生長(zhǎng)抑素對(duì)顱腦損傷伴休克大鼠肝損傷的保護(hù)作用

王麗，王華偉，李瑞

生長(zhǎng)抑素對(duì)顱腦損傷伴休克大鼠肝損傷的保護(hù)作用

王麗，王華偉，李瑞

［作者單位］250031山東濟(jì)南，解放軍456醫(yī)院特檢科（王麗，王華偉，李瑞）

目的觀察生長(zhǎng)抑素（SST）對(duì)顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）大鼠肝損傷的保護(hù)作用。方法Wistar大鼠36只，按隨機(jī)數(shù)字表法分成假手術(shù)組（C組）、TBIS模型組和SST治療組，每組12只。對(duì)大鼠血清腫瘤壞死因子（TNF）-α、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）及肝組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽（GSH）的水平進(jìn)行檢測(cè)；病理切片觀察肝組織病理學(xué)改變。結(jié)果與C組比較，TBIS組血清TNF-α、ALT及AST水平與肝組織勻漿MDA水平明顯升高（P＜0.01）；肝組織勻漿SOD及GSH水平均明顯降低（P＜0.01）。與TBIS組比較，SST治療組血清TNF-α、ALT及AST水平，肝組織勻漿MDA水平均明顯降低（P＜0.01），肝組織勻漿SOD及GSH水平均明顯升高（P＜0.01）。病理學(xué)檢查可見(jiàn)TBIS組肝組織形態(tài)明顯受損，SST治療組肝組織受損較小。結(jié)論SST干預(yù)可抑制氧自由基產(chǎn)生及促炎細(xì)胞因子的釋放，從而減輕TBIS大鼠繼發(fā)性肝損傷。

顱腦損傷；休克；肝損傷；生長(zhǎng)抑素

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）病情兇險(xiǎn)、并發(fā)癥多見(jiàn)，是臨床上常見(jiàn)的危重癥之一，救治難度大，預(yù)后較差，而過(guò)度炎癥反應(yīng)是引起機(jī)體二次損傷的重要原因［1］。在TBIS進(jìn)展過(guò)程中，肝的損傷對(duì)患者的預(yù)后起著非常重要的作用。因此，如何抑制過(guò)度炎癥反應(yīng)，減輕肝的損傷，對(duì)改善患者預(yù)后具有重要的意義。有研究證實(shí)生長(zhǎng)抑素（SST）能夠抑制免疫過(guò)度激活，減輕炎癥反應(yīng)［2，3］。

本研究對(duì)TBIS大鼠進(jìn)行SST干預(yù)，檢測(cè)血清腫瘤壞死因子（TNF）-α、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）、肝組織超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）的水平，并觀察肝組織病理學(xué)改變，旨在探討SST對(duì)TBIS大鼠肝損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組清潔級(jí)雄性Wistar大鼠36只，體重220～250 g，由山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)前8 h禁食。按隨機(jī)數(shù)字表法分成假手術(shù)組（C組）、TBIS模型組和SST干預(yù)組，每組12只。

SST干預(yù)組于模型制成后0.5、1、2 h皮下注射SST（注射用SST由瑞士默克雪蘭諾公司生產(chǎn)），給予量為20 μg/kg體重。C組及TBIS組皮下注射等量生理鹽水。

本研究動(dòng)物處置方法符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2動(dòng)物模型制備大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，不禁水。采用自由落體復(fù)制顱腦外傷合并休克模型［1］。假手術(shù)組僅開顱窗后骨蠟封閉骨窗，不予以打擊及放血。在各組模型制成120 min后快速?gòu)念i動(dòng)脈采血，處死取肝組織。

1.3標(biāo)本留取及指標(biāo)測(cè)定

1.3.1血清TNF-α、ALT及AST水平測(cè)定取血2 ml，室溫放置30 min，離心取上清。以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定TNF-α，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。用Olympus AU2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定ALT及AST活性，試劑盒由上海申能-德賽有限公司提供。

1.3.2肝組織MDA、SOD及GSH水平測(cè)定取肝組織，立即置于-70℃低溫冰箱保存。以硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA，以黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD，以二硫代硝基苯甲酸比色法測(cè)定GSH，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.3.3肝組織形態(tài)學(xué)觀察取肝組織1 cm×1 cm× 1 cm，用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，用HE染色，在光鏡下觀察肝組織形態(tài)學(xué)改變。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1血清TNF-α、ALT及AST水平比較TBIS組血清TNF-α、ALT及AST水平明顯高于C組（P＜0.01）；SST干預(yù)組與TBIS組比較，SST干預(yù)組血清TNF-α、ALT及AST水平明顯降低（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1　血清TNF-α、ALT及AST水平比較

