HPLC法測(cè)定前列回春丸中虎杖苷的含量

胡麗霞等

【摘 要】 目的：建立前列回春丸中虎杖苷含量測(cè)定的方法。方法：Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：306nm；流動(dòng)相：乙腈-水（19∶81）；柱溫：30℃；流速：1ml/min條件下，采用高效液相色譜法測(cè)定虎杖苷的含量。結(jié)果：虎杖苷進(jìn)樣量在0.0394～0.4334μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998，n=6），平均回收率為98.85%（RSD=1.08%，n=6）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便易行、重現(xiàn)性好，可作為前列回春丸質(zhì)量控制方法。

【關(guān)鍵詞】 前列回春丸；虎杖苷；高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R284.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2015）12-0003-02

前列回春丸（濃縮丸）是在前列回春膠囊[1]的基礎(chǔ)上進(jìn)行劑型改革而進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的新制劑，配方主要由虎杖、淫羊藿、炮山甲等十九味中藥組成，具有益腎回春、活血通淋、清熱解毒的功效。虎杖苷又名白藜蘆醇苷，為虎杖的主要有效成分，具有抗癌、抗菌消炎、抗氧化等生物活性。原膠囊劑標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有含量測(cè)定項(xiàng)目，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定前列回春丸中虎杖苷的含量，為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC-10AT，檢測(cè)器SPD-10A，浙大N2000軟件）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ-300DE型，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料 前列回春丸（規(guī)格：每8丸相當(dāng)于原生藥3g，本院制劑中心制備）；虎杖苷對(duì)照品（批號(hào)：111575-200301，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：306nm；流動(dòng)相：乙腈-水（19∶81）；柱溫：30℃；流速：1ml/min；靈敏度為0.08 AUFS；理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算不低于3000。避光操作。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取經(jīng)五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h的虎杖苷對(duì)照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成17.39μg/ml的溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取本品20丸，研細(xì)，取細(xì)粉約1.5g，精密稱定，置50ml具塞棕色錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，精密稱定，超聲處理（300W，40kHz）30min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按照處方量稱取除虎杖外的所有組分制備虎杖陰性對(duì)照樣品，余同“2.2.2”操作，即得。

2.3 專屬性考察 分別取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品、供試品、陰性對(duì)照溶液各20μl，在“2.1”項(xiàng)之色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。從圖1可見(jiàn)，虎杖苷色譜峰峰形對(duì)稱，供試品色譜圖中虎杖苷峰能與其它成分很好地分離，陰性對(duì)照溶液在虎杖苷峰處基本無(wú)干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取經(jīng)五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h虎杖苷對(duì)照品7.88mg置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10ml置100ml棕色量瓶中加稀乙醇至刻度并搖勻，精密吸取1、3、5、7、9、11ml分別置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度并搖勻，精密吸取6種質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以注入的虎杖苷對(duì)照品量為橫坐標(biāo)（μg，X）、峰面積為縱坐標(biāo)（Y），作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=517999X -568.85，r=0.9998（n=6）。結(jié)果，虎杖苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.0394～0.4334μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20μl，峰面積RSD分別為0.98%、1.79%。表明儀器的精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品（批號(hào)：121101）溶液20μl，分別在0、2、4、8、12、14h測(cè)定虎杖苷的峰面積。RSD值為1.91%，表明供試品溶液在14h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取前列回春丸（批號(hào)：121101）6份，按“2.2”制備溶液，精密吸取溶液20μl注入色譜儀，測(cè)定，含量平均值128.00μg/g，RSD值1.30%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取前列回春丸（批號(hào)：121101）6份，每份20丸，研細(xì)，取細(xì)粉約0.75g，精密稱定，精密加入同一濃度的虎杖苷對(duì)照品溶液1ml，余按“2.2”制備成供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算供試品中虎杖苷的回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 供試品含量測(cè)定 取3批供試品（批號(hào)：121101、121102、121103），分別按“2.2”制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液20μl，注入色譜儀，測(cè)定，結(jié)果虎杖苷含量分別為128.00、128.92、127.17μg/g。

3 討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2-5]，供試液制備中所用的溶劑有甲醇與稀乙醇，雖然用甲醇時(shí)其他峰相對(duì)小及少些，但從環(huán)保考慮，在分離度能達(dá)到要求的前提下選取稀乙醇為佳。檢測(cè)波長(zhǎng)及流動(dòng)相的選擇參考文獻(xiàn)[2，4]選定檢測(cè)波長(zhǎng)：306nm，流動(dòng)相：乙腈-水。本制劑為復(fù)方制劑，化學(xué)成分較多，通過(guò)調(diào)整，采用乙腈-水（19∶81）為流動(dòng)相時(shí)，虎杖苷與其他成分能達(dá)到有效分離，分離度較好，色譜系統(tǒng)穩(wěn)定。方法學(xué)研究表明，用HPLC法測(cè)定前列回春濃縮丸中虎杖苷的含量，操作方便，專屬性強(qiáng)，可作為前列回春濃縮丸的質(zhì)量控制方法。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第17冊(cè)[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：175.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：194-195.

[3] 柯長(zhǎng)青，蔣永海.高效液相色譜法測(cè)定金膽片中虎杖苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2006，15（13）：33-34.

[4] 彭紹沖，李耿，蔡大可，等.高效液相色譜法測(cè)定痹痛消膏中虎杖苷的含量[J].藥物分析雜志，2007，27（11）：1725-1727.

[5] 楊海燕，張成.高效液相法測(cè)定朱砂七中虎杖苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（10）：29-30.

（收稿日期：2015.04.19）