慢性乙型肝炎病毒感染者血清MIF、IL-17和IL-10水平變化*

李彩東，楊勇衛(wèi)，田鵬飛，李惠軍，吳　　斌

慢性乙型肝炎病毒感染者血清MIF、IL-17和IL-10水平變化*

李彩東，楊勇衛(wèi)，田鵬飛，李惠軍，吳斌

【摘要】目的探討HBV感染者外周血巨噬細胞移動抑制因子（MIF）、IL-17和IL-10水平變化的臨床意義。方法收集60例慢性無癥狀HBV攜帶者、60例慢性乙型肝炎患者、60例乙型肝炎肝硬化患者、60例肝癌患者和50例健康對照者空腹血清，采用 ELISA法檢測血清MIF、IL-17和IL-10水平；采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量；采用全自動生化分析儀檢測血清肝功能指標。結果與健康對照組［（1.9±1.4）ng/ml］比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血MIF水平均顯著升高［分別為（5.7±2.8）ng/ml、（10.5±4.1）ng/ml、（17.7±7.4）ng/ml、（19.8±9.9）ng/ml，P＜0.01］，其中HCC組最高，ASC組最低；與健康對照組［（4.4±2.2）ng/ml］比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-17水平均顯著升高［分別為（8.6±4.3）ng/ml、（20.7±6.6）ng/ml、（23.4±15.1）ng/ml、（16.0±8.7）ng/ml，P＜0.01或P＜0.05］，其中LC組最高，ASC組最低；與健康對照組［（12.9±4.6）ng/ml］比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-10水平均顯著升高 ［分別為（237.2±72.9）ng/ml、（184.68±59.0）ng/ml、（356.6±150.8）ng/ml、（287.9±88.8）ng/ml，P＜0.01］，其中LC組最高，CHB組最低。結論MIF、IL-17和IL-10在慢性HBV感染過程中可能起重要作用，檢測血清細胞因子水平可作為評估慢性乙型肝炎病情嚴重程度的重要指標。

【關鍵詞】慢性乙型肝炎；巨噬細胞移動抑制因子；白介素-17；白介素-10

乙型肝炎病毒（HepatitisBvirus，HBV）感染人體后，在不同的感染者臨床轉歸存在較大的差異，其中免疫反應可能起了重要的作用。多種細胞因子參與免疫反應的調節(jié)，已有研究證實巨噬細胞移動抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor，MIF）參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展，在機體炎癥及免疫反應中起炎癥介質作用［1］。研究表明，白細胞介素-17 （Interleukin-17，IL-17）在自身免疫性肝病、脂肪性肝病及肝臟腫瘤中參與肝臟損傷及肝再生過程［2］。白細胞介素-10 （Interleukin-10，IL-10）被認為是一種免疫和炎癥抑制因子，是導致乙型肝炎慢性化的重要因素［3］。本研究檢測了慢性無癥狀HBV攜帶者（Chronic asymptomatic carriers，ASC）、慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患者、乙型肝炎肝硬化（Liver cirrhosis，LC）患者和肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）患者血清MIF、IL-17和IL-10水平，現報道如下。

1　資料與方法

1.1病例來源2012年2月～2013年12月我院住院及門診診治的ASC60例，男性32例，女性28例；年齡21～57歲，

平均年齡（37.28±12.08）歲。CHB患者60例，男性43例，女性17例；年齡28～63歲，平均年齡（41.45±13.17）歲。LC患者60例，男性43例，女性17例；年齡39～66歲，平均年齡（50.23±11.95）歲。肝癌患者60例，男性48例，女性12例；年齡43～69歲，平均年齡（53.72±9.84）歲。肝炎和肝硬化診斷符合2010年12月中華醫(yī)學會肝病學會和感染病學會聯合修定的《慢性乙型肝炎防治指南》［4］的標準。常規(guī)檢查診斷肝癌。選擇健康體檢者50例，男性25例，女性25例；年齡23～58歲，平均年齡（32.15±8.46）歲，排除各型肝炎病毒感染，排除心肺疾病，肝功能正常。

1.2檢測方法采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量（湖南圣湘生物科技有限公司）；采用 ELISA法檢測血清MIF、IL-17和IL-10水平（美國RD公司）；采用貝克曼AU680全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉移酶（ALT）和天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）水平（北京九強生物技術有限公司）。

