4種方法檢測梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析

錢 超 穆 琪 霍俊杰 余建華

4種方法檢測梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析

錢 超 穆 琪 霍俊杰 余建華

目的 評價酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）和化學發(fā)光法（TP-CLIA）、梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）和甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）在手術(shù)和輸血前梅毒螺旋體抗體檢測中的應用價值，并分析不同年齡段患者梅毒螺旋體抗體陽性率。方法 用ELISA法檢測7656例手術(shù)和輸血前住院患者血清中的梅毒螺旋體抗體，篩查出的陽性樣本再采用CLIA法、TPPA法和TRUST法進行檢測；對ELISA法的檢測結(jié)果（S/CO值）和CLIA的法檢測結(jié)果（S/CO值）進行相關(guān)性分析；對于TPPA確診試驗陽性標本按年齡段分組，分析不同年齡段梅毒螺旋體抗體陽性率有無差異。結(jié)果 ELISA法檢測出梅毒螺旋體抗體陽性標本173例，總陽性率為2.26%（173/7656）；CLIA法、TPPA法和TRUST法檢測梅毒螺旋體抗體陽性符合率分別為100%（173/173）、99.42%（172/173）和29.48%（51/173）。相關(guān)性分析顯示ELISA法和CLIA檢測結(jié)果（S/CO值）呈顯著正相關(guān)（r=0.711,P＜0.001）。梅毒螺旋體抗體陽性率隨年齡增長而增高，60歲以上老年人陽性率顯著高于其他人群（P＜0.05）。結(jié)論 ELISA法和CLIA法是手術(shù)和輸血前梅毒螺旋體抗體篩查的可靠方法，但須行TPPA確診試驗；TRUST法不適用于梅毒螺旋體抗體的篩查，適宜療效觀察；梅毒螺旋體抗體陽性率隨著年齡增長而增高，要慎重對待老年人梅毒試驗陽性結(jié)果。

梅毒螺旋體；酶聯(lián)免疫吸附試驗；化學發(fā)光法；梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗；甲苯胺紅不加熱血清試驗

梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的性傳播疾病，主要通過性接觸和血液傳播， 具有高度傳染性和很強致病性，可侵犯全身臟器，造成多種器官病變，功能失常。近年來，梅毒發(fā)病率有明顯上升趨勢，防治工作任重道遠[1]。梅毒早期臨床表現(xiàn)復雜，易被漏診誤診。因此，實驗室檢測對于梅毒的診斷治療具有重要意義。目前，實驗室診斷梅毒螺旋體感染的血清學檢測方法主要有：酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、化學發(fā)光法（CLIA）、明膠顆粒凝集法（TPPA）、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）和快速血漿反應素試驗（RPR）。梅毒螺旋體抗體測定CLIA法是國內(nèi)近年用于臨床的梅毒血清學特異性抗體檢測方法，敏感性和特異性都很高[2-3]。本文用ELISA法對7656例手術(shù)和輸血前住院患者血清標本進行梅毒螺旋體抗體檢測，陽性標本再采用CLIA法、TPPA法、TRUST法檢測，對4種方法的檢測結(jié)果進行比較和分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取解放軍454醫(yī)院2013年7月～2014年2月手術(shù)和輸血前住院患者血清樣本共7656例（不含復查）。男5004例（65.36%），女2652例（34.64%）；59歲以下4676例（61.08%），60歲以上2980例（38.92%）；年齡14～98歲，中位年齡51.8歲。

1.2 儀器與試劑 ADALTIS全自動酶免分析儀（意大利亞特斯公司，型號：NEXGEN Four）；科美全自動化學發(fā)光免疫分析儀（北京科美生物技術(shù)有限公司，型號：CHEMCLIN 600）；TPPA診斷試劑(日本富士瑞必歐株式會社，批號：VN30419)；ELISA診斷試劑(上海科華生物工程股份有限公司，批號：20130512)；CLIA診斷試劑(北京科美生物技術(shù)有限公司，批號：20130408)；TRUST診斷試劑(上海榮盛生物藥業(yè)有限公司，批號20130522)。

1.3 方法 臨床送檢的7656份標本及時分離血清后，4℃保存，次日進行ELISA法檢測。ELISA法檢測出的陽性標本再用CLIA法、TPPA法和TRUST法進行檢測。所有操作步驟都嚴格按照操作說明進行。ELISA法和CLIA法以S/CO值≥1判定為陽性。對陽性標本的ELISA法檢測結(jié)果（S/CO值）與CLIA法檢測的（S/CO值）進行相關(guān)性分析。7656例送檢標本按年齡分為20歲以下、20～29歲、30～39歲、40～49歲、50～59歲、60～69歲、70～79歲、80歲以上共8組，分別統(tǒng)計TPPA確診試驗陽性率。

1.5 統(tǒng)計學方法 全部數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包處理。計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗，ELISA法和CLIA法檢測結(jié)果相關(guān)性采用Pearson 直線相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 7656例手術(shù)和輸血前患者ELISA方法檢測出陽性標本173例，總陽性率為2.26%（173/7656）。173例ELISA陽性標本其他3種檢測方法結(jié)果見表1。

