，如胸悶、心悸、心絞痛，急慢性心肌梗塞，缺血性腦中風，腦梗塞或中風后遺癥等。

多巴胺注射液臨床上用于心肌梗死、創傷、內毒素敗血癥、心臟手術、腎功能衰竭、充血性心力衰竭等引起的休克綜合征；補充血容量后休克仍不能糾正者，尤其有少尿及周圍血管阻力正常或較低的休克。

近年來丹參注射液和多巴胺注射液在臨床上配伍使用取得了一定的療效[1-2]，有文獻報道[3-4]，2藥配伍使用有增效作用，且能減少藥物的依耐性。但2藥配伍的穩定性尚無文獻報道，其用藥的安全性無確切的理論支持。

根據臨床用藥習慣，本文考察了2藥在5%的葡萄糖注射液中配伍后，在5、25、35 ℃避光和光照條件下6 h內的穩定性，采用HPLC法測定了丹參注射液中4個主成分：丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B和多巴胺注射液中的鹽酸多巴胺的含量變化；并考察了配伍前后配伍液外觀、性狀、pH及不溶性微粒的變化，為臨床用藥安全提供了保證。

1 材料與方法

1.1 儀器 美國Waters Alliance 2695型高效液相色譜儀；色譜柱：Dikxna Cl8(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；2501型紫外-可見分光光度儀(日本島津)；XS205DU電子天平(梅特勒-托利多)；868型酸度計(美國奧立龍公司)；C-15型電熱恒溫水槽(上海比朗儀器制造有限公司)；JHT-DD型單人單面凈化工作臺(濟南杰康凈化設備廠)。

1.2 藥品與試劑 丹參素鈉對照品(批號：110855-200809,中國食品藥品檢驗研究院)；原兒茶醛對照品(批號：110810-201007,中國食品藥品檢驗研究院)；迷迭香酸對照品(批號：111871-201001,中國食品藥品檢驗研究院)；丹酚酸B對照品(批號：111562-201313,中國食品藥品檢驗研究院)；鹽酸多巴胺對照品(批號：100070-201006,中國食品藥品檢驗研究院)；丹參注射液(四川升和藥業股份有限公司， 規格：10 mL/支， 批號：150718/1)；多巴胺注射液(上海禾豐制藥有限公司，規格：2 mL:20 mg，批號：150507)；5%葡萄糖注射液(國內某廠家生產，規格: 250 mL)；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

1.3 方法

1.3.1 含量測定[5]：色譜條件：流動相(A)： 0.05%磷酸溶液、(B)：乙腈，按照表1的程序進行梯度洗脫，洗脫時間為85 min；流速：1.0 mL/min；檢測波長：286 nm; 柱溫：30 ℃；進樣量:10 μL。

表1 梯度洗脫程序Tab.1 Gradient elution program

1.3.2 溶液的配制

① 對照品混合溶液的配制：分別精密稱取于五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h以上的丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B對照品及于105 ℃干燥至恒重的鹽酸多巴胺對照品適量，用5%的甲醇稀釋制成含0.7 mg/mL丹參素鈉、0.3 mg/mL原兒茶醛、0.06 mg/mL迷迭香酸B及 0.06 mg/mL丹酚酸和0.8 mg/mL多巴胺的對照品儲備液。

② 配伍液的配制：模擬臨床用藥濃度在層流凈化臺上進行配制[2]，將丹參注射液3支(10 mL)與多巴胺注射液1支(2 mL/20 mg)分別溶解到250 mL 5%的葡萄糖注射液中，搖勻，分為若干份。各配伍液分別在下列條件中放置：避光(5、25、35 ℃)和光照(5、25、35 ℃)。每種條件下均平行配制樣品各3份(n=3)，在0、1、2、4、6 h時分別檢查外觀，測定pH值、不溶性微粒數及丹參素、原兒茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B和鹽酸多巴胺的含量。

1.3.3 標準曲線的繪制：精密量取“1.3.2”項下的對照品儲備液1、3、5、8、10 mL于50 mL量瓶中加流動相至刻度，配成系列濃度的對照品混合溶液。按“1.3.1”項下的色譜條件分別進樣測定，記錄色譜圖。

1.3.4 精密度試驗：取“1.3.3”項下對照品儲備液的10倍稀釋溶液(即5→50 mL稀釋液)，按“1.3.1”項下色譜條件連續進樣6次，記錄色譜圖。

1.3.5 重復性試驗：分別取丹參注射液與多巴胺注射液同一批樣品，按“1.3.2”項下配伍溶液配制方法平行制備6份，精密量取配伍液10 μL，按“1.3.1”項下色譜條件分別進樣分析，記錄色譜圖。

