黃芪皂苷對小鼠化療貧血模型白介素—2、白介素—4和白介素—6的影響

梁可等

[摘要] 目的 考察黃芪皂苷對化療貧血模型小鼠血清中白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）和白介素-6（IL-6）的影響。 方法 選取6～7周齡昆明種小鼠64只，隨機分為空白組、模型組、陽性對照組和給藥組，每組16只，雌雄各半。采用環磷酰胺建立化療貧血模型，空白組正常飼養，不予特殊處理。模型組、陽性對照組和給藥組分別于1、3、5 d按0.2 g/kg體重劑量腹腔注射環磷酰胺。于造模第7天灌胃給藥，空白組、模型組均按10 mL/kg體重胃飼蒸餾水；陽性對照組按5 mL/kg體重胃飼黃芪精混懸液；給藥組按10 mL/kg體重胃飼黃芪皂苷溶液，灌胃治療14 d后，摘眼球取血。利用酶聯免疫吸附測定法（ELISA）測定血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量。 結果 與空白組IL-2[（911.5±157.6）ng/L]、IL-4[（711.4±119.8）ng/L]、IL-6[（193.3±71.0）ng/L]含量比較，模型組IL-2[（245.0±104.3）ng/L]、IL-4[（124.3±54.9）ng/L]含量明顯下降，IL-6[（1245.7±254.5）ng/L]含量顯著升高，差異有統計學意義（P < 0.05）；與模型組比較，給藥組IL-2[（640.8±192.8）ng/L]、IL-4[（574.0±112.4）ng/L]含量明顯升高，IL-6[（521.5±203.8）ng/L]含量明顯降低，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 黃芪皂苷能提高化療貧血模型小鼠血清中IL-2、IL-4的含量，降低IL-6的含量。IL-2、IL-4、IL-6與環磷酰胺引起的免疫失調和造血功能抑制有關；黃芪皂苷能夠改善環磷酰胺所致的小鼠免疫力低下和骨髓抑制情況。

[關鍵詞] 黃芪皂苷；化療貧血；白介素-2；白介素-4；白介素-6

[中圖分類號] R285.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2015）06（c）-0016-03

Effect of astragaloside on interleukin-2， interleukin-4 and interleukin-6 in chemotherapy induced anemic mice

LIANG Ke1 MA Jin2 QU Yi1 ZHENG Bingyuan1 QIAO Tie1

1.Department of Prescription， Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Liaoning Province， Shenyang 110847， China； 2.The Second Hospital Affiliated to Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Liaoning Province， Shenyang 110034， China

[Abstract] Objective To observe the effect of astragaloside on interleukin-2 （IL-2）， interleukin-4 （IL-4） and interleukin-6 （IL-6） in chemotherapy induced anemic mice. Methods 64 Kunming mice which were 6-7 weeks old were picked as the research objects and randomly divided into four groups： normal group， model group， positive control group and treated group. Each group was 16 mice， half male and half female. Chemotherapy anemia models were established by Cyclophosphamide. Normal group was fed without special treatment. Model group， positive control group and treated group were given 0.2 g/kg of Cyclophosphamide by intraperitoneal injection in 1， 3， 5 d， respectively. In 7 d， normal group and model group received 10 mL/kg of distilled water by intragastric administration； positive control group was fed 5 mL/kg of Huangqijing suspension； treated group was given 10 mL/kg of astragaloside solution. The mice were drawn blood from eyeball after 14 days treatment. The ELISA was used to test the concentrations of IL-2， IL-4 and IL-6 in mouse serum. Results Compared with the contents of IL-2 [（911.5±157.6） ng/L]， IL-4 [（711.4±119.8） ng/L] and IL-6 [（193.3±71.0） ng/L] of normal group， the concentrations of IL-2 [（245.0±104.3） ng/L]， IL-4 [（124.3±54.9） ng/L] in model group were significantly lower， and the concentration of IL-6 [（1245.7±254.5） ng/L] was evidently higher， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Compared with model group， the contents of IL-2 [（640.8±192.8） ng/L]， IL-4 [（574.0±112.4） ng/L] were increased significantly， and the content of IL-6 [（521.5±203.8） ng/L] in treated group was obviously decreased， with statistically significant differences （P < 0.05）. Conclusion Astragaloside can increase the concentrations of IL-2 and IL-4， decrease the content of IL-6 in anemia model mice induced by chemotherapy. The changes in the contents of IL-2， IL-4 and IL-6 are associated with immune disorders and hematopoietic depression caused by Cyclophosphamide-induced anemia. Astragaloside can improve mouse low immunity and myelosuppression induced by Cyclophosphamide.

