馮曉玲
(吉林師范大學生命科學學院)
本實驗將以任氏液作為灌流液人為地加入各濃度組織胺來改變兩棲類平滑肌收縮活動的內環境,從而觀察平滑肌收縮活動的變化情況。
蟾蜍、1∶5000 磷酸組織胺、任氏液、生物信號采集系統、電熱浴、麥氏浴槽、機械換能器、蛙類手術器械、滴管、燒杯。
取皮膚濕潤、喜愛活動的健康蟾蜍一只,用雙毀髓法破壞蟾蜍的腦和脊髓,背位固定在蛙板上。打開體腔,觀察蟾蜍消化管的活動情況。在十二指腸起始處將腸管結扎并從結扎線以上剪斷至20cm 處。用任氏液沖洗腸斷中的內容物,再從中間剪斷,每次腸斷長約2cm,在腸斷的兩端分別結一個線套,一個用于掛在麥氏浴槽的乙字形管上,另一端結一長線,用于連接張力換能器。在放入離體平滑肌之前,將麥氏浴槽內任氏液溫度控制在37~38℃,每取出一段腸后,迅速將其放入調節適溫打的任氏液中。張力換能器的輸出端與生物信號采集系統的一個輸入通道相連。固定結扎線與張力換能器使腸斷運動正常。打開計算機,開始記錄平滑肌收縮曲線。
(1)記錄離體平滑肌在灌流37~38℃任氏液后收縮曲線,觀察收縮頻率及幅度,作為對照。
(2)加入1∶5000 磷酸組織胺1~2 滴,記錄并觀察收縮活動變化。
(3)等量任氏液換洗,待收縮活動恢復正常后,加入1∶5000磷酸組織胺3~4 滴,記錄并觀察收縮活動變化。
(4)等量任氏液換洗,待收縮活動恢復正常后,加入1∶5000磷酸組織胺5~6 滴,記錄并觀察收縮活動變化。
(5)等量任氏液換洗,待收縮活動恢復正常后,加入1∶5000磷酸組織胺7~8 滴,記錄并觀察收縮活動變化。
消化道平滑肌在任氏液中收縮緩慢而不規則。向麥氏浴槽中滴加入各濃度組織胺后發現收縮活動逐漸依次增強,收縮曲線基線逐漸依次上移,收縮頻率逐漸依次加強。
兩棲類消化道平滑肌,對于一些理化刺激敏感。組織胺,組織胺受體有H1~H4四種亞型,組織胺激活H1受體,通過G 蛋白而激活磷脂酶C,產生肌醇三磷酸與二酰甘油,導致細胞內Ca2+增加,蛋白激酶C 活化,進而引起了消化道平滑肌興奮,收縮頻率和強度加強。
[1]孫永久,黃玉芝.生理學實驗[M].北京大學出版社,2005.
[2]魏香,謝佐平,蘇付榮.生理學實驗指導[M].北京:清華大學出版社,2005.
[3]莫書榮.實驗生理科學[M].北京:科學出版社,2009.
指導教師:孟惠平