EB病毒與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)研究

黃昌艷 梁海琦 劉春霞 羅 陽

EB病毒與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)研究

黃昌艷 梁海琦 劉春霞 羅 陽

目的 通過檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者體內(nèi)的EB病毒DNA載量及病毒衣殼相關(guān)抗體（包括IgA及EBV-VCA-IgA），探究SLE患者體內(nèi)EB病毒感染情況及EB病毒再次感染對SLE活動度的影響。方法 選取100例SLE患者、80例非SLE風(fēng)濕患者及40例正常人血標(biāo)本，應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）測定EBV-DNA的載量，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定EB病毒相關(guān)抗體。比較各組EB病毒抗體抗體滴度。結(jié)果 PCR測定EBVDNA載量：SLE組與非SLE組的EBV-DNA檢出率分別為29.0%（29/100）、11.3%（9/80），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。病毒載量異常組的SLE患者的SLE疾病活動度（SLEDAI）為（15±3），病毒載量正?；颊逽LEDAI為（13±2），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。異常病毒載量患者與正常者的SLEDAI比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。SLE組的病毒相關(guān)抗體EBV-IgA與IgG的抗體滴度高于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 SLE患者體內(nèi)EBV抗體及DNA表達較高，提示EB病毒與SLE關(guān)系密切，但EBV-IgA或DNA載量對SLE疾病活動度無影響。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；病毒DNA載量；病毒抗體滴度；疾病活動度

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus,SLE）是一種涉及多個系統(tǒng)及器官的自身免疫性疾病，其具體發(fā)病機制尚未闡明，可能與基因有關(guān)，一些環(huán)境因素（激素、感染、飲食、藥物、紫外線等）也是SLE發(fā)病不可缺少的因素。近年來，環(huán)境因素與SLE的關(guān)聯(lián)性研究成為國內(nèi)外研究熱點。Epstein-Barr（EB）病毒是于1964年被發(fā)現(xiàn)的，Epstein和Barr分別在《Lancet》雜志中報道了非洲兒童淋巴瘤母細胞株中存在的不同于其他皰疹病毒的病毒[1]。血清學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，成人EB病毒的EBV-IgG抗體陽性率為90%，SLE患者體內(nèi)則高達99%[2]。本研究選取SLE患者100例、80例非SLE風(fēng)濕患者及40例正常人血標(biāo)本，利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）及酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）方法等探究EB病毒感染與SLE的發(fā)生、發(fā)展之間的聯(lián)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年4月～2012年6月在贛州市立醫(yī)院接受治療的SLE患者100例，男7例，女93例；年齡23～45歲，平均（34±11)歲。非SLE風(fēng)濕患者80例，男3例，女77例；年齡18～75歲，平均（44±16）歲；其中類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎56例，混合解體組織病23例，強直性脊柱炎1例。40例正常人為對照組，男30例，女10例；年齡18～70歲，平均（41±11）歲。患者診斷符合紐約1984年修訂的AS（強直性脊柱炎，ankylosing spondylitis）標(biāo)準(zhǔn)診斷、美國風(fēng)濕病學(xué)會于1997年修訂的SLE及1987年的RA（類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，rheumatoid arthritis）分類標(biāo)準(zhǔn)[2]。各組受試者性別、年齡等資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 實時熒光定量PCR方法 測定EB病毒的DNA載量：抽取受試者肘靜脈血，用淋巴細胞提取液取得白細胞，然后向沉淀中加入DNA提取液，依據(jù)EB病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑及PE核酸擴增熒光檢測儀檢測測定。若＞500基因拷貝/ mL則為異常，表明病毒復(fù)制很活躍；若≤500基因拷貝/mL則為正常。

1.2.2 ELISA法 檢測EB病毒相關(guān)抗體：抽取肘靜脈血，離心后留取上清，于-70℃保存。具體操作按照EBV-VCAIgG、IgA試劑盒說明書中步驟進行，完成后在酶標(biāo)儀中450nm比色，測定每孔吸光度?？贵w相對滴度=樣本吸光度值/標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值。比值≥0.8視為陽性，＜0.8視為陰性[2]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，組間計量數(shù)據(jù)采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCR測定EBV-DNA載量結(jié)果 SLE組與非SLE組的EBV-DNA檢出率分別為29.0%（29/100）、11.3%（9/80），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。病毒載量異常組的SLE患者的SLE疾病活動度（SLEDAI）為（15±3），病毒載量正?；颊逽LEDAI為（13±2），差異無統(tǒng)計學(xué)意義。異常病毒載量患者與正常者的SLEDAI比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 抗體滴度比較 SLE組的病毒相關(guān)抗體EBV-IgA與IgG的抗體滴度高于對照組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 SLE組與對照組EBV-IgA及IgG抗體滴度比較