[Key words] Astragaloside； Chemotherapy-induced anemia； Interleukin-2； Interleukin-4； Interleukin-6

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根，具有補氣升陽、固表止汗、利水消腫、生津養血之功效，能增強人體免疫系統功能，改善機體骨髓造血功能[1]。黃芪中皂苷類、黃酮類、多糖類為黃芪主要活性成分，而對其改善免疫和骨髓抑制作用，研究多集中于黃芪多糖，對黃芪皂苷的報道較少[2-3]。本實驗主要通過建立小鼠化療貧血模型，考察黃芪皂苷對小鼠血清細胞因子白介素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）的影響，從而對黃芪皂苷調節免疫功能、改善造血功能進行初步研究，為臨床應用中藥減輕化療藥毒副作用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級昆明種小鼠64只，6～7周齡，雌雄各半，平均體重（20±2）g，購于遼寧中醫藥大學實驗動物中心。

1.2 藥物

黃芪皂苷（成都曼斯特生物科技有限公司，Astragaloside UV≥98%，批號：MUST-13100901），環磷酰胺注射液（山西德普藥業股份有限公司，批號：04130904），黃芪精（揚子江藥業集團有限公司，批號：13121322）。

1.3 主要儀器與試劑

IL-2、IL-4、IL-6酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測試劑盒購于聯科生物技術有限公司。Multiskan FC型酶標儀（Thermo Fisher公司），微量冷凍離心機（Thermo Fisher公司）。

1.4 方法

將64只昆明種小鼠隨機分為空白組、模型組、陽性對照組和給藥組，每組16只，雌雄各半。空白組：正常飼養，不予特殊處理。模型組、陽性對照組和給藥組分別于1、3、5 d按0.2 g/kg體重劑量腹腔注射環磷酰胺。于造模第7天灌胃給藥，空白組、模型組均按10 mL/kg體重胃飼蒸餾水；陽性對照組按5 mL/kg體重胃飼黃芪精混懸液；給藥組按10 mL/kg體重胃飼黃芪皂苷溶液，連續灌胃14 d。于末次給藥后24 h，摘眼球取血，檢測相應指標。

1.5 檢測指標

采用ELISA法檢測小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6含量。

1.6 統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件進行分析，計量資料數據以均數±標準差（x±s）表示，組間比較采用方差齊性檢驗，方差分析采用One-Way ANOVA分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 黃芪皂苷對化療性貧血模型小鼠血清中IL-2、IL-4含量的影響

與空白組比較，其余各組IL-2、IL-4含量明顯下降，差異有統計學意義（P < 0.05）；與模型組比較，給藥組和陽性對照組IL-2、IL-4含量均明顯升高，差異有統計學意義（P < 0.05）；與陽性對照組比較，給藥組IL-2、IL-4含量明顯升高，差異有統計學意義（P < 0.05），提示黃芪皂苷在提高IL-2、IL-4含量作用方面優于黃芪精。見表1。

2.2 黃芪皂苷對化療性貧血模型小鼠血清中IL-6含量的影響

與空白組比較，其余各組IL-6含量均顯著升高，差異有統計學意義（P < 0.05）；與模型組比較，給藥組和陽性對照組IL-6含量均降低，差異有統計學意義（P < 0.05）；與陽性對照組比較，給藥組IL-6含量明顯降低，差異有統計學意義（P < 0.05），提示黃芪皂苷在降低IL-6含量作用方面優于黃芪精。見表2。

3 討論

環磷酰胺為臨床常用的廣譜抗腫瘤藥物，但在殺傷和抑制腫瘤細胞的同時，對骨髓造血細胞產生強烈的抑制作用，同時還會導致免疫力下降等問題，不利于機體的繼續治療與術后的恢復[4]。黃芪中皂苷類成分主要有黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ和黃芪皂苷Ⅳ等，具有改善機體免疫、增強造血功能、抗腫瘤等藥理作用，還能減輕化療藥物引起的不良反應。研究表明，黃芪皂苷能提高機體的特異及非特異性免疫功能，促進免疫細胞因子的產生，并且能顯著抑制腫瘤生長，是一種免疫調節劑[5]。黃芪皂苷對小鼠T、B淋巴細胞增殖與產生IL-2均有明顯的促進作用，顯示出較強的細胞免疫和體液免疫調節作用[6-9]。白介素（interleukin，IL）是在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子，屬于免疫調節因子，主要由激活淋巴細胞分泌，作為免疫系統的細胞因子信使發揮作用。同時，IL還和血細胞生長因子相互協調，相互作用，共同完成造血功能。IL-2、IL-4、IL-6在調節機體免疫，刺激骨髓細胞增殖和分化等方面發揮不同作用。

