多項目聯合檢測在陰道加德納菌感染的應用研究

戴繪芬 徐振東 花鴻燕

多項目聯合檢測在陰道加德納菌感染的應用研究

戴繪芬 徐振東 花鴻燕

目的 分析婦科陰道感染患者加德納菌感染的快速檢測方法。方法 選擇260例檢查陰道感染患者為觀察組，選擇同期進行體檢的健康婦女260例作為對照組，對2組進行多項目聯合檢測。結果 觀察組患者加德納菌陽性總檢出率為47.02%，而對照組加德納菌（gardnerella vaginalis，GVA）陽性總檢出率為7.3%，二者比較差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 采用多項目聯合檢測陰道分泌物中的加德納菌，成本低廉、操作方便、無需特殊設備，達到了加德納菌檢測快速、簡便、敏感性高的目的，適合在基層醫療單位實驗室推廣應用，有可能成為今后實驗室診斷和主要快速檢測方法之一。

陰道感染；加德納菌感染；多項目聯合檢測

近年來, 女性尿路感染的發病率有上升趨勢。已成為困擾患者的頑疾，受到人們的重視。細菌性陰道病(bacterial vaginosis，BV)也稱特異性陰道炎，臨床表現為陰道分泌物增加，并有典型的魚腥味，這種魚腥味在月經或性交后尤為明顯[1-2]。陰道加德納菌(GVA)屬于革蘭氏陰性小桿菌，或者是球樣小桿菌的變異體，有厭氧、嗜血的特性，是BV最常見病原菌，也是性接觸傳播疾病的病原菌之一。GVA不僅引起陰道炎和尿道炎、輸卵管異位妊娠、胎膜早破、早產、低體重兒、急性輸卵管炎、手術感染和子宮頸癌等，還與男性尿道感染/男性不育相關。目前報道陰道加德納菌的檢測方法主要有涂片革蘭染色找線索細胞、胺試驗、BV試驗、分離培養法、免疫學方法、PCR法等。本院對260例陰道感染的女性患者進行了加德納菌的致病性和快速檢測探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月～2012年12月間選擇260例來海安縣中醫院檢查的陰道感染患者為觀察組；其中陰道炎197例，宮頸炎63例；選擇同期進行體檢的健康婦女260例作為對照組。2組患者性別等一般資料比較經檢驗差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 方法 先用無菌陰道窺器擴張陰道，再用無菌棉拭子于陰道距離宮頸口1～2cm處取宮頸或陰道分泌物及時送檢。

革蘭氏染色法：取宮頸或陰道分泌物直接涂片，自然干燥后火焰固定行革蘭氏染色，于顯微鏡下觀察，黏附在上皮細胞內的大量革蘭氏陰性或革蘭氏陽性的小桿菌或球桿菌，即為線索細胞，同時鏡下革蘭氏陽性桿菌少見或缺失（此即為陰道乳酸桿菌少見或缺失）。

胺試驗法：將2滴100g/L的KOH溶液滴于涂有陰道分泌物的載玻片上，立即嗅聞是否有魚腥味，若發出魚腥氣味即胺試驗陽性。

pH試驗法：用精密pH試紙(pH3.8～5.4)進行測試，如陰道分泌物的pH＞4.5，即疑為陰道加德納菌引起pH改變。

分離培養鑒定法：將無菌生理鹽水中的陰道或宮頸分泌物，以無菌手續接種于加德納瓊脂平板，置5%CO2孵育箱培養48h，挑取灰色、半透明、光滑、露滴狀樣菌落，如為革蘭染色陰性小桿菌者，按說明書接種于棒狀桿菌鑒定條上進行鑒定。

1.3 統計學方法 使用SPSS13.0統計軟件進行統計分析，正態計量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，計數資料組間率（%）的比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

觀察組患者加德納菌陽性總檢出率為47.02%，而對照組加德納菌陽性總檢出率為7.3%，二者比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

表1 幾種檢測方法結果

3 討論

陰道加德納菌是一種革蘭染色陰性或染色不定的小桿菌或球桿菌，是Gardner于1954年從陰道炎患者陰道分泌物中分離的pH升高的一種細菌。過去認為GVA可視為生殖道正常菌群，現在加德納菌已被確認為陰道感染性疾病的重要病原菌，并與輸卵管妊娠、胎膜早破和新生兒早產等不良妊娠結局以及女性間質性膀胱炎等關系密切[3]。因此實驗室建立快速、準確、可靠的診斷方法尤為重要。

