鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中PCNA和C-erbB-2的表達及臨床意義研究

陸鴻略,米洋,梁媛,康菲

(1.承德醫學院附屬醫院 耳鼻咽喉科，河北 承德 067000;2.承德醫學院附屬醫院 體檢科，河北 承德 067000)

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鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中PCNA和C-erbB-2的表達及臨床意義研究

陸鴻略1,米洋1,梁媛1,康菲2

(1.承德醫學院附屬醫院 耳鼻咽喉科，河北 承德 067000;2.承德醫學院附屬醫院 體檢科，河北 承德 067000)

目的 探討鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和原癌基因蛋白質(oncogene protein,C-erbB-2)的表達情況及臨床意義。方法 利用免疫組織化學方法檢測45例鼻腔鼻竇鱗癌的PCNA和C-erbB-2的表達情況，并選擇15例正常鼻腔黏膜作為正常對照。結果 各級鼻腔鼻竇鱗癌之中，PCNA和C-erbB-2均有表達，與正常對照鼻腔黏膜相比，差異均有統計學意義(P<0.05)，且有隨鱗癌分級升高表達不斷增強的趨勢。但在鱗癌中的表達，PCNA和C-erbB-2不存在顯著的相關性。結論 PCNA和C-erbB-2的表達均能夠反映出鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌的增殖活性，且其表達強度可以反映出鱗癌細胞的增殖活性高低。

鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌；增殖細胞核抗原；原癌基因蛋白質

鼻腔及鼻竇惡性腫瘤是一種臨床較為常見的疾病，且最為常見的是鱗狀細胞癌[1]。鼻腔鼻竇惡性腫瘤的發病可能與外傷以及長期接觸各種致癌物質，還有反復炎癥刺激等因素有關[2]。惡性腫瘤的發生機制十分復雜，涉及到多種因素和多基因突變的長期、分階段過程[3]。但就目前的研究情況來看，關于鼻腔鼻竇惡性腫瘤的分子生物學發病機制尚不夠清楚。本研究中，筆者利用免疫組織化學方法檢測45例鼻腔鼻竇鱗癌的增殖細胞(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和原癌基因蛋白質(oncogene protein,C-erbB-2)，探討鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌中PCNA和C-erbB-2的表達情況及臨床意義。現將本研究相關結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 45例鼻腔鼻竇鱗癌標本均為承德醫學院附屬醫院手術切除或活檢的存檔標本，所有標本均經甲醛固定，石蠟包埋。標本來源患者中，男34例，女11例，年齡22～78歲，平均年齡(51.1±2.3 )歲。所有入選標本均再作常規切片，行蘇木精(hematoxylin，HE)染色，與原始切片對照診斷無誤。并選擇15例正常鼻腔粘膜作為正常對照，男9例，女6例，年齡23～79歲，平均年齡(52.8±1.37)歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑：鼠抗人PCNA單克隆抗體(PCIO)(北京中杉金橋生物技術有限公司)、兔抗人C-erbB-2多克隆抗體(上海領成生物科技有限公司)和LSAB試劑盒(北京拜爾迪生物技術有限公司)。兔抗鼠和豬抗兔生物素抗體(上海齊瑞生物技術有限公司)；鏈霉親和素(streptavidim,SA)購自廣州天寶頃原生物科技開發有限公司。

1.2.2 檢測方法：所有標本均切片，常規脫蠟至水化。利用蒸餾水進行沖洗，并加緩沖液浸泡。滴加正常血清。于室溫下放置0.5 h后取出多余血清，并分別加兔抗人c-erbB-2多克隆抗體和鼠抗人PCNA單克隆抗體(PCIO)，于室溫下放置0.5 h后加緩沖液沖洗并浸泡。分別加1:100兔抗鼠和豬抗兔生物素化抗體，于室溫下孵育0.5 h后加緩沖液沖洗并浸泡。然后加1:400 SA于室溫下孵育0.5 h后加緩沖液沖洗并浸泡，利用DAB進行顯色處理。利用流動水進行沖洗后使用蘇木素進行復染，再次流水沖洗，并逐級進行乙醇脫水，二甲苯透明。最終，利用中性樹膠進行封片處理。正常對照標本利用TBS來代替一抗。

1.3 結果判定標準 利用低倍鏡于腫瘤細胞密集處進行觀察，選擇5～8個高倍視野，每個視野計數100個細胞，取均數。按照陽性細胞在視野細胞總數中所占的比例進行結果判定，其中C-erbB-2：-：陽性細胞數為0；+：陽性細胞數≤25%；++：陽性細胞數為26%～50%；+++：陽性細胞數>51%。PCNA：+：陽性細胞數≤25%；++：陽性細胞數為26%～50%；+++：陽性細胞數51%～75%；++++：陽性細胞數>75%。