3 討論

SLE是一種累及多個器官和系統(tǒng)的免疫性疾病。患者體內(nèi)往往具有多種抗感染性免疫缺陷，此外還存在淋巴細胞減少、巨噬細胞功能異常及淋巴因子表達異常等各種免疫異常，這些異常易導(dǎo)致患者并發(fā)感染[3]。很多學(xué)者一致認(rèn)為SLE患者合并感染會影響患者的預(yù)后[4]。SLE活動的主要表現(xiàn)包括發(fā)熱、皮膚黏膜損害、血管炎、胸膜炎、關(guān)節(jié)炎、腎臟受累、心包炎、血三系減少、低補體血癥、抗雙鏈DNA抗體滴度升高、CRP及紅細胞沉降率增快等[5]，此病的主要治療方法是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑（環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、長春新堿、環(huán)孢素A等）[6]。多數(shù)EB病毒感染引發(fā)SLE的相關(guān)研究顯示，先天或后天缺陷是病毒感染無法維持在潛伏狀態(tài)的重要原因，例如補體的缺乏可以影響死亡與凋亡細胞碎片的清除[7]。EB病毒作為一種環(huán)境因素可以誘發(fā)SLE這一問題越來越受到醫(yī)務(wù)工作者的重視，但兩者之間的具體聯(lián)系還未徹底闡明，至今仍不清楚EB病毒的近期感染是否能影響SLE的總體疾病活動性。也可能存在別的發(fā)病機制[8]。也有人認(rèn)為，EBV的LMP1有可能通過影響凋亡相關(guān)因子的表達進而使自身反應(yīng)性B細胞能持續(xù)活化增殖[9]。

本研究通過對本院共100例SLE患者，80例非SLE風(fēng)濕患者及40例正常人的研究對比結(jié)果顯示，SLE組與非SLE組的EBV-DNA檢出率分別為29.0%、11.3%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；但2組的SLEDA分別為15、13，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且SLE組的EBV-DNA數(shù)值與SLEDA相關(guān)性分析結(jié)果無相關(guān)性；此外，SLE組的病毒相關(guān)抗體EBV-IgA與IgG的抗體滴度均高于對照組（P＜0.05），但SLE患者病毒抗體EBV-IgA及IgG滴度與其相應(yīng)的SLEDA相關(guān)性分析顯示無相關(guān)性。以上結(jié)果表明，SLE患者體內(nèi)EBV抗體及DNA表達較高，提示EB病毒與SLE關(guān)系密切，但EBV-IgA或DNA載量對SLE疾病活動度無影響。其具體關(guān)聯(lián)性有待進一步研究。

[1] 王新云，張云清，孫明姝.EB病毒感染與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究進展[J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014，37（2）：131-135.

[2] 張小立，馮修高，徐向進.EB病毒感染與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)性研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2013，7(14)：6349-6353.

[3] 陳偉倫，姚翠霞，林永明.系統(tǒng)性紅斑狼瘡并發(fā)感染的特點及影響因素分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2014，20（6）：29-30.

[4] 梁繼紅，朱春玲.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者感染分析[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，37（5）：551-552.

[5] 孫靜，謝志軍，黃繼勇.系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動性與證型的關(guān)系研究[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2014，38（6）：686-700.

[6] 梅玨，陳士芳，王笑顏，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者感染的臨床特點及危險因素[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013,23（23）：5698-5700.

[7] James JA， Robertson JM.Lupus and Epstein-Barr[J].Curr Opin Rheumatol，2012，24(4)：383-388.

[8] Lossius A，Johansen JN，Torkildsen I，et al.Epstein-Barr virus in systematic lupus erythematosus， rheumatoid arthritis and multiple sclerosis association and causation[J].Viruses，2012，4（12）：3701-3730.

[9] 王麗芹，王吉波，潘林.EB病毒潛伏膜蛋白1誘發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡可能機制的探討[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2011，15（10）：707-709.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.19.013

江西 341000 贛州市立醫(yī)院（黃昌艷 梁海琦 劉春霞 羅陽）