1.3統計學處理應用SPSS 17.0統計軟件，計量資料以（x±s）表示，對方差齊資料采用t檢驗，對方差不齊資料采用校正t檢驗。采用Pearson相關分析，P＜0.05為具有統計學意義。

2　結果

2.1臨床基本資料見表1。

表1　慢性HBV感染者和健康人肝功能和HBV DNA水平（x±s）比較

2.2慢性HBV感染者與健康人外周血MIF、IL-17和IL-10水平比較與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血MIF水平均顯著升高，差異有統計學意義（t=4.749，t=3.544，t=10.264，t=8.537，P＜0.01）。HCC組MIF水平最高，與CHB組和ASC組比，差異均有統計學意義（t=4.088，t=8.363，P＜0.01），而與LC組比，差異無統計學意義（P＞0.05）；與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-17水平均顯著升高，差異有統計學意義（t=3.716，t=2.074，t=5.009，t=3.723；P＜0.01或P＜0.05）。ASC 組IL-17水平最低，與CHB組、LC組和HCC組相比，差異有統計學意義（t=3.166，t=4.326，t=3.065；P＜0.01）；與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-10水平均顯著升高，差異有統計學意義（t=6.700，t=7.889，t=13.949，t=7.785；P＜0.01）。CHB組IL-10水平最低，與LC組和HCC組比，差異有統計學意義（t=5.409，t=3.411；P＜0.01，表2）。

表2　慢性HBV感染者與健康人外周血MIF、IL-17和IL-10水平（ng/ml，x±s）比較

3　討論

乙型肝炎是一種免疫介導的疾病，機體免疫系統在HBV感染后被激活，免疫細胞釋放多種細胞因子，進而形成一個復雜的免疫調節(jié)網絡，促進肝臟炎癥反應，介導肝細胞損傷，并誘導各類細胞分化增殖，使慢性肝臟炎癥持續(xù)存在。有研究顯示MIF參與了乙型肝炎、肝硬化、肝癌等的發(fā)病過程，其變化與肝臟組織損害程度相關［5］。Th17細胞參與了多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展［6］，其產生的IL-17作為一種強致炎因子與HBV感染后的肝臟炎性損傷有著密切的關系，且大部分的HBV感染者肝內IL-17水平與血清ALT水平或HBV DNA載量呈正相關［7］。有研究表明IL-17與慢性乙型肝炎的發(fā)病有關，并且IL-17的血清水平與肝損傷程度呈正相關［8］。Arnaud et al［9］及Wasmuth et al［10］認為IL-10的產生可能影響HBV感染者的臨床轉歸，高水平的IL-10不利于HBV的清除，可能與HBV感染慢性化有關。Li et al［11］研究發(fā)現在慢性乙型肝炎患者，HBcAg介導Th17細胞參與免疫應答，并同時刺激IL-10分泌，IL-10通過下調維甲酸相關核孤兒受體γt來抑制特異性Th17細胞功能，并且IL-10作用于未成熟的樹突狀細胞，可誘導T細胞失去功能，減弱了對病毒的細胞免疫清除作用，這可能是HBV感染慢性化的主要途徑［12］。

本研究發(fā)現，與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血MIF水平顯著升高，其中HCC組MIF水平最高，說明MIF參與了乙型肝炎、肝硬化、肝癌等肝病的發(fā)病過程，且與肝病的嚴重程度密切相關。

最近的一項研究顯示，在急性肝衰竭發(fā)病過程中，IL-17等細胞因子起至關重要的作用［13］。我們的研究發(fā)現，與健康對照組比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組血清IL-17水平顯著升高，推測血清IL-17隨著乙型肝炎病程的進展其水平也增高，IL-17對肝臟炎癥的進展和細胞的癌變有一定的促進作用。

有研究顯示，肝硬化患者尤其是失代償期肝硬化患者外周血IL-10水平明顯高于健康對照組，并且這種增高隨肝硬化病情的加重而越發(fā)明顯，說明IL-10參與了肝纖維化的發(fā)生發(fā)展［14］。我們的研究發(fā)現，與健康對照組相比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-10水平均顯著升高，其中LC組外周血IL-10水平明顯高于其它組，推測IL-10參與了肝病的相關進程以及肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。另外，ASC組IL-10水平高于CHB組，推測內源性IL-10可以降低HBV感染對肝臟的損害，對肝臟有一定的保護作用，而當IL-10等抗炎因子生成減少，將無法抑制肝臟受到炎性損傷［15］。

本研究通過比較慢性HBV感染者外周血MIF、IL-17和IL-10水平變化，初步闡明這幾種細胞因子在HBV感染慢性化、肝細胞損傷以及疾病進展中的作用，提示檢測血清MIF、IL-17和IL-10水平可作為評估慢性乙型肝炎病情嚴重程度的重要指標。

【參考文獻】

［1］Mitchell RA.Mechanisms and effectors of MIF dependent promotion of tumourigenesis.Cell Signal，2004，16（1）:13-19.