1.3.6 回收率試驗：配制低、中、高丹參素鈉(56、70、84 μg/mL)、原兒茶醛(24、30、36 μg/mL)、迷迭香酸(4.8、6、7.2 μg/mL)、丹酚酸B(4.8、6、7.2 μg/mL)及多巴胺(64、80、96 μg/mL)系列濃度的對照品溶液，重復進樣10 μL(n=5)。測定其峰面積，代入回歸方程計算濃度，并計算回收率。

1.3.7 配伍液中藥物含量測定：按照“1.3.1”項下色譜條件，于0、1、2、4、6 h取避光和光照情況下不同溫度條件(5、25、35 ℃)的配伍液分別進樣10 μL，記錄色譜圖；以0 h時含量為100%，考察以上配伍液中各主成分的百分含量變化。

1.3.8 外觀觀察：取潔凈的20 mL 具塞納氏比色管數支，分別加入15 mL上述配伍液，并用配伍前的兩種注射液作對照，于0、1、2、4、6h分別檢查外觀變化。

1.3.9 pH測定：取上述配伍液于0、1、2、4、6 h測定pH值，每個樣本連測3次，取平均值。

1.4 不溶性微粒 取“1.3”項下的配伍液及配伍前的丹參注射液與多巴胺注射液在上述時間點按中國藥典微粒檢測法中的光阻法檢查微粒[6]。

2 結果

2.1 含量測定結果

2.1.1 標準曲線：以峰面積A為縱坐標，濃度C(μg/mL)為橫坐標，進行線性回歸，得丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺的回歸方程分別為A=4.31×106C-1.14×102,r=0.9996(n=5)；A=7.56×106C-3.82×102,r=0.9998(n=5)；A=6.97×106C-1.6 3×102,r=0.9992(n=5)；A=3.21×106C-2.31×102,r=0.9997(n=5)和A=6.33×106C-1.59×102,r=0.9994(n=5)。結果表明，丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺分別在14～140 μg/mL、6～60 μg/mL、1.2～12 μg/mL、1.2～12 μg/mL及16～160 μg/mL的范圍內線性關系良好。對照品及樣品各峰分離度良好，見圖1、圖2。

圖1 對照品混合溶液色譜圖1.鹽酸多巴胺；2.丹參素鈉；3.原兒茶醛；4.迷迭香酸；5丹酚酸BFig.1 HPLC chromatogram of reference substance1.Dopamine hydrochloride; 2.Salvia;3.Protocatechuic aldehyde;4.Rosmarinic acid;5.Salvianolic acid B

圖2 配伍液色譜圖1.鹽酸多巴胺；2.丹參素鈉；3.原兒茶醛；4.迷迭香酸；5丹酚酸BFig.2 HPLC chromatogram of compatibility solution1.Dopamine hydrochloride; 2.Salvia;3.Protocatechuic aldehyde;4.Rosmarinic acid;5.Salvianolic acid B

2.1.2 精密度試驗：丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺峰面積的RSD分別為0.81%、0.96%、1.01%、0.72%和0.83%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.1.3 重復性試驗：丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺峰面積的RSD分別為0.89%、0.92%、0.98%、0.80%和0.85%(n=6)，表明方法的重復性良好。

2.1.4 回收率試驗：丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B及多巴胺的平均回收率分別為101.19%、100.26%、99.73%、99.61%和98.27%，RSD分別為2.78%、3.26%、2.15%、3.03%和2.17%。

2.1.5 配伍液中藥物含量：6 種放置條件中5、25、35 ℃避光條件下該配伍液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和鹽酸多巴胺的百分含量在0～6 h內均無明顯變化；5 ℃及25 ℃光照條件下該配伍液中各主成分的含量在0～4 h 無明顯變化，在4～6 h內配伍液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量有所降低；35 ℃光照條件下該配伍液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量在0～4 h 略有下降；而在4～6 h內配伍液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量明顯降低，各成分在6 h的含量相對0 h降低接近10%；而配伍液中鹽酸多巴胺的含量則無明顯變化，見表2。

表2 配伍液6種放置條件下各成分相對百分含量變化(n=3，%)Tab.2 The relative percentages of each component in compatibility solution under 6 different conditions(n=3，%)

續表

2.2 外觀檢查 結果表明，6 h內各種放置條件下配伍液的外觀與配伍前的2種注射液相比無明顯差異。

2.3 pH測定 結果表明，6 種放置條件中5、25、35 ℃避光條件下該配伍液pH值在0～6 h均無明顯變化；而在光照條件下該配伍液pH值在0～1 h無明顯變化，1～2 h，pH值有下降的趨勢，2 h后趨于穩定，見表3。

表3 6種放置條件下配伍液的pH變化(n=3)Tab.3 pH change of compatibility solution in 6 conditions(n=3)

2.4 不溶性微粒 結果表明，2藥配伍并未使配伍液微粒數明顯增加，見表4。

表4 2藥配伍不同時刻的不溶性微粒數Tab.4 Insoluble particles of compatibility solution at different time

