SORL1基因多態(tài)性與散發(fā)性阿爾茨海默病的關(guān)聯(lián)分析

王 健 楊軍平 陳 潔

SORL1基因多態(tài)性與散發(fā)性阿爾茨海默病的關(guān)聯(lián)分析

王 健 楊軍平 陳 潔

目的 探討SORL1基因多態(tài)性與散發(fā)性阿爾茨海默病的關(guān)聯(lián)。方法 選取診斷為阿爾茨海默病的住院患者50例為研究組，社區(qū)健康老年人50例為對照組，比較2組SORL1基因型及等位基因。結(jié)果 研究組與對照組SORL1基因型（AG、AA、GG）分別為（50%、32%、18%；24%、16%、60%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；研究組與對照組等位基因（G、A）分別為（44、56；22、78），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。研究組70～80歲人群與對照組70～80歲人群的SORL1基因型（AG、AA、GG）分別為（48%、28%、24%；24%、14%、62%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；研究組與對照組等位基因（G、A）分別為（42、58；28、72），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。研究組＞80歲人群與對照組＞80歲人群的SORL1基因型（AG、AA、GG）分別為（54%、26%、20%；20%、17%、63%），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；研究組與對照組等位基因（G、A）分別為（48、52；16、84），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 中國人群SORL1基因rs2282649位點的多態(tài)性與散發(fā)性阿爾茨海默病可能有關(guān)聯(lián)。

阿爾茨海默病；SORL1基因；多態(tài)性

阿爾茨海默病是退行性腦變性病，病因不明[1]。阿爾茨海默病患者多是散發(fā)性，少數(shù)為家族性。前者發(fā)病與環(huán)境因素和多個基因共同作用。研究發(fā)現(xiàn)獲得性或遺傳性的SORL1受體表達改變,可能是阿爾茨海默病發(fā)病的機制[2-4]。本研究的目的為檢測散發(fā)性阿爾茨海默病患者SORL1基因進行檢測，試圖發(fā)現(xiàn)散發(fā)性阿爾茨海默病與SORL1基因多態(tài)性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年7月～2014年6月江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院診斷為阿爾茨海默病的住院患者50例（男32例，女18例）為研究組，年齡64～86歲，平均年齡（74.1±10.3）歲；社區(qū)健康老年人50例（男30例，女20例）為對照組，年齡63～88歲，平均年齡（73.6±12.1）歲。2組人員性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 入選標準及排除標準 入選標準：所有入院后的臨床資料、治療經(jīng)過完整，就診時生命體征平穩(wěn)，每個阿爾茨海默病患者無親緣關(guān)系，呈散發(fā)病例；研究組簡易智力狀態(tài)檢查量表(MMSE)：中學畢業(yè)患者總分＜24分，小學畢業(yè)總分＜20分，文盲總分＜20分。排除指標：入院時生命體征不平穩(wěn)的患者；有各種急性、慢性感染,嚴重肝、腎功能不全，惡性腫瘤，自身免疫性疾病者，惡性心律失常者。

1.3 研究方法

1.3.1 SORL1基因位點 SORL1基因的多態(tài)性位點接近5’端rs2282649(A/G)SNP。

1.3.2 上游引物 5cCATGATCCAAATTATATGTGAAAAATTCAAT 3c，錯配引物設(shè)計,將A轉(zhuǎn)換為 C，引入一個MunI的酶切識別序列：CDAATTG；下游引物：5cCCCAAGAACATCAGGACACCAAC 3c，擴增產(chǎn)物長度為：181bp。

1.3.3 PCR條件 96℃預變性6min,按97℃進行50s，65℃進行30s，73℃進行1min，反復循環(huán)30次,最后1次循環(huán)到73℃時，延伸6min，2%的瓊脂糖凝膠電泳（含EB）檢測產(chǎn)物。

1.3.4 SORL1基因rs2282649(A/G)SNP MunI限制性片段長度多態(tài)性分析 MunI內(nèi)切酶加入擴增產(chǎn)物中，加上緩沖液，37℃消化2.5h。在瓊脂糖凝膠上進行電泳，分離片段。溴化乙啶染色，電泳結(jié)果用紫外透射反射儀觀察。

