6種殺菌劑對5種藍(lán)莓枝枯病原菌的室內(nèi)毒力測定

岳清華+高勇+廖甜甜+鄭建立+董克鋒+姜惠鐵

摘 要：

葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea、棒狀擬盤多毛孢Pestalotiopsis clavispora、烏飯樹擬莖點(diǎn)霉Phomopsis vaccinii、尖孢炭疽菌Colletorichum acutatum、膠孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides 5種病原菌是目前引起山東青島膠南地區(qū)藍(lán)莓枝枯病的主要病原菌。本試驗(yàn)采用菌絲生長速率法測定6種殺菌劑的毒力。結(jié)果表明，吡唑嘧菌酯、咯菌腈、苯甲·丙環(huán)唑?qū)?種病原菌抑制作用較強(qiáng)，EC50值介于0.0035～2.2245 mg·L-1之間，對由該5種病原菌引起的藍(lán)莓枝枯病防效很好。

關(guān)鍵詞：藍(lán)莓枝枯病;殺菌劑;毒力測定

中圖分類號：S436.639 ?文獻(xiàn)標(biāo)識號：A ?文章編號：1001-4942（2015）06-0101-03

Indoor Toxicity Test of Six Fungicides

against Five Pathogens of Blueberry Twig Dieback

Yue Qinghua1，2， Gao Yong1，2， Liao Tiantian1，2， Zheng Jianli1，2， Dong Kefeng1，2， Jiang Huitie1，2

（1.Qingdao Engineering Technology Center of Blueberry/Wallen Blueberry Limited Company of Joyvio，

Qingdao 266000， China; 2. Wallen Agricultural （Qingdao） Limited Company， Qingdao 266000， China）

Abstract Botryosphaeria dothidea， Pestalotiopsis clavispora， Phomopsis vaccinii， Colletorichum acutatum， Colletotrichum gloeosporioides were 5 main pathogens of blueberry twig dieback in Qingdao Jiaonan area of Shandong Province. The indoor toxicities of 6 fungicides against 5 pathogens were detected by mycelium growth rate method. The results showed that pyraclostrobin，fludioxonil，difenoconazole-propiconazole had relatively strong inhibition rate. The EC50 were between 0.0035～2.2245 mg·L-1. ?The control effects were excellent.

Key words Blueberry twig blight; Fungicide;Toxicity test

藍(lán)莓果實(shí)營養(yǎng)價值高，除一般的果糖、維生素外，還富含抗氧化劑、花青素和黃酮素，具有抗氧化、抗發(fā)炎、抗癌、降血壓、降膽固醇、降血脂等作用，是一種營養(yǎng)豐富且蘊(yùn)含較大經(jīng)濟(jì)價值的水果，市場上對藍(lán)莓的需求在不斷增長[1]。引種以來我國栽培面積逐年增加，僅山東青島地區(qū)栽種面積就已達(dá)到上萬畝。目前我國藍(lán)莓病害種類較少[2～5]，枝枯病已成為危害藍(lán)莓生產(chǎn)的重要病害。近幾年來，青島膠南地區(qū)藍(lán)莓園內(nèi)，枝枯病的發(fā)生逐年加重，4～5月和7～9月是枝枯病發(fā)生的高峰期，枝條萎蔫枯死，花朵、果實(shí)干枯脫落，常造成幾十株至上百株樹體死亡，經(jīng)過調(diào)查并進(jìn)行了病原菌分離，經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方法鑒定，葡萄座腔菌Botryosphaeria dothidea[6]、棒狀擬盤多毛孢Pestalotiopsis clavispora[7]、烏飯樹擬莖點(diǎn)霉Phomopsis vaccinii[8]、尖孢炭疽菌Colletorichum acutatum[9]、膠孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides [9]5種病原菌是引起該地區(qū)枝枯病的主要病原菌。筆者選用幾種高效低毒的新型殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，篩選效果較好者，以防治該病害。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試5種菌株從山東青島膠南地區(qū)藍(lán)莓園內(nèi)枝枯病枝中分離得到，經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)測序鑒定后使用。菌株目前保存在青島藍(lán)莓工程技術(shù)中心微生物實(shí)驗(yàn)室。

1.2 供試藥劑

供試藥劑見表1。

表1 供試藥劑

藥劑名稱英文通用名劑型生產(chǎn)廠家

250 g/L 吡唑嘧菌酯Pyraclostrobin乳油德國巴斯夫股份有限公司

24% 腈苯唑Myclobutanil懸浮劑美國陶氏益農(nóng)公司

25 g/L 咯菌腈Fludioxonil懸浮種衣劑瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司

500 g/L 氟啶胺Fluazinam懸浮劑日本石原產(chǎn)業(yè)株氏會社

250 g/L 嘧菌酯Azoxystrobin懸浮劑瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司

