不同血清HBV DNA載量慢性乙型肝炎病毒攜帶者外周血T淋巴亞群的變化*

王　慰，楊　莉，高恒波，鄭歡偉，李兵順

不同血清HBV DNA載量慢性乙型肝炎病毒攜帶者外周血T淋巴亞群的變化*

王慰，楊莉，高恒波，鄭歡偉，李兵順

【摘要】目的探討不同病毒載量乙型肝炎病毒（HBV）攜帶者外周血T細胞亞群的變化。方法使用流式細胞儀檢測86例慢性HBV攜帶者和22例正常人外周血T細胞CD3+、CD4+和CD8+細胞亞群；采用熒光定量PCR法檢測HBV DNA載量。結果血清HBV DNA低載量HBV攜帶者外周血CD3+和CD4+細胞百分比分別為（65.6±12.5）%和（32.1±9.5）%，HBV陰性組分別為（63.8±13.3）%和（31.6±11.3%），均顯著低于正常人［分別為（72.1±5.0）%和（39.1±5.3）%，P＜0.05］；HBV DNA低載量組CD8+細胞百分比為（25.8±7.1）%，與正常人的（27.6±4.3）%比，無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）；HBV DNA高載量組外周血CD3+、CD8+細胞百分比分別為（73.2±9.5）%、（30.0±8.5）%，CD4+細胞為（37.6±6.4）%，與正常人比均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。結論隨著血清HBV DNA載量的升高，HBV攜帶者T淋巴細胞亞群處于接近正常水平，其發(fā)生機制還有待于進一步研究

【關鍵詞】慢性乙型肝炎病毒攜帶者；T淋巴細胞亞群；流式細胞術；病毒載量

乙型肝炎病毒（HBV）感染機體所引發(fā)的宿主免疫反應對病毒的清除是導致疾病進展的關鍵因素。T淋巴細胞亞群在此免疫反應過程中起主要作用［1，2］。我國HBV攜帶者超過

1.2億，其中一些人會發(fā)展至乙型肝炎、肝硬化和肝癌［3，4］。本文檢測了不同病毒載量的HBV攜帶者外周血T淋巴細胞亞群的變化，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1病例來源2012年10月～2013年3月期間我科診治的慢性HBV攜帶者86例，男64例，女22例；年齡15～62歲，平均年齡為（37.5±12.6）歲。臨床診斷符合慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）的標準［5］。所有患者半年內未用過抗病毒藥物和免疫調節(jié)劑。另選正常人22例，男性15例，女性7例；年齡18～60歲，平均年齡（39.7±12.9）歲，排除乙型肝炎、高血壓病、冠心病、糖尿病。兩組人群性別和年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2外周血淋巴細胞亞群檢測抽取靜脈血2 ml，EDTA抗凝。取全血100 μl，加入抗CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5（美國BECKMANNCOULTER公司）20μl，室溫下避光孵育10 min，加溶血素500 μl，15 min，加稀釋液500 μl，10 min后上流式細胞儀（美國BECKMANN COULTER公司生產(chǎn)的Epics-XLⅡ型）檢測CD3+、CD4+和CD8+淋巴細胞百分比。

1.3外周血HBV DNA定量檢測抽取靜脈血2 ml，EDTA抗凝，采用熒光定量PCR法（美國ABI公司的7300型PCR儀）檢測血清HBV DNA（中山大學達安基因股份有限公司）。根據(jù)HBV DNA定量水平，將86例患者分為3組：HBV DNA陰性組（HBV DNA＜0.5 U/L），HBV DNA低載量組（HBV DNA為1×101～102U/L），HBV DNA高載量組（HBV DNA為1×103～105U/L）。

1.4統(tǒng)計學方法應用SPSS l3.0軟件包進行分析，計量資料以（x±s）表示，多組樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結果

HBV陰性組和低載量HBV DNA組外周血CD3+T細胞百分比比正常人降低，高載量HBV DNA組比低載量HBV DNA組明顯降低（P＜0.05）；HBV DNA低載量組和HBV陰性組CD4+T細胞百分比比正常人降低，HBV DNA高載量組降低更明顯（P＜0.05）；HBV DNA高載量組CD8+T細胞百分比比正常人有所升高，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；慢性HBV攜帶者外周血CD4+/CD8+細胞比值比正常人有所降低，但無統(tǒng)計學意義（P＞0.05，表1）。