1.4 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行處理。計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，計數(shù)資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 SORL1基因rs2282649位點A/G多態(tài)性檢查 G等位基因為MunI酶切識別點位，結(jié)果有三種基因型：AA型，只有1個181bp片段；GG型，酶切后顯示2個片段：28bp和153bp；AG有3個28bp、153bp、181bp片段。見圖1。

圖1 SORL1基因rs2282649位點A/G多態(tài)性檢查

2.2 研究組與對照組SORL1基因型以及等位基因比較研究組與對照組SORL1基因型及等位基因，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2組SORL1基因型及等位基因比較

2.3 不同年齡的研究組與對照組SORL1基因型以及等位基因比較 研究組（70～80歲及＞80歲）人群與對照組（70～80歲及＞80歲）人群的SORL1基因型和等位基因比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同年齡的研究組與對照組SORL1基因型及等位基因比較

3 討論

阿爾茨海默病屬于老年期癡呆的一種，約占癡呆患者的50%，特征為持續(xù)神經(jīng)功能障礙，典型的臨床表現(xiàn)為認知障礙、學習障礙、記憶障礙、空間認知機能、注意障礙、問題解決障礙，對家庭來說造成了極重的負擔[5-6]。

SORL1屬于低密度脂蛋白,為膜蛋白,主要穿梭于高爾基體、內(nèi)涵體和質(zhì)膜，位于人類 11號染色體的長臂q2312～q2412區(qū)域，SORL1受體表達減少，導致阿爾茨海默病的發(fā)生，SORL1受體由SORL1基因編碼。有學者指出[7]，SORL1基因的多態(tài)性與阿爾茨海默病有關(guān)聯(lián)，與本次研究一致。本研究發(fā)現(xiàn)，研究組人群與對照組人群的SORL1基因型和等位基因差異有統(tǒng)計學意義，即SORL1基因rs2282649位點的A/G SNP多態(tài)性有差異。本研究認為可能是SORL1基因的多態(tài)性與不同種群、不同遺傳背景有關(guān)[8]，但SORL1基因還有多處位點，這也是以后筆者研究的方向，可以擴大樣本來滿足SORL1基因的多態(tài)性的不同點位的檢測。

[1] Morris JC,Storandt M,Miller JP,et al.Mild cognitive impairment represents earlyst age Alzheimer disease[J].Archives of Neurology,2001,58（7）：397-405.

[2] Lobo A,Launer LJ,Fratiglioni L,et al.Prevalence of dementia and major sub types in Europe;A collaborative study of population based cohorts Neurologic Diseases in the Elderly Research Group [J]. Neurology,2000,54(11-15)：4-9.

[3] Farrer LA,Cupples LA,Haines JL,et al.Effects ofage,sex,and ethnicity on the association between apolipoprotein E genotype and Alzheimer disease,A meta-analysis1APOE and Alzheimer Disease Meta Analysis Consortium[J].JAMA,2013,278(16)：1349-1561.

[4] Offe K,Dodson SE,Shoemaker JT,et al.The lipoprotein receptor LR11 regulates amyloid beta production and amyloid precursorprotein traffic in endosomal compartments[J].JNeurosc,2012,26(5)：1596-1631.

[5] Rogaeva E,Meng Y,Lee JH,et al.The neuronal sortilin-related receptor SORL1 is genetically associated with Alzheimer disease[J]. NatGene,2011,39(2)：168-771.

[6] American Psychiatry Association.Diagnostic and statistical manual of mental disorders,fourth edition(DSM-?)[M].Washington DC APA,2009：256-281.

[7] KêlschH,Jessen F,Wiltfang J,et al.Influence of SORL1 gene variants：associationwith CSF amyloid-beta products in probable Alzheimercs disEase[J].Neurosci Lett,2012,440(1)：68-71.

[8] Tan EK,Lee J,Chen CP,et al.SORL1 haplotypes modulate risk of Alzheimercs disease in Chinese[J].NeurobiolAging,2009,30(7)：1048-1051.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.20.062

江西中醫(yī)藥大學課題（20132R006）

江西 330006 江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院檢驗科 （王健 楊軍平陳潔）