表1　血清TNF-α、ALT及AST水平比較

注：與C組比較，＊P＜0.01；與TBIS組比較，#P＜0.01

組別TNF-α（ng/ml）ALT（U/L）AST（U/L）C組68.4±13.529.1±6.339.1±8.3 TBIS組309.7±36.1＊194.9±13.4＊217.7±22.1 SST干預(yù)組210.4±37.8＊#138.2±12.9＊#155.1±27.2

2.2肝組織MDA、SOD及GSH活性比較TBIS組肝組織勻漿MDA活性明顯高于C組（P＜0.01），SOD及GSH活性均低于C組（P＜0.01）。與TBIS組比較，與SST干預(yù)組肝組織勻漿MDA活性顯著降低（P＜0.01），SOD及GSH活性均明顯升高（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

2.3肝組織病理形態(tài)學(xué)比較光鏡下觀察，對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，排列整齊，肝竇內(nèi)無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。而TBIS組可見(jiàn)肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，肝竇擴(kuò)張，肝竇內(nèi)有較多中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，部分肝細(xì)胞變性、壞死。SST干預(yù)組肝組織破壞較輕，肝小葉結(jié)構(gòu)尚清晰，肝竇內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)較少。

表2　肝組織MDA、SOD及GSH活性比較

表2　肝組織MDA、SOD及GSH活性比較

注：與C組比較，＊P＜0.01；與TBIS組比較，#P＜0.01

組別MDA（nmol/mg pro）SOD（U/mg pro）GSH（mg/g pro）C組3.59±0.8732.51±8.04398.2±58.7 TBIS組7.13±1.62＊16.02±4.91＊211.7±52.9＊SST干預(yù)組4.82±1.07＊#24.55±5.14＊#296.2±64.3＊#

3　討論

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）病情兇險(xiǎn)、并發(fā)癥多見(jiàn)，是臨床上常見(jiàn)的危重癥之一，救治難度大，預(yù)后較差。在TBIS進(jìn)展過(guò)程中，肝的損傷對(duì)患者的預(yù)后起著非常重要的作用。因此，如何抑制過(guò)度炎癥反應(yīng)，減輕因過(guò)度炎癥反應(yīng)所引起的機(jī)體二次損傷，減輕肝的損傷，對(duì)改善患者預(yù)后具有重要的意義。

生長(zhǎng)抑素（SST）是一種廣泛存在于胃腸道、腦、內(nèi)外分泌腺等組織的環(huán)狀多肽，通過(guò)與細(xì)胞膜上的SST受體結(jié)合而發(fā)揮多種生物學(xué)效應(yīng)。有研究證實(shí)，SST能夠抑制免疫過(guò)度激活，減輕炎癥反應(yīng)［3，4］。本研究應(yīng)用SST對(duì)TBIS大鼠進(jìn)行干預(yù)，通過(guò)檢測(cè)血清TNF-α、ALT及AST和肝組織MDA、SOD及GSH的水平變化，光鏡下觀察肝組織病理改變，探討SST干預(yù)對(duì)TBIS所致肝損傷的影響。

本研究中TBIS大鼠組織病理學(xué)鏡檢可見(jiàn)肝竇擴(kuò)張、瘀血明顯，肝竇內(nèi)有較多中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，部分肝細(xì)胞變性、壞死；血清ALT及AST活性均明顯升高，說(shuō)明TBIS大鼠肝臟組織形態(tài)及肝功能均出現(xiàn)明顯的損害。而SST干預(yù)組肝組織結(jié)構(gòu)尚清晰，肝竇內(nèi)有散在的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肝組織破壞較輕，血清ALT及AST活性明顯下降。說(shuō)明在TBIS早期，肝臟組織結(jié)構(gòu)遭受破壞，急性肝損傷表現(xiàn)明顯，而SST干預(yù)能有效減輕肝組織的損傷。

