脂餐負荷前后IL 8、IL 10動態變化與動脈硬化關系的研究

鄭曉麗,靳春榮,陳 武,白 濤,呂吉元,梁建芳

脂餐負荷前后IL 8、IL 10動態變化與動脈硬化關系的研究

鄭曉麗1,靳春榮2,陳 武2,白 濤2,呂吉元2,梁建芳2

目的研究動脈硬化過程中脂餐負荷前后IL-8、IL-10變化規律及其與動脈硬化的關系。方法高脂飼養健康雄性新西蘭大白兔12周,于實驗初始及4周、8周、12周脂餐負荷前及負荷后2 h、4 h、6 h、8 h耳緣靜脈采血測定血漿IL-8、IL-10水平,同期超聲觀察腹主動脈硬化情況。結果 實驗初始及4周時,脂餐負荷后IL-8、IL-10水平先升高后降低,以餐后4 h、6 h明顯升高(P<0.05);實驗8周時IL-8餐后2 h、4 h、6 h IL-8水平較空腹略高(P<0.05),IL-10水平無統計學意義(P>0.05);實驗12周時IL 8水平在脂餐負荷前后無統計學意義(P>0.05),IL-10水平先升高后逐漸下降,餐后8 h略低于負荷前水平(P<0.05)。結論 動脈硬化早期存在促炎因子與抗炎因子的失衡,且在動脈硬化過程中,脂餐負荷對動脈硬化早期炎癥反應影響較大。

動脈硬化;脂餐負荷;白細胞介素-8;白細胞介素-10;新西蘭大白兔

動脈粥樣硬化(AS)是血管內皮受損后的慢性炎癥反應過程,炎癥參與了動脈粥樣硬化的啟動及動脈粥樣硬化的全過程。炎癥因子是AS的危險因子,根據不同的調節作用分為促炎細胞因子和抗炎細胞因子,其中白細胞介素-8(IL-8)被認為是關鍵的慢性血管促炎因子,通過趨化和激活中性粒細胞、分泌黏附分子,參與AS的形成;而IL-10是抗炎細胞因子,具有抗動脈硬化作用及心肌細胞保護作用。脂質代謝異常是AS最重要的危險因素,高膽固醇飲食能引起高血脂和誘發動脈粥樣硬化,且“餐后階段是致動脈粥樣硬化的關鍵時期”,餐后存在高炎癥反應狀態。本研究觀察動脈硬化中脂餐負荷前后兔血漿IL-8、IL-10水平變化,探討脂餐負荷對動脈硬化及炎癥因子的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象 健康雄性新西蘭大白兔10只,3月齡,體重2.5 kg~3.0 kg,由山西醫科大學實驗動物中心提供,飼料由山西省畜研所提供,飼養于山西醫科大學法醫實驗中心。

1.2 AS模型建立 所有動物單籠,自由飲水,在室溫(18~20)℃、基礎飼料相同(100~120)g/d條件下適應性喂養1周。然后給予高脂飲食(含1%膽固醇, 8%蛋黃,91%基礎飼料)飼養12周。

1.3 血漿IL-8、IL-10測定 實驗初始及4周、8周、12周空腹12 h后予脂餐負荷(含2%膽固醇,8%蛋黃,90%基礎飼料),負荷前及負荷后2 h、4 h、6 h、8 h耳緣靜脈采血2 mL置于EDTA抗凝管,離心15 min (1 000 xg),取上層血漿凍存于-80℃低溫冰箱。實驗結束時,采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測血漿IL-8、IL-10水平。

1.4 超聲檢查 實驗初始及4周、8周、12周肌注速眠新Ⅱ(0.1 mL/kg)麻醉后,采用(7~10)MHz高頻血管探頭檢測腹主動脈,觀察管壁是否光滑、管腔是否狹窄,內-中膜厚度(IMT)及斑塊的大小,并記錄。

1.5 病理檢查 實驗結束時,用25%烏拉坦(5 mL/ kg)靜脈麻醉動物后,取仰臥位固定于解剖臺,分離、截斷腹主動脈,10%多聚甲醛固定,常規脫水、石蠟包埋、切片、HE染色,電鏡觀察血管硬化情況。

1.6 統計學處理 采用SPSS 13.0軟件,計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用雙時間因素重復測量法分析。P<0.05為有統計學意義。