表1 173例ELISA陽性標本其他3種檢測方法結(jié)果

2.2 ELISA法和CLIA法檢測結(jié)果相關(guān)性分析 檢測結(jié)果顯示173例樣本ELISA法測得的S/CO值=（13.02±7.14），CLIA法測得的S/CO值=（19.02±14.36），相關(guān)性分析顯示二者呈顯著正相關(guān)（r=0.711,P＜0.001）。

2.3 各年齡段梅毒螺旋體抗體陽性率 TPPA確診試驗陽性率統(tǒng)計結(jié)果顯示：60歲及以上老年人梅毒螺旋體抗體陽性率為3.76%（112/2980）,60歲以下人群的陽性率1.28%（60/4676），二者差異有統(tǒng)計學意義（χ2=50.777，P＜0.05）。隨著年齡的增長，梅毒螺旋體抗體陽性率呈逐漸增高趨勢。見表2。

表2 各年齡段TPPA確診梅毒螺旋體抗體陽性率

3 討論

梅毒是人體感染蒼白密螺旋體后引起的全身性疾病，主要通過性傳播、母嬰垂直傳播和血液傳播。住院期間手術(shù)和輸血患者可通過手術(shù)器械和輸血傳播，為確保安全輸血，減少不必要的醫(yī)療糾紛，梅毒螺旋體抗體檢測已成為手術(shù)和輸血前的常規(guī)感染指標檢測項目之一[4]。

梅毒螺旋體侵入機體后可產(chǎn)生抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體和抗類脂抗原的非特異性抗體。目前，國內(nèi)檢測梅毒螺旋體抗體主要方法有ELISA法、CLIA法和TPPA法，其中TPPA法主要用于篩檢陽性標本的確診試驗。EIISA法是利用基因重組梅毒螺旋體的特異性抗原TP17和TP47包被微孔板，采用雙抗原夾心法檢測梅毒螺旋體特異性IgM和IgG抗體。此方法可以用全自動酶免儀進行批量檢測，是篩查和檢測梅毒螺旋體抗體的一種良好方法。CLIA法作為國內(nèi)新開發(fā)的梅毒螺旋體特異性抗體檢測方法，使用多種梅毒螺旋體特異性抗原制備固相抗原，辣根過氧化物酶標記的相同蛋白作為標記抗原，與樣本中的梅毒螺旋體抗體形成雙抗原夾心。經(jīng)洗滌后加入發(fā)光底物液，測定其發(fā)光強度，根據(jù)S/CO值判斷樣品中是否含有梅毒螺旋體特異性抗體[5]。該法靈敏度和特異性都很高，無攜帶污染現(xiàn)象，可在全自動化學發(fā)光儀上檢測，自動化程度高，值得在臨床推廣。TPPA法是將梅毒Nichols株的精制菌體成分包被在人工載體明膠顆粒上，對梅毒特異性抗體檢測具有高度特異性和敏感性，是目前公認的梅毒確診試驗，但結(jié)果須人工判讀，不適宜進行大樣本量檢測，限制了其在批量標本篩查中的應用。檢測非特異性類脂抗體的方法主要有TRUST法和RPR法。TRUST法用類脂質(zhì)抗原制成，所測為抗類脂抗體，操作簡便、費用低廉，肉眼判讀。因TRUST法為非特異性梅毒螺旋體抗原抗體反應，存在一定假陽性和假陰性，許多學者認為TRUST已不再適合梅毒篩查試驗。但TRUST試驗滴度與病程有關(guān)，當感染者在接受治療后或疾病處于非活動期期間是，TRUST滴度下降，而梅毒復發(fā)時則會轉(zhuǎn)陽，滴度升高。因此TRUST試驗在觀察病程和療效方面有重要價值[6-7]。

本實驗檢測結(jié)果顯示，應用ELISA法檢測出的梅毒螺旋體抗體總陽性率為2.26%，CLIA法和ELISA法的陽性符合率達100%。TPPA確診試驗發(fā)現(xiàn)1例為假陽性，假陽性率0.58%。相關(guān)性分析顯示CLIA法和ELISA法的檢測結(jié)果呈高度正相關(guān)。值得注意的是TRUST試驗符合率僅為29.5%，和CLIA法和ELISA法檢出的陽性率存在明顯差異，這和文獻報道較為一致[8]。分析原因，TRUST法為非特異血清學試驗，在早期和晚期梅毒及梅毒治療后患者可呈陰性反應。而ELISA法和CLIA法對各期梅毒均有較高的敏感性和特異性。且梅毒螺旋體抗體即使經(jīng)過抗梅毒治療后，仍可呈持續(xù)陽性，甚至終身存在。

