HPLC法測定胃得安片中白術內(nèi)酯Ⅰ含量

易　敏，畢云生，張淑瑜，趙文靜，于燕莉

HPLC法測定胃得安片中白術內(nèi)酯Ⅰ含量

易敏，畢云生，張淑瑜，趙文靜，于燕莉＊

［摘要］目的建立胃得安片白術內(nèi)酯的檢測方法，為其質量標準的改進提供依據(jù)。方法色譜柱：SHIMADZU C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（65∶35）；流速：1.0 ml/min；檢測波長220 nm，柱溫：30℃。樣品中白術內(nèi)酯Ⅰ提取工藝為：甲醇超聲處理30 min。結果白術內(nèi)酯Ⅰ在2.4～38.4 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好（r=0.9996、n=5），平均回收率為99.03%，RSD=0.37%。結論本方法簡便可靠，重復性好，可用于該制劑的質量控制。

［關鍵詞］高效液相色譜法；薄層色譜法；胃得安片；白術內(nèi)酯Ⅰ

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent 1200高效液相色譜儀，VWD G1314B紫外檢測器，Agilent 1200色譜工作站 （均為美國安捷倫公司）；UV-2550紫外分光光度計（日本島津公司）；BS124S電子天平 （北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；AS-3120型超聲清洗器（北京華瑞博遠科技發(fā)展有限公司）；薄層硅膠板G（100 mm× 200 mm，青島海浪硅膠干燥劑廠）；ZF-A紫外透射反射分析儀（上海驥輝科學分析儀器有限公司）。

1.2試藥胃得安片（規(guī)格：0.46 g/片，濟南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室提供，批號：20141123；20141215；20150108），白術內(nèi)酯Ⅰ對照品（含量≥98%，中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，批號：1017-080819），白術對照藥材 （中國藥品生物制品檢定所，批號：120925-200708）甲醇為色譜純，超純水，乙醚、乙酸乙酯、石油醚（60～90℃）等其他試劑均為分析純。

2　白術薄層鑒別

取胃得安片20片研為細末，稱取粉末1.0 g，加乙醚20 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為樣品溶液；另取白術對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液；按照胃得安片制備工藝，制備不含白術藥材的陰性對照品，按樣品溶液制備方法制備白術的陰性對照品溶液。分別吸取10 μl樣品溶液、對照品溶液及陰性對照溶液，點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，105℃烘干，置紫外光燈（365 nm）下檢視［3］。供試品色譜中，在與對照品色譜斑點相應位置上，有相同的熒光斑點，而陰性對照色譜中在相應的位置上無斑點干擾。結果見圖1。

圖1　白術TLC圖譜

3　白術內(nèi)酯Ⅰ的含量測定

3.1色譜條件SHIMADZU C18色譜柱 （250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（65∶35）；流速：1 ml/ min；檢測波長220 nm。柱溫：30℃；進樣量：20 μl［4-6］。

3.2溶液制備①對照品溶液。精密稱取白術內(nèi)酯Ⅰ對照品0.0048 g，置100 ml容量瓶中，超聲處理30 min，冷卻至室溫，甲醇定容，搖勻，配制成0.1 mg/ ml的溶液，微孔濾膜濾過，作為對照品溶液。②樣品溶液。取胃得安片20片，研細過80目篩，精密稱量粉末約1.5 g，置于10 ml容量瓶中，精密加入甲醇適量，超聲提取30 min，冷卻至室溫，甲醇定容，搖勻，微孔濾膜濾過，作為樣品溶液。③陰性對照溶液。按處方比例制備缺少含有白術藥材的樣品，按以上樣品溶液制備方法制得陰性對照溶液。

3.3專屬性試驗分別精密吸取對照品、供試品、陰性對照品溶液注入液相色譜儀，按2.1項下的色譜條件進行測定，記錄HPLC圖譜。結果陰性對照品溶液在白術內(nèi)酯Ⅰ吸收峰對應保留時間無吸收峰，表明處方中其他成分對白術內(nèi)酯Ⅰ含量測定無干擾。結果見圖2。

3.4線性關系精密量取“2.2”項下的對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml分別置于10 ml量瓶中，加甲醇定容，搖勻，分別按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，以白術內(nèi)酯Ⅰ濃度（μg/ml）為橫坐標X，吸收峰面積積分值為縱坐標Y，進行線性回歸，得方程為：y=7×106x+38630（r=0.9996）。表明白術內(nèi)酯Ⅰ在2.4～38.4 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

3.5精密度試驗取同一白術內(nèi)酯Ⅰ標準品溶液，在“2.1”項下色譜條件下連續(xù)進樣6次，記錄白術內(nèi)酯Ⅰ吸收峰面積，計算RSD值為1.43%（n=6），表明儀器精密度良好。

