反相HPLC 法測定行氣止痛丸中羥基紅花黃色素A 的含量

楊沫銀 宋廣瑩

(1.內蒙古食品藥品檢驗所，內蒙古 呼和浩特 010020;2.內蒙古商貿職業學院，內蒙古 呼和浩特 010020)

行氣止痛丸為醫院制劑方，收載于《中華人民共和國藥品標準》蒙藥分冊(1998 年版)。功能與主治: 開郁行氣，活血止痛。用于胸悶，氣短，胸肋刺痛，“巴木病”［1］。成分: 據文獻記載［2］，紅花具有活血通經、散瘀止痛之功效，其查爾酮類成分羥基紅花黃色素A、黃色素A 為活性成分。因此，為了考察該藥的質量，本研究參照有關資料［3］建立了其有效成分羥基紅花黃色素A 的HPLC 含量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器: SHIMADZVLC -10Avp，LC -10ATvp 型泵，SCL-10Avp 型控制器，SPD-10AVP 型檢測器，CLASS -VP 色譜工作站，島津UA-1700 型紫外-可見分光光度計。

2.2 試藥: 甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為高純水，羥基紅花黃色素A 對照品(購于中國食品藥品檢定研究院，批號: 111637 -201003)，樣品由內蒙古中蒙醫院提供。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件: 色譜柱: Diamonsil(鉆石)C18 柱(250mm×4.6mm，5μm);流動相: A: 甲醇-乙腈(19: 2)B: 0.7%磷酸溶液(以三乙胺調節pH 值至6.0 ±0.1)，A: B(23: 77);流速: 1.0 mL/min;柱溫: 40℃;進樣量: 20μL;檢測波長為

403nm。

2.2 對照品溶液的制備: 精密稱取羥基紅花黃色素A 對照品適量，加25%甲醇制成每1mL 中含45μg 的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備: 取本品約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25%甲醇100mL，稱定重量，超聲處理(功率120W，頻率40KHZ)40min，放冷，再稱定重量，用25%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液過微孔濾膜(0.45μm)，即得。

2.4 專屬性考察: 取按處方比例并以相同工藝制備的缺紅花的陰性對照，按供試品溶液制備法制得陰性對照品溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，測得結果為: 供試品溶液中色譜峰保留時間與羥基紅花黃色素A 對照品一致，且陰性供試品色譜圖中在與羥基紅花黃色素A對照品以及供試品色譜相對應的保留時間處無干擾，表明該含量測定方法專屬性好。(色譜圖見圖1、2、3)

2.5 線性關系考察: 取羥基紅花黃色素A 對照品約3.0mg，精密稱定，置50mL 量瓶中，加25%甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1. 0、3. 0、5. 0、7. 0、9. 0、10.0mL，分別置10mL 量瓶中，加25%甲醇至刻度，搖勻，各吸取20μL 進樣，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為縱坐標(Y)，進樣量為橫坐標(X)進行回歸分析，回歸方程為Y=2935395X-20646 r=0.9998。結果羥基紅花黃色素A在0.1304 ～1.304μg 范圍內呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗: 取同一供試品溶液，在上述色譜條件下，連續進樣6 次，測定羥基紅花黃色素A 峰面積積分值，RSD為1.02%。

2.7 穩定性試驗: 取同一供試品溶液，室溫放置(避光)，在上述色譜條件下，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h 進樣測定羥基紅花黃色素A 峰面積積分值，RSD 為0.96%。試驗結果表明羥基紅花黃色素A 在24h 基本穩定。

2.8 重復性試驗: 取同一批號樣品，平行制備6 份供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，RSD 為0.82%。

2.9 加樣回收試驗: 取已知含量的供試品6 份，各約0.5g，精密稱定，分別精密加入羥基紅花黃色素A 對照品適量，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，進樣20μL，按上述方法測定每份含量，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果

2.10 樣品含量測定: 取3 批樣品各2 份，精密稱定，按上述方法制備供試品溶液，并依法測定，3 批樣品的測定結果分別為5.23mg/g、5.18mg/g、5.20mg/g。

3 討 論

3.1 流動相的選擇: 參照《中國藥典》2010 年版一部“紅花”項下的含量測定方法，以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26: 2: 72)為流動相進行測定，結果羥基紅花黃色素A 與其它成分分離不好，峰型不對稱，經試驗摸索將流動項改為A: 甲醇-乙腈(19: 2)作為有機相，B: 0.7%磷酸溶液(以三乙胺調PH 至6.0 ±0.1)作為水相，通過不同比例比較試驗，將流動相的比例為A: B(23: 77)時，樣品中的羥基紅花黃色素A 與其它成分均達到較好的分離(分離度為3.27)，峰型較好(拖尾因子1.09)，并具較適合的保留時間，故將流動相定為A: B(23: 77)。

3.2 柱溫的選擇: 參照《中國藥典》2010 年版一部“紅花”項下選擇30℃柱溫時，柱壓偏高，測定成分與其它成分分離不好;柱溫升高到40℃時使流動項粘度減小，柱壓降低并改善分離效果，故將柱溫定為40℃。

［1］衛生部藥典委員會. 衛生部藥品標準蒙藥分冊［S］.1998: 90.

［2］王寶琴.中成藥質量標準與標準物質研究［M］.中國醫藥科技出版社，211.

［3］國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典［S］. 一部. 北京: 中國醫藥科技出版社，2010