本文研究發(fā)現(xiàn)60歲及以上老年人梅毒螺旋體抗體陽性率3.76%,遠高于60歲以下人群的1.28%，且年齡越大，陽性率越高。無疑，梅毒血清學試驗陽性的老年人中，有一些人確實曾經(jīng)或正患梅毒，但相當一部分陽性者則沒有梅毒診斷的任何依據(jù)。文獻報道，與人類共生的螺旋體有很多，包括口腔螺旋體、皮膚相關(guān)的螺旋體、腸道螺旋體等，這些螺旋體可能不治病，也可能參與齒齦類、牙周病、腹瀉等的發(fā)病。它們在人體中可誘導產(chǎn)生抗屬、群或科特異性抗原交叉反應抗體，可與試劑盒中的梅毒螺旋體特異性抗原反應，從而造成假陽性[9]。因此，梅毒血清學試驗不能作為感染梅毒螺旋體的絕對依據(jù)，檢測結(jié)果應結(jié)合臨床綜合判斷分析[10]。

綜上所述，ELISA法合CLIA法都可成為梅毒抗體篩查的可靠方法，但須行TPPA確診試驗。而TRUST是非特異性試驗，適宜用于療效觀察。老年人的梅毒螺旋體抗體陽性率增高，由于方法學的局限，可能存在一定的假陽性，應結(jié)合臨床綜合判斷分析。

參考文獻

[1] Tucker JD,Cohen MS.China’s syphilis epidemic∶epidemiology,proximate determinants of spread,and control response[J].Curr Opin Infect Dis,2011,24(1)∶50-55.

[2] 房華,吳燕芬,汪瑞忠，等.全自動化學發(fā)光免疫分析儀在梅毒螺旋體抗體檢測中的臨床應用[J].中國皮膚性病學雜志,2010，24(7)：671-672.

[3] 楊永泉，石玉玲，徐少珊，等.化學發(fā)光法在梅毒實驗診斷中的應用價值[J].生物技術(shù)通訊，2012,23（2）∶258-259.

[4] 張德藝.患者輸血前感染性指標檢測結(jié)果及意義[J].河北醫(yī)藥，2014,36（9）∶1387-1388.

[5] 蔣郁青，謝志賢，方雯丹，等.國產(chǎn)試劑化學發(fā)光法檢測梅毒螺旋體抗體的臨床評價[J].中華試驗和臨床病毒學雜志，2013，27(4)：307-309.

[6] 徐龍珍，畢永春.不同梅毒血清學檢測方法的聯(lián)合應用評價[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2009，24(3)∶111-112.

[7] 李楚潮.ELISA，RPR、Trust、TPPA四種方法檢測梅毒螺旋體抗體的結(jié)果分析[J].當代醫(yī)學，2010，16(20)∶9-10.

[8] 羊建，唐明霞.不同梅毒螺旋體抗體檢測方法的臨床應用評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2011,32（14）：1579-1580.

[9] 徐傳和，李琳，鄭連榮，等.老年人梅毒抗體檢測假陽性率偏高的臨床分析[J].中國老年學雜志，2012,32（7）∶1495-1497.

[10] 朱守蘭，邢麗華，杜華杰，等.老年患者梅毒螺旋體抗體陽性臨床分析[J].武警醫(yī)學，2011,22（9）：786-787.

Objective To analyze the clinical performance of sysphilis antibody detection by the enzyme-linked immunosorbent assay (TPELISA),chemiluminescent assay（CLIA）, Treponema pallidum gelatin particle agglutination test (TPPA) and toluidine red unheated serum test（TRUST） in the patient before blood transfusion and operation in hospital, and further to analyze the difference of sysphilis antibody positive rates in different age groups. Methods TP-ELISA were applied to detect TP antibody in 7656 patients before blood transfusion and operation in hospital, the positive samples were further detected by CLIA, TPPA and TRUST. And correlation analysis was performed between the results(S/CO) detected by ELISA and the results(S/CO) detected by TP-CLIA. The positive sample confirmed by TPPA were divided in different age groups, and the positive rates of different age groups were analyzed. Results 173 positive samples were screened out by TP-ELISA, the total positive rates was 2.26%（173/7656）.With the methods of CLIA, TPPA and TRUST, The positive coincidence rates were 100%（173/173）, 99.42%（172/173）and 29.48%（51/173）,respectively. There was a significant correlation between the S/CO value of TP-ELISA and that of TP-CLIA（r=0.711,P＜0.01）.The positive rate of sysphilis antibody increased with the growth of age, and the positive rate of elder people over 60 years was significantly higher than that of the other people（P＜0.05）. Conclusion TP-ELISA and TP-CLIA could be a good screening test for TP antibody detection, but TPPA confirmation test must be performed. TRUST might be not suitable for screening sysphilis antibody, but it could be beneficial for judging therapeutic effect. The positive rates of sysphilis antibody increased with the growth of age, and it is important to handle the positive results of sysphilis antibody in elder patients carefully.

Treponema pallidum; Enzyme-linked immunosorbent assay; Chemiluminescence; Treponema pallidum gelatin particle agglutination test; Toluidine red unheated serum test

doi∶10.3969/j.issn.1009-4393.2015.13.002

江蘇 210002 解放軍454醫(yī)院檢驗科 （錢超 穆琪 霍俊杰余建華）