3　討論

機體感染HBV后主要依靠細胞毒效應與非細胞毒效應兩種免疫機制消除病毒，其中 T淋巴細胞參與的細胞毒效應起主導作用。慢性乙型肝炎的發(fā)病主要是由于機體 T淋巴細胞通過細胞免疫清除 HBV時引發(fā)了肝細胞的病理性損傷。因此 HBV感染的發(fā)生、發(fā)展和轉歸與宿主細胞免疫功能狀態(tài)密切相關［6，7］。研究認為慢性HBV攜帶者常在幼年由于機體免疫系統(tǒng)尚未健全或功能低下時，感染HBV后免疫系統(tǒng)不能有效識別病毒，造成攜帶狀態(tài)。臨床上，尚難打破慢性HBV攜帶者的免疫耐受狀態(tài)，如何治療HBV攜帶者也就成了被關注的熱點［8，9］。

表1　各組外周血T淋巴細胞百分比（%）的比較

T細胞膜表面分子基因主要以白細胞分化抗原（cluster of differentiation，CD）、組織相容性抗原以及膜表面的受體等構成。CD3+分子能表達于全部 T細胞上，是 T細胞共同的表面標志［10，11］。所以，檢測CD3+淋巴細胞可反映T淋巴細胞的總數(shù)。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常人比，HBV DNA陰性組、HBV DNA低載量組HBV攜帶者CD3+淋巴細胞百分比明顯降低，且差異具有顯著性，而HBV DNA高載量組與正常人比無顯著性差異，說明隨著HBV DNA水平的升高，HBV攜帶者體內T淋巴細胞總數(shù)也不斷增高，提示HBV攜帶者在病毒呈陰性或低載量時，機體參加細胞免疫反應的免疫活性細胞數(shù)不足，攜帶者細胞免疫未激活。

CD4+和CD8+T細胞亞群在機體特異性免疫應答中起核心作用。CD4+亞群屬輔助性 T細胞（Th），可產(chǎn)生多種細胞因子，能輔助 B細胞產(chǎn)生抗體，也能輔助CD8+T細胞產(chǎn)生細胞毒作用；CD8+細胞可產(chǎn)生穿孔素等細胞毒物質，參與抗腫瘤免疫、抗病毒和移植排斥反應，歸屬于抑制性T細胞（Ts）［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常人比，HBV DNA陰性組、HBV DNA低載量組人群CD4+細胞百分比明顯降低，HBV DNA高載量組與正常人比，雖有所降低，但是無顯著性差異；HBV DNA陰性組、HBV DNA低載量組人群CD8+細胞百分比與正常人比有一定程度的降低，但是無統(tǒng)計學差異，而HBV DNA高載量組則呈增多狀態(tài)，但也無統(tǒng)計學差異。由此可見，HBV攜帶者免疫低下主要是由于CD4+淋巴細胞減少所致，從而導致免疫耐受狀態(tài)。

CD4與CD8的消長平衡能反映促炎/抑炎因子的失衡及程度［6］。本研究結果顯示慢性HBV攜帶者CD4/CD8比值與正常人比有一定程度的降低，雖差異不顯著，但是隨病毒載量的升高，此比值也在不斷升高，表明患者體內存在不同程度的CD4與CD8的失衡。

本研究結果顯示，HBV攜帶者體內病毒載量低時，T淋巴細胞數(shù)量處于低下狀態(tài)，而患者病毒載量增高，T淋巴細胞數(shù)量也不斷增高，甚至與正常人差異不大，表明患者體內免疫系統(tǒng)處于活躍狀態(tài)，此時應是清除病毒的時期，是否可以考慮當患者體內病毒載量升高時，對患者進行抗病毒及各種免疫治療來達到清除病毒的目的，需要對患者體內各類淋巴細胞的功能進行詳細的了解，也將成為我們今后進一步研究的方向。

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（收稿：2014-09-16）（

本文編輯：際宗炳）

第一作者：王慰，女，38歲，醫(yī)學學士，副主任醫(yī)師。主要從事中西醫(yī)結合治療感染性疾病研究。E-mail：wwei1818@sina.com

DOI：10.3969/j.issn.1672-5069.2015.01.019

*基金項目：河北省衛(wèi)生廳科研基金項目（編號：20090607）

作者單位：050021石家莊市第五醫(yī)院肝病科（王慰，鄭歡偉，李兵順）；檢驗科（楊莉）；河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院急診科（高恒波）

通訊作者：李兵順，E-mail：crb49lbs@163.com

Changes of T lymphocyte subsets in chronic hepatitis B virus carriers with different serum HBV DNA loads Wang Wei，Yang Li，Gao Hengbo，et al.Department of Liver Diseases，F(xiàn)ifth Hospital，Shijiazhuang 050021，HeBei Province

【Key words】Chronic hepatitis B virus carriers；T lymphocyte subsets；Flow cytometry；HBV DNA