1.4 統計學方法 采用SPSS 16.0統計學軟件進行統計分析，

2 結果

2.1 PCNA和C-erbB-2在鼻腔鼻竇鱗癌和正常鼻腔黏膜中的表達情況比較 經檢驗，C-erbB-2在鼻鱗狀細胞癌中的表達，PCNA陽性細胞核染成棕色顆粒。Ⅰ級鱗癌中，陽性細胞主要分布在癌巢周圍的基底細胞區，癌巢中的棘細胞數量較少，且隨著組織學分級的升高，PCNA陽性細胞數比例更高。Ⅲ級鱗癌時，PCNA陽性細胞遍布于整個癌細胞團塊中、條索中(見圖1)。

圖1 C-erbB-2在鼻鱗狀細胞癌中的表達 (×400)Fig.1 Expression of C-erbB-2 in nasal squarmous cell carcinoma(×400)

C-erbB-2在不同級別鱗癌中的表達率分別為53.5%、60.0%、67.7%。正常對照組未出現著色現象，經χ2檢驗P<0.05，且趨勢χ2檢驗P<0.05。在鱗癌Ⅰ級中，陽性細胞主要分布在癌巢周圍的基底細胞區，癌巢中的棘細胞數量較少。隨著組織學分級的升高，PCNA陽性細胞數比例更高。Ⅲ級時，PCNA陽性細胞遍布在整個癌細胞團塊中、條索中(見圖2)。

圖2 PCNA在鼻鱗狀細胞癌中的表達 (×400)Fig.2 Expression of PCNA in nasal squamous cell carcinoma(×400)

按照PCNA染色陽性細胞數進行分組，分為低表達(+、++)和高表達(+++、++++)2組，并將正常黏膜均視為低表達，則鱗癌不同級別中的高表達分別為46.7%、73.3%、86.7%，正常對照組未出現著色現象，經χ2檢驗P<0.05，且趨勢χ2檢驗P<0.05。見表1。

表1 PCNA和C-erbB-2在鼻腔鼻竇鱗癌和正常鼻腔黏膜中的表達情況比較(n=15)

2.2 PCNA和C-erbB-2表達的相互關系分析 在鱗癌中的表達，PCNA和C-erbB-2均過度表達，且與鱗癌的分化程度有一定關系。但2者在鼻腔鼻竇鱗癌中的表達經χ2檢驗不存在顯著的相關性，表達強度亦無明顯的聯系(r=0.51，P>0.05)，見表2。

表2 PCNA和C-erbB-2表達的相關性分析

3 討論

鼻腔及鼻竇鱗狀細胞癌的發生機制十分復雜，可能與反復炎癥刺激、長期接觸致癌物質、良性腫瘤惡變、外傷等因素有關。而且，惡性腫瘤的發生受到多種因素影響、多基因突變導致的長期的、分階段的過程。