圖2　HPLC圖譜

3.6穩(wěn)定性試驗取同一批胃得安片（批號：20150108）的樣品溶液，在“2.1”項的色譜條件下分別于0、2、4、8、16、24 h進樣，每次20 μl，記錄白術內(nèi)酯Ⅰ吸收峰面積，結果RSD=1.62%（n=6），表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7重復性試驗取同一批胃得安片（批號：20150108）樣品，按“2.2”項下樣品溶液制備方法平行制備6份，按“2.1”項的色譜條件進行測定，結果白術內(nèi)酯Ⅰ的平均含量為30.18 μg/g，RSD=0.85%，表明重復性良好。

3.8加樣回收率試驗取已知白術內(nèi)酯Ⅰ含量的同一批胃得安片（批號：20150108）樣品，精密稱取6份，分別加入已知不同量的白術內(nèi)酯Ⅰ標準品，按照上述方法制備樣品溶液，并按色譜條件測定白術內(nèi)酯Ⅰ含量，計算加樣回收率，結果見表1。

3.9樣品含量測定取胃得安片3批 （批號為：20141123；20141215；20150108），按“2.2”項下方法制備樣品溶液，精密吸取樣品溶液注入液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定，每個樣品平行進樣3次，記錄峰面積，白術內(nèi)酯Ⅰ含量分別為30.17、30.24、30.18 μg/g，平均含量為30.20 μg/g。

表1　加樣回收率試驗結果（n=6）

4　討論

現(xiàn)代研究表明，白術內(nèi)酯Ⅰ能促進大黃致虛模型大鼠胃腸道消化吸收，能夠增強唾液淀粉酶等消化酶活性，調(diào)節(jié)胃腸道功能［7］、是健脾的主要有效成分之一。能夠顯著抑制急性和慢性炎癥大鼠模型的炎癥反應，表明白術內(nèi)酯Ⅰ有一定的抗炎作用，能夠抑制胃腸道炎癥反應，減輕胃腸道黏膜水腫，抑制組織細胞損傷，維持正常的消化吸收功能［2］。

試驗過程中對比分析了Kromasil C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）與SHIMADZU C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）兩種類型色譜柱對樣品的分離效果，結果用SHIMADZU C18色譜柱白術內(nèi)酯Ⅰ峰形較好，分離效果好。

對不同的流動相系統(tǒng)乙腈-水梯度洗脫［4］、乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫［5］、甲醇-水［6］進行考察，考察過程中對流動相配比進行調(diào)整，結果以甲醇-水（65∶35）為流動相時分離效果最好，峰形良好，無拖尾現(xiàn)象，分離度高。

采用紫外分光光度計對白術內(nèi)酯Ⅰ標準品溶液進行波普掃描（200～400 nm），結果白術內(nèi)酯Ⅰ在220 nm處有最大吸收峰，確定HPLC檢測波長為220 nm。

【參考文獻】

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［7］趙桂芝，洪學智，戴詩文，等.白術內(nèi)酯的藥理學研究進展［J］.中國藥房，2009，20（3）：230-231.

［2015-05-17收稿，2015-06-18修回］［本文編輯：李思睿］

［中圖分類號］R927.2

［文獻標志碼］A

［作者單位］250014山東濟南，山東省軍區(qū)門診部（易敏）；250031山東濟南，濟南軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科（畢云生，張淑瑜，趙文靜，于燕莉）

［通訊作者］于燕莉，Email：yuyanli323@sohu.com

Determination of atractylenolide-I in Weidean tablet by HPLC

YI Min①，BI Yun-sheng，ZHANG Shuyu，et al.①Shandong Province Military Area Commands Clinics，Jinan，Shandong 250014，China

［Abstract］ObjectiveTo establish a detection method of atractylenolide-I in Weidean tablet，so provide the basis for the improvement of quality standards.MethodsThe determination was performed on SHIMADZU C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column with the mobile phase of methanol-water（65∶35）at the flow rate of 1.0 ml/ min.The detection wavelength was set at 220 nm.And the column temperature was 30℃.Extraction process of atractylenolide-I in sample was follows：put methanol in sample powder and take ultrasonic processing for 30 min. ResultsThe linear relation of atractylenolide-I was excellent within the range of 2.4-38.4 μg/ml（r=0.9996，n= 5），and the average recovery ratio was 99.03%，RSD=0.37%.ConclusionAbove-mentioned method is simple，reliable and good in repeatability，could be used for the quality control of Weidean tablet.

［Key words］HPLC；TLC；Weidean tablet；Atractylenolide-I胃得安片為濟南軍區(qū)總醫(yī)院制劑，處方來源于明朝宮廷醫(yī)書《壽世保元》中的無價金丹，由白術、蒼術、茯苓、黃連、陳皮、檳榔等中藥組成，具有健脾和胃、消食止痛之功效，主要用于治療慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等疾病的預防和治療。方中以白術為君，具有健脾益氣，燥濕利水等功效［1］，能夠“…強脾胃，進飲食…”，為“脾補氣第一要藥”《本草求真》［2］。本研究分別運用薄層色譜法（TLC）、高效液相色譜法（HPLC）分別對胃得安片中白術進行定性定量檢測，為完善胃得安片質量控制標準與方法，增強臨床治療效果提供研究依據(jù)。