［2］Ge J，Wang K，Meng QH，et al.Implication of Thl7 and Thl cells in patients with chronic active hepatitis B.J Clin Immunol，2010，30（1）:60-67.

［3］Ouyang W，Rutz S，Crellin NK，et al.Regulation and functions of the IL-10 family of cytokines in inflammation and disease. Annu Rev Immunol，2011，29:71-109.

［4］中華醫(yī)學會肝病學分會和感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）.實用肝臟病雜志，2011，14（2）：81-89.

［5］Heinrichs D，Knauel M，Offermanns C，et al.Macrophage migration inhibitory factor（MIF）exerts antifibrotic effects in experimental liver fibrosis via CD74.Proc Natl Acad Sci USA，2011，108（42）:17444-17449.

［6］晁康，龔曉蓉，陳旻湖，等.Th17細胞在肝臟疾病中的免疫病理作用.實用肝臟病雜志，2010，13（3）:224-227.

［7］Zhang JY，Zhang Z，Lin F，et al.Interleukin-17-producing CD4 （+）T cells increase with severity of liver damage in patients with chronic hepatitis B.Hepatology，2010，51:81-91.

［8］任勁松，潘修成，李麗，等.慢性乙型肝炎患者外周血Th17細胞和IL-17檢測及其臨床意義.中華臨床醫(yī)師雜志，2011，5: 4264-4267.

［9］Arnaud V，Li J，Wang Y，et al.Regulatory role of interleukin-10 and interferon-gamma in severe hepatic central and peripheral fibrosis in humans infected with Schistosoma japonicum.J Infect Dis，2008，198:418-426.

［10］Wasmuth HE，Kunz D，Yagmur E，et al.Patients with acute on chronic liver failure display“sepsis-like”immune paralysis.J Hepatol，2005，42:195-201

［11］Li J，Wu W，Peng G，et al.HBcAg induces interleukin-10 production，inhibiting HBcAg-specific Th17 responses in chronic hepatitis B patients.Immunol Cell Biol，2010，88:834-841.

［12］曹憶嶸，彭利軍，歐陽陽陽，等.乙型肝炎病毒感染患者肝硬化發(fā)生相關臨床危險因素評價.肝臟，2013，18（4）:211-215.

［13］趙攀，畢振華，王春亞.急性肝衰竭患者血清炎性細胞因子水平分析.實用肝臟病雜志，2014，17（1）:63-64.

［14］李晨，邢少軍，段學章，等.乙型肝炎肝硬化患者外周血調節(jié)性T細胞頻率及血清IL-1β、IL-6和IL-10水平的變化.實用肝臟病雜志，2012，15（3）:244-246.

［15］孫彤，陳凱紅，裴豪，等.康艾注射液對代償期肝硬化患者多種細胞因子的影響.中西醫(yī)結合肝病雜志，2012，22:210-214.

（收稿：2014-09-03）

（本文編輯：陳宗炳）

第一作者：李彩東，女，45歲，博士，主任藥師。主要從事慢性乙型肝炎發(fā)病機制及治療學研究。 E-mail：lzlicaidong@163.com

DOI：10.3969/j.issn.1672-5069.2015.01.018

*基金項目：蘭州市科技發(fā)展指導性計劃項目（編號：2013-ZD-07）

作者單位：730046甘肅省蘭州市第二人民醫(yī)院肝病研究所

Changes of serum macrophage migration inhibitory factor，IL-17 and IL-10 levels in patients with chronic hepatitis BLi Caidong，Yang Yongwei，Tian Pengfei，et al.Institute of Liver Diseases，Second People’s Hospital，Lanzhou 730046，Gansu Province，China

【Key words】Chronic hepatitis B；Macrophage migration inhibitory factor；Interleukin-17；Interleukin-10