對不同的細胞而言，細胞增殖是其生命的基本特征，并與機體的生長、生理性再生、創傷修復、細胞程序性死亡以及各種惡性腫瘤的發生之間存在十分密切的關系。腫瘤的增殖活動會對其生物學行為、臨床過程和對治療的反應等多方面產生影響，因此，通過對各種腫瘤細胞增殖期標志物的檢測可以準確客觀反映腫瘤的增殖潛能。目前關于鼻腔鼻竇惡性腫瘤的分子生物學發病機制目前尚不清楚，而PCNA和C-erbB-2和重要的反應細胞增值活性的標志物，可以用來對疾病情況進行評估等，因此被廣泛應用于對鼻腔及鼻竇鱗狀細胞癌的臨床檢測之中[4-5]。C-erbB-2原癌蛋白又被稱為neu或者HER-2基因，原本是細胞正常生命活動的必要蛋白，然而其發生結構變異或過度表達時則往往導致癌變[6]。C-erbB-2過度表達見于多種惡性腫瘤，具有較強的免疫原性，并定位于細胞膜表面的特性。C-erbB-2基因所編碼的蛋白是分子量為185kDa的穿膜蛋白，可以抑制酪氨酸激酶活性，該基因的過度表達和擴增可見于多種腫瘤，與腫瘤的分化程度和分級有密切關系。在機體處于正常狀態的時候，C-erbB-2原癌蛋白處于非激活狀態，并參與到機體的多種活動之中，例如細胞生長和細胞分化調節等[7-8]。在正常的組織中，C-erbB-2原癌蛋白表達大多發生在上皮細胞膜。但如果人體出現異常，便會出現C-erbB-2異常表達的情況[9]。有學者通過研究發現[10]，如果采用免疫組化SP法檢測乳腺癌組織中C-erbB-2表達情況，并結合臨床病理特征進行相關性分析，可以發現C-erbB-2表達與淋巴結轉移、雌激素受體、孕激素受體相關，并認為，C-erbB-2檢測對判斷乳腺癌預后有重要意義。本次研究結果顯示，各級鼻腔鼻竇鱗癌之中C-erbB-2均有表達，較之正常對照鼻腔黏膜差異均有統計學意義，且有隨鱗癌分級升高表達不斷增強的趨勢。即說明，C-erbB-2參與到了細胞增殖過程，在促進細胞增殖方面發揮出重要的作用，其反常表達可能與鱗癌細胞的惡性發展之間存在一定的關系。PCNA是一種細胞周期調控蛋白，參與到了DNA的合成過程。PCNA在核中的水平從G1，后期開始上升，先于DNA的合成，S期達到高峰，G2期開始下降，M期和靜止期維持最低水平。PCNA 被認為是多種細胞內過程的聯系點，包括細胞周期控制、DNA復制、核苷酸切除修復、復制后錯配修復、堿基切除修復和至少一種凋亡途徑等[11-12]。PCNA的表達程度可以較為直觀的反應出不同腫瘤的增殖活性。趙醒[13]等應用免疫組織化學SP法分別檢測150例食管鱗癌組織和35例正常食管黏膜組織(距離癌灶邊緣5 cm以上經病理證實)中PCNA蛋白的表達情況。結果發現，PCNA蛋白在正常食管黏膜組織中的表達明顯低于食管鱗癌組織(P<0.05)。并認為，PCNA蛋白過表達可能與食管鱗癌的發生、發展以及浸潤轉移有關。本次研究結果顯示，各級鼻腔鼻竇鱗癌之中，PCNA均有表達，較之正常對照鼻腔黏膜差異均有統計學意義，且有隨鱗癌分級升高表達不斷增強的趨勢。即說明，腫瘤細胞分裂、增殖十分活躍，PCNA蛋白的表達也隨之出現顯著增強的情況，表明PCNA可能與鱗癌細胞的惡性發展之間存在一定的關系，提示臨床可以將PCNA作為對鼻腔鼻竇鱗癌惡性程度進行判定的生物學指標之一。本次研究結果還顯示，在鱗癌中的表達，PCNA和C-erbB-2經χ2檢驗不存在顯著的相關性。但2者均出現過度表達的情況，且與鼻腔鼻竇鱗癌的分化程度之間存在一定的關系。即說明，PCNA和C-erbB-2可能通過不同的信號傳導途徑對細胞增殖產生影響，并積極的參與到鼻腔鼻竇鱗癌的發生發展過程中。另外，本研究利用免疫組織化學法進行PCNA和C-erbB-2表達情況的檢測，獲得了良好的研究結果。但是，所使用的病理標本可能受到存檔蠟塊時間的影響而出現腫瘤細胞表面抗原丟失的情況[14]。因此可能存在抗原分布不均的現象，導致一定研究誤差的出現。因此，本研究還存在一些缺陷和不足，還需要在今后的研究中予以不斷完善。

綜上所述，PCNA和C-erbB-2的表達均能夠反映出鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌的增殖活性，且其表達強度可以反映出鱗癌細胞的增殖活性高低。提示PCNA和C-erbB-2在鼻腔鼻竇鱗狀細胞癌的發生發展中起到了一定的作用，可以用來對臨床治療和預后等提供一定的參考依據。

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(編校：譚玲)

Study on the expression of PCNA and C-erbB-2 in nasal cavity paranasal sinus squamous cell carcinoma and it clinical significance

LU Hong-lue1,MI Yang1,LIANG Yuan1,KANG Fei2

(1.Department of Otorhinoloaryngology, Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Chengde 067000, China;2.Department of physical Examination,Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Chengde 067000,China)

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)and oncogene protein (C-erbB-2)in the nasal cavity paranasal sinus squamous cell carcinoma.MethodExpression of PCNA and C-erbB-2 were tested in 45 cases of the nasal cavity paranasal sinus squamous cell carcinoma by the immunohistochemical method, and 15 cases of normal nasal mucosa were selected as the normal control.ResultsAll levels of sinonasal squamous cell carcinoma, PCNA and C-erbB-2 expressed in nasal mucosa, and compared with the normal control group, the differences were statistically significant (P<0.05), and with the increasing grade of squamous, cell carcinoma expression increased.But expression in squamous cell carcinoma, PCNA and C-erbB-2 had no significant correlation. ConclusionExpression of PCNA and C-erbB-2 can reflect the sinonasal squamous cell carcinoma proliferation activity, and the expression can reflect the proliferation activity of squamous cell carcinoma.

sinus nasal squamous cell carcinoma; proliferating cell nuclear antigen;oncogene protein

陸鴻略，男，碩士，主治醫師，研究方向：鼻部腫瘤的研究，E-mail:luhonglue@126.com。

R739.6

A

1005-1678(2015)01-0094-03