隨著科學技術的不斷進步，醫學檢驗診斷技術的發展也非常神速。針對陰道加德納氏菌感染的實驗診斷方法主要：胺試驗診斷法；聚合酶鏈式反應（PCR）檢測法；顯微鏡檢測法；熒光抗體檢測法，此外，實驗診斷方法還有酶測定法、分泌物pH值測定法、氣相色譜法等一些診斷陰道加德納氏菌感染的方法[4]。目前革蘭染色找線索細胞、胺試驗診斷法和分泌物pH值測定法等單項方法檢測仍是一種診斷細菌性陰道病的常規、快速的方法但是受到各自方法原理和檢驗人員人為因素的制約，各存在一定的缺點，分離培養鑒定法是國際確認的金指標，臨床上由于不正規的應用抗生素，導致許多病原體在一定程度上受到抑制，造成分離培養的效果不理想，且培養技術耗時較長。目前還有一種PCR技術，該方法檢測的是病原體的遺傳物質DNA，有高度的特異性和敏感性，選用特異的寡核苷酸引物序列，不受抗生素治療等藥物治療的影響，對徹底根治疾病有重要臨床意義。但該技術的設備和試劑較為昂貴，在基層醫院難以普及。因此根據本次研究結果推薦的檢測方法為：革蘭染色油鏡下查找線索細胞、胺試驗、pH測試三者組合的檢測。本研究應用三種不同的方法技術檢測陰道感染患者和正常者體檢者的陰道分泌物，發現觀察組患者加德納菌陽性總檢出率為47.02%，而對照組加德納菌陽性總檢出率為7.3%，二者比較差異有統計學意義(P＜0.05)。表明GVA是引起陰道炎和尿道炎等的主要病原體[5]，且在一定程度上克服了單方法檢測帶來的假陽性的特點。本次研究在健康婦女中檢出該菌但無臨床癥狀，可能與加德納菌的感染量及生物型別不同有關[6]。

綜上所述，采用此方法檢測陰道分泌物中的加德納菌，成本低廉、操作方便、無需特殊設備，達到了加德納菌檢測快速、簡便、敏感性高的目的，適合在基層醫療單位實驗室推廣應用，有可能成為今后實驗室診斷和主要快速檢測方法之一。

[1] 張春霞，陳慶華.陰道炎治療藥物及其外用制劑研究進展[J].世界臨床藥物，2010，31（6）：381-386.

[2] 辛亞蘭，王卡娜，何榮霞，等.4396例已婚婦女婦科病患病情況研究[J].現代預防醫學，2011，38（4）：630-632.

[3] 王英.淺談婦科疾病的癥狀和預防措施[J]．求醫問藥：學術版，2012,10（10）:29-30.

[4] 李連青,朱慶義,劉俊芬,等.道加德納菌對細菌性陰道病的病原學診斷評價[J].中華醫院感染學雜志,2005,15(2):226-230.

[5] 陳麗丹，黃曉燕.尿液中陰道加德納菌的分離培養及藥敏試驗[J].現代檢驗醫雜志,2013,28(6):110-114.

[6] 吳愛武,陳艷珍.陰道加德納菌生物型與細菌性陰道病的關系[J].中國微生態學雜志,2000,2(6):337-339.

Objective Analysis patients with gynecological vaginal infection Gardnerella infection fast detection method. Methods Select the 260 patients in Hai’an County Hospital of Traditional Chinese Medicine examination vaginal infection in patients in the observation group, select the concurrent examination of 260 cases of healthy women as a control group. Results The patients gardnerella total positive rate was 47.02%, while the control group GVA gardnerella total positive rate was 7.3%,the difference was statistically signifcant (P＜0.05).Description Gardnerella bacterial vaginosis is one of the main pathogens. Conclusion Use this method of detection of Gardnerella vaginal secretions, low cost, easy to operate, no special equipment, reached gardnerella testing fast, easy, aim high sensitivity, suitable for primary health care units laboratory application, may become a major future laboratory diagnosis and rapid detection methods.

Vaginal infections; Gardnerella infection;Joint detection techniques

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.6.016

江蘇 226600 海安縣中醫院檢驗科 （戴繪芬 徐振東 花鴻燕）