在TBIS進(jìn)展過(guò)程中生物膜脂質(zhì)過(guò)氧化或氧應(yīng)激損傷引起多種炎癥介質(zhì)的釋放，是促進(jìn)休克惡化，誘發(fā)“炎性瀑布”發(fā)生的重要因素之一。SOD、MDA及GSH是目前公認(rèn)的能較好地反映機(jī)體內(nèi)氧自由基及脂質(zhì)過(guò)氧化損傷程度和機(jī)體對(duì)氧自由基清除能力的間接指標(biāo)。TNF-α是多種炎癥介質(zhì)復(fù)合網(wǎng)中的中心因子，是引起多種促炎細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)失控性釋放的關(guān)鍵因素，其除直接損失組織細(xì)胞外，還進(jìn)一步活化炎性細(xì)胞，形成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，產(chǎn)生炎癥瀑布效應(yīng)，引起多器官功能損傷。

本研究結(jié)果顯示，TBIS組肝組織勻漿MDA活性和血清TNF-α的水平均高于對(duì)照組，SOD及GSH活性均低于對(duì)照組。說(shuō)明在TBIS早期，肝組織即發(fā)生了較強(qiáng)的脂質(zhì)過(guò)氧化，并產(chǎn)生大量氧自由基。而SOD水平的降低使得機(jī)體對(duì)氧自由基的清除能力下降，并可進(jìn)一步造成機(jī)體的氧化與抗氧化平衡體系被打破，導(dǎo)致肝組織中大量脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物的蓄積，引起急性肝損傷的發(fā)生。與TBIS組比較，SST干預(yù)組肝組織勻漿MDA活性和血清TNF-α的水平均降低，肝組織勻漿SOD及GSH活性均升高。說(shuō)明SST干預(yù)，能明顯降低TNF-α及氧自由基的產(chǎn)生，有效增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化水平，從而減輕肝組織的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。

總之，SST干預(yù)可有效降低TBIS大鼠的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，增強(qiáng)清除氧自由基的能力，減輕炎癥反應(yīng)，對(duì)TBIS所致肝損傷具有保護(hù)作用。

［1］許會(huì)彬，王青，王化芬，等.ω-3 PUFA對(duì)顱腦損傷伴休克大鼠繼發(fā)性肝損傷的保護(hù)作用［J］.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2013，22 （12）：1104-1107.

［2］徐麗艷，劉瑤，韓文文，等.生長(zhǎng)抑素對(duì)內(nèi)毒素致小鼠急性肺損傷中炎癥反應(yīng)的影響和機(jī)制［J］.中華危重病急救醫(yī)學(xué)，2014，26（05）：315-320.

［3］王文進(jìn)，邵莉莉，顏加云，等.大黃聯(lián)合生長(zhǎng)抑素治療急性重癥胰腺炎的系統(tǒng)評(píng)價(jià)［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，23（01）：31-35.

［4］瞿星光，張朝暉，周剛，等.生長(zhǎng)抑素與前列腺素E1聯(lián)合應(yīng)用治療重癥急性胰腺炎初步臨床研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2014，43 （01）：79-82. ［2015-04-27收稿，2015-05-25修回］

［本文編輯：韓仲琪］

Protective effects of somatostatin on liver injury in rats with traumatic brain injury complicated with hemorrhagic shock

WANG Li，WANG Hua-wei，LI Rui.Department of Special Examination，the 456th Hospital of Chinese PLA，Jinan，Shandong 250031，China

ObjectiveTo investigate the effects of preconditioning with somatostatin（SST）on liver injury in rats with traumatic brain injury complicated with hemorrhagic shock（TBIS）and its underlyingmechanisms. MethodsThe 36 male Wistar rats of clean grade were assigned randomly into 3 groups：sham operation group （C），TBIS model group and SST pretreatment group，each group included 12 rats.The arterial blood samples were taken for determination of serum levels of TNF-α，ALT and AST.The liver were removed for determination of levels of malondialdehyde（MDA），superoxide dismutase（SOD）and glutathione（GSH）.Pathological changes in liver tissues were observed by light microscope.ResultsCompared with group C，the serum levels of TNF-α，ALT and AST and the liver levels of MDA were significantly higher（P＜0.01），but the liver levels of SOD and GSH in group TBIS（P＜0.01）.The serum levels of TNF-α，ALT and AST and the liver levels of MDA were significantly lower（P＜0.01），but the levels of SOD and GSH in liver tissues were significantly higher（P＜0.01）in group SST than those in group TBIS.Histological examination revealed the injury of liver in TBIS group，and the rats in SST treated group showed alleviated severity of liver injury.ConclusionThe supplementation of SST can ameliorate liver injury in rats with TBIS which may contribute to the inhibition of peroxide injury and oxygen free radicals.

Traumatic brain injury；Shock；Liver injury；Somatostatin

R683.5

A