HP20大孔樹脂分離純化苦皮藤種素C最佳工藝

吳鳴建　李國富　崔鵬等

摘要：對大孔樹脂純化苦皮藤（Celastrus angulatus）種素C的最佳工藝進(jìn)行了研究。比較了大孔吸附樹脂HP20、AB-8、SP825、D101對苦皮藤種素C的吸附率、解吸率，選擇性能較好的HP20樹脂進(jìn)行研究。以苦皮藤種素C的含量、浸膏得率為指標(biāo)，考察了上樣量、洗脫劑濃度、洗脫劑用量等因素對HP20大孔吸附樹脂分離純化苦皮藤種素C效果的影響，確定了較優(yōu)工藝參數(shù)。優(yōu)化工藝為：按HP20樹脂與藥材質(zhì)量比為1 ∶3.0上樣，用40倍柱體積的40%乙醇、90倍柱體積的60%乙醇依次洗脫。純化后，樣品中苦皮藤種素C含量提高7倍多。此方法簡單可行，能較好地純化苦皮藤種素C。

關(guān)鍵詞：苦皮藤種素C；HP20大孔樹脂；純化；HPLC

中圖分類號： O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）03-0246-02

苦皮藤（Celastrus angulatus）為衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物，別稱苦樹皮、馬斷腸等，廣泛分布于陜西省、河南省、湖北省等地[1]。苦皮藤的根、莖、葉、果實、種子是天然的殺蟲劑，同時也是重要的中藥資源，民間用其根皮、莖皮、樹葉防治蔬菜及各種作物蟲害已有相當(dāng)長的歷史[2]。研究表明，苦皮藤種子中所含的主要殺蟲活性成分為4-H-β-二氫沉香呋喃多元醇酯類化合物，其中苦皮藤種素C（angulateoid C）是殺蟲活性成分之一[3-4]，其結(jié)構(gòu)如圖1所示。

[FK（W9][TPWMJ1.tif]

苦皮藤種油對黃守瓜、菜粉蝶等多種害蟲具有拒食作用，對赤擬谷盜等儲糧害蟲有較強的忌避作用，對玉米象有明顯的致死、殺卵作用。大孔吸附樹脂的比表面積較大，吸附性能良好，經(jīng)不同極性的洗脫劑洗脫可以達(dá)到分離純化化合物的目的，具有設(shè)備簡單、操作方便、易于再生、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點，特別適合天然產(chǎn)物的分離純化[5-8]。本研究采用大孔樹脂法分離純化苦皮藤種素C，旨在為開發(fā)利用苦皮藤資源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與材料

LC-20AT型高效液相色譜儀（日本島津制作所）；Sunfire C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，0.5 μm）；CP214型分析天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；SHA-C型水浴恒溫振蕩器（常州冠軍儀器制造有限公司）；HP20型大孔樹脂、SP825型大孔樹脂均購自日本三菱化學(xué)公司；AB-8型大孔樹脂、D101型大孔樹脂均購自天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；甲醇，色譜純（天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；乙醇，醫(yī)用純（新鄉(xiāng)市三偉消毒制劑有限公司）。

苦皮藤種素C標(biāo)準(zhǔn)品（筆者所在實驗室自制）；苦皮藤種子采自湖北省恩施土家族苗族自治州，經(jīng)河南農(nóng)業(yè)大學(xué)朱長山教授鑒定。

1.2 方法

1.2.1 HPLC色譜條件

采用高效液相色譜法檢測苦皮藤種素C含量，色譜流動相：甲醇-水（80 ∶20）；檢測波長：232 nm；柱溫：25 ℃；流速：2.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取苦皮藤種素C標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，用甲醇定容至50 mL，搖勻后得苦皮藤種素C標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.05、0.50、1.00、2.50、5.00 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。分別取以上溶液及標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 μL注入液相色譜儀中，在波長232 nm處測定峰面積。以溶液濃度為橫坐標(biāo)（x），峰面積為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=12 377x-5 305.5，r=0.999 9，線性范圍為1～200 μg/mL，檢出限為05 μg/mL（S/N=3），平均加樣回收率為105.8%，RSD為1.31%。

1.2.4 上樣液制備 稱取苦皮藤種子2 500 g，粉碎，于 80 ℃ 水浴中以石油醚為溶劑回流提取3次，3次所加石油醚的體積分別是種子質(zhì)量的3、2、2倍，抽濾、合并濾液，60 ℃ 下減壓濃縮，除去溶劑得苦皮藤種油834.5 g。

2 結(jié)果與分析

以苦皮藤種素C的含量、浸膏得率為指標(biāo)，對大孔樹脂分離純化苦皮藤種素C的工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。考察上樣量、洗脫劑濃度、洗脫劑用量等因素對HP20大孔吸附樹脂分離純化苦皮藤種素C效果的影響。

2.1 大孔樹脂型號的選擇

取6.0 g上樣液，用甲醇定容至100 mL，HPLC分析苦皮藤種素C的濃度。取預(yù)處理過的HP20、AB-8、SP825、D101樹脂各5.0 g置于錐形瓶中，各加入6.0 g上樣液，在20 ℃恒溫振蕩器中充分振蕩，吸附平衡后，過濾、減壓蒸干，用甲醇定容至100 mL，HPLC分析苦皮藤種素C濃度。在達(dá)到吸附平衡的樹脂中加入50 mL 95%乙醇，在20 ℃恒溫振蕩器中充分振蕩，進(jìn)行解吸。達(dá)到解吸平衡后，過濾，用30 mL 95%乙醇洗滌，合并洗滌液、濾液，減壓蒸干，用甲醇定容至100 mL，HPLC分析苦皮藤種素C濃度，結(jié)果見表1。吸附率（q）及解吸率（E）計算公式如下：

結(jié)果表明，HP20型大孔吸附樹脂對苦皮藤種素C具有較好的吸附作用且容易被洗脫，故選用HP20型大孔樹脂進(jìn)行研究。

2.2 最佳上樣量

取4份預(yù)處理好的HP20型大孔樹脂各50.0 g裝柱，分別按樹脂與藥材質(zhì)量比為1 ∶1.8、1 ∶3.0、1 ∶4.2、1 ∶5.4比例上樣。在洗脫速度相同的條件下，先用40倍柱體積40%乙醇洗脫，除去部分雜質(zhì)，再用90倍柱體積 60%乙醇洗脫，并將60%乙醇洗脫液減壓蒸干，HPLC分析苦皮藤種素C含量。以苦皮藤種素C含量、浸膏得率為考察指標(biāo)，確定最佳上樣量，結(jié)果見表2。

3 結(jié)論與討論

本研究表明，HP20大孔樹脂分離純化苦皮藤種素C的最佳工藝為：按樹脂與藥材質(zhì)量比為1 ∶3.0上樣，先用40倍柱體積40%的乙醇洗脫，再用90倍柱體積60%的乙醇洗脫。苦皮藤種素C為苦皮藤種子的主要活性成分，因此分離純化苦皮藤種子中的苦皮藤種素C具有重要意義。采用HP20大孔樹脂分離純化苦皮藤種素C方法簡單可行，能較好地純化苦皮藤種素C，可作為工業(yè)上富集純化苦皮藤種素C的一種方法。

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