2 結 果

研究結束時,10只動物均出現了腹主動脈粥樣硬化。動脈硬化過程中,脂餐負荷前后血漿IL-8、IL-10變化情況。詳見表1、表2。

表1 動脈硬化過程中脂餐負荷前后IL-8變化(±s)ng/L

表1 動脈硬化過程中脂餐負荷前后IL-8變化(±s)ng/L

時間空腹餐后2 h餐后4 h餐后6 h餐后8 h初始 68.34±7.30 76.03±8.561)84.45±9.871)86.88±7.001)68.20±4.97第4周97.55±5.452)101.25±3.921)105.98±5.871)103.94±6.34 98.62±6.49第8周74.04±7.06 78.42±9.841)82.66±7.051)83.55±10.811)75.53±9.641)第12周70.12±7.29 69.79±10.90 75.29±10.29 74.83±10.27 69.30±9.58同周不同時點LSD多重比較,1)P<0.05;不同周空腹與初始空腹相比,2)P<0.01。

表2 動脈硬化過程中脂餐負荷前后IL-10變化(±s)ng/L

表2 動脈硬化過程中脂餐負荷前后IL-10變化(±s)ng/L

時間空腹餐后2 h餐后4 h餐后6 h餐后8 h初始 108.73±13.15 124.59±18.651)138.79±18.151)136.64±14.641)121.36±15.451)第4周125.11±16.362)133.21±26.67 143.74±19.211)139.92±20.741)137.03±18.611)第8周120.39±16.322)125.02±15.81 125.82±16.25 129.44±6.27 115.86±11.42第12周113.71±13.04 122.27±12.931)124.86±11.521)121.06±13.871)104.66±13.081)同周不同時點比較,1)P<0.05;不同周空腹與初始空腹相比,2)P<0.01。

3 討 論

動脈粥樣硬化早期病變受到動脈壁中多種炎癥因子、細胞因子的調節。Peters等[1]研究證實,IL-8等趨化因子及其特異性受體在AS中起重要作用。Moreau等[2]研究證實,IL-8參與早期的動脈粥樣硬化形成。Mo lad等[3]證實,IL-8具有促動脈粥樣硬化作用。本研究發現,實驗初始(無動脈硬化時)脂餐負荷后2 h、4 h、6 h IL-8水平較負荷前升高,8 h恢復至負荷前水平;實驗4周、8周時,脂餐負荷后IL-8水平略升高;實驗12周時血漿IL-8水平略降低,脂餐負荷前后變化無統計學意義。結果表明在AS進程中IL-8水平先升高后逐漸降低,AS早期脂餐負荷后IL-8水平升高明顯,提示促炎因子IL-8主要參與AS早期的炎癥反應,且脂餐負荷對AS早期炎癥反應影響較大。

IL-10是由Th2細胞產生的一種單鏈糖蛋白,是目前公認的炎癥及免疫抑制因子。IL-10能夠抑制炎癥因子的激活;抑制促炎轉錄因子核因子-κB(NK-κB)的活性,減少其他炎癥介質的合成[4];抑制IL-1、IL-18的促動脈粥樣硬化作用;影響ox-LDL在血管壁沉積。Nishihira等[5]研究證實,IL-10具有抗動脈硬化及穩定粥樣斑塊的作用。Smith等[6]研究發現,穩定型心絞痛患者血漿IL-10水平明顯高于不穩定性心絞痛患者。Ma llat等[7]動物實驗發現,IL-10基因缺如的小鼠較野生型小鼠更易發生AS。Rubie等[8]研究證實,IL-10能阻止膽固醇生成,增加膽固醇輸出,啟動逆向轉運,降低血清膽固醇水平,發揮其抗動脈硬化作用。本研究發現,實驗初始及4周時,脂餐負荷后血漿IL-10水平較空腹時升高,以4 h升高明顯;實驗12周時,IL-10水平先略升高后降低,餐后8 h低于空腹水平。在AS過程中,實驗4周、8周時空腹IL-10水平較初始時升高,以4周時升高明顯。IL-8、IL-10與AS的慢性炎癥過程有著密切的關系,其主要參與動脈硬化早期炎癥反應,且脂餐負荷后二者的表達水平升高。

由于本研究受樣本量和時間所限,關于脂餐負荷對AS早期及進展中促炎因子、抗炎因子的影響,尚需進一步深入研究。

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R543 R255

:A

10.3969/j.issn.1672-1349.2015.07.010

1672-1349(2015)07-0891-02

2015-03-16)

(本文編輯王雅潔)

山西省自然科學基金支持(No.2014011040-6)

1.山西醫科大學(太原030001);2.山西醫科大學第一醫院

靳春榮,E-mail:jinchunrong525@sina.com