A.丹參注射液；B.巴胺注射液

3 討論

為了排除單個藥物成分在5%葡萄糖注射液中的不穩定因素，本實驗分別測試了丹參注射液與多巴胺注射液在5%葡萄糖注射液中的穩定性。實驗證明，2種藥物在5%葡萄糖注射液中的穩定性明顯高于2者共存于5%葡萄糖注射液中的穩定性，2種藥物(分別溶解于5%葡萄糖注射液)在避光條件(5、25、35 ℃)和光照條件(5、25、35 ℃)下6 h內的外觀、 pH值、不溶性微粒數及各主成分的含量均無明顯變化(相對于0 h)。

綜上所述，丹參注射液與多巴胺注射液配伍后的變化所涉及的問題主要是由光照和溫度引起的。以上實驗結果說明，丹參注射液與多巴胺注射液配伍后，在避光條件下的3種溫度情況，6 h內配伍液的pH值、外觀及不溶性微粒均無明顯變化，各主成分的百分含量也沒有明顯下降；而在光照條件下，隨著溫度的升高，放置時間的延長，配伍液中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的含量下降較為明顯(4 h后)，可見在影響丹參注射液與多巴胺注射液配伍變化的因素中，光照是最主要的。考慮到配伍液中丹參注射液中各主成分的相對含量有下降趨勢，為保障臨床用藥的安全性，建議臨床最好在丹參注射液與多巴胺注射液配伍后的4 h內滴完，且盡量避光。

在進行液相色譜檢測波長選擇時，本實驗參考文獻[5,7]考察了2種波長，考慮到丹參注射液中的檢測成分較多，成分較復雜，選擇了文獻5中的檢測波長；在進行梯度洗脫時，本實驗發現當按照參考文獻的條件進行梯度洗脫時，各主成分色譜峰有重疊現象，對洗脫條件進行了一定程度的改善，將洗脫時間延長，并對45 min后的流動相洗脫比例進行了調整。經過優化，各主成分色譜峰實現了完全分離，峰型較理想。

[1] 馬友鳳，唐義麗.復方丹參注射液與多巴胺聯合治療新生兒重度硬腫癥30例療效觀察[J].河南大學學報(醫學版)，2005，24(1)：59-60.

[2] 陳海棠.丹參注射液聯合多巴胺治療肺心病心力衰竭72例療效分析[J].中華現代內科學雜志，2008，5(5)：458-459.

[3] 吳學軍，那順白，乙拉.丹參注射液與臨床常用藥物配伍[J].中華誤診學雜志，2011，11(6)：1505-1505.

[4] 徐德生.中藥的合理應用[M].上海：上海科技教育出版社，2007：213.

[5] 李婧, 劉漢清, 孫小芬.丹參注射液多成分定量測定和指紋圖譜研究[J].中成藥，2011，33(4)：553-556.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010 年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄：71-73.

[7] 吳燕瓊，梁潔雯.HPLC測定鹽酸多巴胺注射液的含量[J].廣東藥學，2005，15(3)：15-17

(編校：王冬梅)

Study on compatible stability of Danshen injection and dopamine injection

TANG Shu1, WEN Qiang2, ZHU Zhen-feng1, ZHANG Xiao-jian1

(1.Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China; 2.Clinical Pharmacology Research Institute of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China)

ObjectiveTo study compatibility stability of Danshen injection combined with dopamine injection in 5% glucose injection.MethodsThe relative contents of tanshinol sodium, protocatechuic aldehyde, rosmarinic acid,salvianolic acid B in Danshen injection and Dopamine hydrochloride in dopamine injection were determined by HPLC in 6h after the compatibility in the above infusion at 5 ℃,25 ℃,35 ℃ under dark and light,and the changes in pH value,appearance and insoluble particles were also observed.ResultsThere were no significant changes in appearance and pH value at 5 ℃,25 ℃,35 ℃ under dark,insoluble particles were in line with Chinese Pharmacopoeia,and the relative content of tanshinol sodium, protocatechuic aldehyde, rosmarinic acid,salvianolic acid B and Dopamine hydrochloride were above 99%(compared with 0h) in 6h.In the light conditions,as the temperature raised,the extension of storage time,the relative content of Dopamine hydrochloride was not significantly decreased,but the content of tanshinol sodium, protocatechuic aldehyde, rosmarinic acid and salvianolic acid B had declined,while pH value also had a certain degree of reduction,the insoluble particles had no obvious change.ConclusionThe mixture of Danshen injection and dopamine injection in 5% glucose injection is stable under dark conditions in 6h,illumination and temperature maybe the main factor affecting the stability of Danshen injection combined with dopamine injection.

Danshen injection; dopamine injection; compatible stability; HPLC

湯姝，女，博士，主管藥師，研究方向：藥學，E-mail：2084907457@qq.com。

R969.3

B

1005-1678(2015)07-0145-04