ETEC F18R 基因多態(tài)性與仔豬腹瀉的相關(guān)分析

王玲玉　賀長(zhǎng)青　蔣　雋　柴玉蘭　許棟　何　俊馬海明

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410128）

品種繁育Genetic Breeding

ETEC F18R 基因多態(tài)性與仔豬腹瀉的相關(guān)分析

王玲玉賀長(zhǎng)青蔣雋柴玉蘭許棟何俊*馬海明

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，湖南長(zhǎng)沙410128）

摘要：本試驗(yàn)采用PCR-RFLP方法，以杜洛克（26頭）、長(zhǎng)白豬（34頭）、大白豬（55頭）為研究對(duì)象，對(duì)腸毒素大腸桿菌受體（?????18?）基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，計(jì)算其基因型頻率、基因頻率及其與三個(gè)外來(lái)純種仔豬腹瀉的相關(guān)分析。結(jié)果表明，杜洛克存在?，??和?三種基因型，抗性基因型?基因型的頻率為0.1538，易感基因型?、??基因型的頻率分別為0.4231和0.4231。大白豬和長(zhǎng)白豬存在兩種基因型（??，??），其中?基因型的分布頻率分別為0.9706 和0.8727。卡方檢驗(yàn)表明三個(gè)外來(lái)品種均處于?????平衡狀態(tài)，長(zhǎng)白豬和大白豬￥￤￣18￢基因型間的腹瀉特性差異不顯著（￡＞0.05），而杜洛克基因型間的腹瀉特性差異顯著（￠＜0.05）。

關(guān)鍵詞：仔豬；?????18?基因；多態(tài)性；腹瀉

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)豬品種來(lái)源及樣品的采集

杜洛克、長(zhǎng)白豬、大白豬均采自湖南省新五豐原種豬場(chǎng)。采豬耳組織約1.0 g置于1.5 mL的滅菌Expen-der管中，并在-20℃保存待用。

1.2豬的基因組DNA提取

用傳統(tǒng)的酚-氯仿法從豬耳組織中提取基因組DNA。

1.3引物合成和PCR擴(kuò)增

PCR反應(yīng)程序：94預(yù)變性5分鐘；94℃持續(xù)30秒，58℃持續(xù)30秒，72℃持續(xù)30秒，共35個(gè)循環(huán)；72℃后延伸5分鐘，最后4℃保存。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂凝膠電泳于105 V、30分鐘檢測(cè)。

1.4多態(tài)性檢測(cè)

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

對(duì)不同群體的基因型進(jìn)行分型確定，分別對(duì)各位點(diǎn)基因型的個(gè)體數(shù)進(jìn)行整理，計(jì)算不同群體各基因位點(diǎn)的基因型頻率和基因頻率，并運(yùn)用SAS軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，判斷群體是否為平衡群體，對(duì)18基因型與腹瀉抗性性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)果與分析

2.1ETEC F18R基因多態(tài)位點(diǎn)的PCR-RFLP分析

本次試驗(yàn)共檢測(cè)115個(gè)樣品，各個(gè)樣品均成功地?cái)U(kuò)增出DNA，其目的帶大小為421 bp，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Ⅰ酶切后顯示結(jié)果見圖1，在18基因座307 bp處由突變?yōu)椋纬膳c兩個(gè)等位基因，為抗性基因型。型有二條帶，其長(zhǎng)度分別為328和93 bp；型有三條帶，其長(zhǎng)度分別為241、93和87 bp；型有四條帶，其長(zhǎng)度分別328、241、93和87 bp，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致[7,8]。

圖1　豬員8基因PCR-RFLP基因型分析

表1　不同品種豬的ETEC F18R基因的Hardy-Weinberg平衡檢測(cè)

表2　ETEC F18R基因多態(tài)性與腹瀉的關(guān)聯(lián)分析

3　討論

我們只要及早地對(duì)豬采樣、檢測(cè)、分型，便可將2型豬留種，逐步地淘汰2、2型，久而久之，便可提高2基因型頻率，隨著2、2基因型頻率逐步下降，從而達(dá)到抗病育種的目的，這也為采用分子標(biāo)記對(duì)國(guó)內(nèi)外豬種進(jìn)行抗病育種提供了可能，可加快豬抗218大腸桿菌病的分子進(jìn)程，提高豬對(duì)222182抗性，同時(shí)這對(duì)于抵抗一般病菌及提高免疫體系能力也是有利的。但進(jìn)行這項(xiàng)工作時(shí)，除考慮到遺傳因素外，還應(yīng)該考慮營(yíng)養(yǎng)水平、環(huán)境條件及飼養(yǎng)制度等環(huán)境因素。

參考文獻(xiàn)

[1]羅艷茹.仔豬大腸桿菌218粘附型與2I基因型相關(guān)性研究[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2007.

[2]何俊.仔豬腹瀉相關(guān)基因21的篩選及功能研究[D].長(zhǎng)沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

[3]Imberechts H, de Greve H, Schlicker C, et al. Characterization of F107 fimbriae of Escherichia coli107/86, which causes oedema disease in pigs and nucleotide sequence of the F107 major fimbrial subunit gene, fedA [J]. Infect Immun, 1992, 60(5): 1963-1971.

[4]王春江,趙獻(xiàn)軍,趙寶,等.陜西省致仔豬腹瀉2的分子流行病調(diào)查[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 38(7):21-26.

[5]王繼英,郭建鳳,孫守利,等.萊蕪黑豬α1巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因（2I）不同基因型對(duì)大腸桿菌218抵抗力研究[J].華南農(nóng)學(xué)報(bào), 2009, 24(5):64-68.

[6]張引紅,周忠孝,曹果清.22I基因多態(tài)性及其產(chǎn)仔性狀的關(guān)聯(lián)性研究[J].遺傳, 2007, 29(1):52-58.

[7]Vogeli P, Meijerink E, Fries R. A molecular test for the detection of22218 receptors: a breakthrough in the struggle against oedema and postweaning diarrhea in swine [J]. Schweiz Arch Tierheilk, 1997, 139(11):479-484.

[8]施啟順,謝新民,柳小春,等.豬腸毒素大腸桿菌（22）218受體基因型檢測(cè)報(bào)告[J].遺傳, 2002, 24(6):656-658.

[9]王繼英,姜運(yùn)良,郭建鳳,等.豬2Ⅰ基因多態(tài)性及其生長(zhǎng)性能的關(guān)聯(lián)性分析[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào), 2008 ,23(4):65-68.

[10]施啟順,黃生強(qiáng),柳小春,等.不同豬種22218受體基因的多態(tài)性[J].遺傳學(xué)報(bào), 2003, 30(3):221-224.

[11]王懷中,沈彥鋒,王繼英,等.萊蕪黑豬2Ⅰ基因檢測(cè)及其與生長(zhǎng)性能的關(guān)系[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī), 2008, 35(8):57-59.

中圖分類號(hào)：S828.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4645(2015)05-0047-04

收稿日期：2015-04-01

基金項(xiàng)目：863項(xiàng)目（2011AA100304），湖南省戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)重大科技攻關(guān)項(xiàng)目（2011GK4061）

作者簡(jiǎn)介：王玲玉（1988-），女，漢族，湖南岳陽(yáng)人，碩士研究生，E-mail：lingyuwang110@sina.com

*通迅作者：何俊：E-mail: hejun20060222@126.com