IL-2是細胞免疫應答所必需的細胞因子，參與調節機體抗腫瘤效應和移植排斥反應。IL-2能刺激活化T細胞和B細胞的生長和分化，刺激 NK細胞產生和分泌大量、多樣的細胞因子，這些細胞在機體的免疫監視方面至關重要，所以，IL-2是保障機體正常免疫調節功能的關鍵物質[10-11]。IL-4能刺激胸腺細胞和T淋巴細胞增殖，可促進B細胞增殖、成熟及分化產生IgE，從而促進體液免疫應答，被認為是介導體液免疫應答的主要因子之一。IL-4還能刺激肥大細胞、巨噬細胞和巨核細胞等造血細胞的生長，并能協同紅細胞生成素（EPO）支持紅系祖細胞的生長發育[12]。本實驗中模型組小鼠血清中IL-2、IL-4濃度顯著下降，與文獻報道一致[13-14]，表明IL-2、IL-4參與環磷酰胺所致的免疫抑制過程。與模型組比較，給藥組的IL-2、IL-4含量明顯提高，提示黃芪皂苷在上調IL-2、IL-4方面具有較好的作用，對機體低下的細胞免疫具有一定的恢復作用。

IL-6是一種主要由免疫活性細胞分泌的多功能因子，不僅具有免疫調節及抗腫瘤作用，且能促進細胞的增殖分化，加速血小板的再生，具有顯著的造血調控作用。有研究表明外周血IL-6的水平與造血功能成負相關，當造血功能出現問題，機體代償性分泌IL-6以促進造血[15-16]。因此血清IL-6的水平可以在一定程度上反映骨髓造血功能。本實驗中模型組小鼠IL-6升高，推測是由于環磷酰胺引起的造血功能損傷。與模型組比較，給藥組IL-6含量明顯降低，說明黃芪皂苷具有降低IL-6含量的作用，表明黃芪皂苷可以保護化療導致的骨髓造血功能損傷，促進造血功能的恢復，增強其對造血因子的調控。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：283.

[2] 孫舒玉，何小娟，羅丹，等.黃芪多糖對順鉑治療S180荷瘤鼠的增效減毒作用[J].中國中醫基礎醫學雜志，2013， 19（9）：1031-1033.

[3] 劉海曄，周潔.注射用黃芪多糖聯合化療減毒增效96例臨床觀察[J].天津藥學，2007，19（2）：31-33.

[4] 王聰，王一騰，魏鑫.環磷酰胺的臨床應用現狀[J].臨床和實驗醫學雜志，2008，7（8）：179-181.

[5] 段萍，王再謨.黃芪在惡性腫瘤化療中的增效減毒作用的臨床研究[J].中國中西醫結合雜志，2002，22（7）：515-517.

[6] 周超，何軼，林瑞超，等.黃芪4種皂苷提取物的制備及其在黃芪總皂苷含量測定中的應用[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（22）：56-59.

[7] 萬春平.黃芪皂苷Ⅲ通過IFN-γ介導體外免疫調節作用的研究[J].云南中醫中藥雜志，2011，32（9）：69-71.

[8] 徐明，胡秀萍，朱虹，等.黃芪總提物的免疫調節作用[J].中藥藥理與臨床，2005，21（3）：27-29.

[9] 許杜娟，吳強，楊雁.黃芪總苷的抑瘤作用及其作用機制[J].中國藥理學通報，2003，19（7）：823-826.

[10] Kim JW，Ferris RL，Whiteside TL. Chemokine C receptor expression and protection of circulating CD8+ T lymphocytes from apoptosis [J]. Clin Cancer Res，2005，11（21）：7901-7910.

[11] 高允海.自擬健脾清瘀湯對術后腸功能障礙的治療作用研究[J].吉林中醫藥，2007，27（5）：16-17.

[12] 浦權.實用血液病理學[M].北京：科學出版社，2013：13-14.

[13] 劉娟，初杰.不同提取方法的當歸補血湯對化療貧血模型的藥效學研究[J].遼寧中醫藥大學學報，2011，13（8）：113-115.

[14] 謝寧，袁曉霞，關慧波，等.補腎丹對環磷酰胺所致免疫低下小鼠血清IL-2，IL-4的調節作用[J].吉林中醫藥，2012，32（3）：277-279.

[15] 孫偉正，李志俠，王金環.補髓生血顆粒對造血負調控因子IL-6和TGF-β1的影響[J].中醫藥信息，2004，21（5）：25-27.

[16] 王茜.補腎活血法與益氣補血法對骨髓抑制小鼠造血功能調控作用的比較[D].北京：解放軍醫學院，2013：38-39.

（收稿日期：2015-03-01 本文編輯：張瑜杰）