300 g/L 苯甲·丙環(huán)唑Difenoconazole

-propiconazole乳油深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司

1.3 室內(nèi)毒力測定方法

采用菌絲生長速率法[10]測定6種殺菌劑對葡萄座腔菌、烏飯樹擬莖點(diǎn)霉、棒狀擬盤多毛孢、尖孢炭疽菌、膠孢炭疽菌的毒力，用無菌水將供試藥液稀釋成一系列梯度濃度（20、10、5、1、0.2、0.05 mg/L）后配制含藥PDA平板。取培養(yǎng)4 d的病原菌菌落，打取直徑為6 mm的菌餅，用接種針將菌餅反面移植到含藥培養(yǎng)基上，每皿接入一個菌餅，以加入無菌水的培養(yǎng)基為對照。每處理重復(fù)3次。接菌后將培養(yǎng)皿倒置放入28℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)，5 d后采用十字交叉法測量菌落直徑大小，計算抑制率。并以藥劑質(zhì)量濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，各處理濃度的生長抑制率的幾率值為縱坐標(biāo)，求出毒力回歸方程、EC50值和相關(guān)系數(shù)[11]，根據(jù)EC50值評價殺菌劑毒力大小。endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 6種殺菌劑對B. dothidea的毒力測定

從表2可以看出，吡唑嘧菌酯的EC50值最小，為0.0081 mg·L-1;其次為苯甲·丙環(huán)唑、咯菌腈、腈苯唑，EC50值分別為0.0155、0.0177、0.2716 mg·L-1;氟啶胺、嘧菌酯的EC50值較大，分別為8.9653、321.6918 mg·L-1。結(jié)果表明，吡唑嘧菌酯對B. dothidea的抑制效果最好，嘧菌酯的抑制效果最差。

表2 6種殺菌劑對B. dothidea的毒力回歸方程

藥劑名稱毒力回歸方程EC50

（mg·L-1）相關(guān)系數(shù)

（r）

250 g/L 吡唑嘧菌酯Y=1.2459X+7.60740.00810.9426

24% 腈苯唑Y=0.2507X+5.14190.27160.9497

25 g/L 咯菌腈Y=1.0243X+6.79440.01770.9502

500 g/L 氟啶胺Y=0.3626X+6.10508.96530.9541

250 g/L 嘧菌酯Y=0.3293X+4.1743321.69180.9522

300 g/L 苯甲·丙環(huán)唑Y=1.2841X+7.32370.01550.9644

2.2 6種殺菌劑對P. vaccinii的毒力測定

從表3可以看出，吡唑嘧菌酯的EC50值最小，為0.0406 mg·L-1;其次為腈苯唑、咯菌腈、苯甲·丙環(huán)唑、氟啶胺，EC50值分別為1.5568、1.8358、2.2245、4.5628 mg·L-1;嘧菌酯的EC50值最大，為59.1282 mg·L-1。結(jié)果表明，吡唑嘧菌酯對P. vaccinii的抑制效果最好，嘧菌酯的抑制效果最差。

表3 6種殺菌劑對P. vaccinii的毒力回歸方程

藥劑名稱毒力回歸方程EC50

（mg·L-1）相關(guān)系數(shù)

（r）

250 g/L 吡唑嘧菌酯Y=1.0913X+6.51830.04060.9548

24% 腈苯唑Y=0.3782X+6.81831.55680.9585

25 g/L 咯菌腈Y=0.2786X+6.04091.83580.9411

500 g/L 氟啶胺Y=0.8296X+7.77154.56280.9521

250 g/L 嘧菌酯Y=0.312X+4.447259.12820.9548

300 g/L 苯甲·丙環(huán)唑Y=0.8225X+8.00442.22450.9550

2.3 6種殺菌劑對P. clavispora的毒力測定

從表4可以看出，吡唑嘧菌酯的EC50值最小，為0.0085 mg·L-1;其次為咯菌腈、苯甲·丙環(huán)唑，EC50值分別為0.0424、0.0452 mg·L-1;氟啶胺、嘧菌酯、腈苯唑的EC50值較大，為7.8400、8.9232、14.3743 mg·L-1。結(jié)果表明，吡唑嘧菌酯對P. clavispora的抑制效果最好，腈苯唑的抑制效果最差。

2.4 6種殺菌劑對C. acutatum的毒力測定

從表5可以看出，苯甲·丙環(huán)唑的EC50值最小，為0.0035 mg·L-1;其次為咯菌腈、吡唑嘧菌酯、嘧菌酯、腈苯唑、氟啶胺，EC50值分別為0.0038、0.0145、0.0369、0.0802、0.0984 mg·L-1。結(jié)果表明，6種藥劑對尖孢炭疽菌均有較強(qiáng)的抑制作用，其中苯甲·丙環(huán)唑?qū). acutatum的抑制效果最好，氟啶胺的抑制效果稍差。

表4 ?6種殺菌劑對P. clavispora的毒力回歸方程

藥劑名稱毒力回歸方程EC50

（mg·L-1）相關(guān)系數(shù)

（r）

250 g/L 吡唑嘧菌酯Y=1.2555X+7.59890.00850.9487

24% 腈苯唑Y=0.0514X+4.940514.37430.9457

25 g/L 咯菌腈Y=1.0139X+6.39200.04240.9552

500 g/L 氟啶胺Y=0.2498X+6.77507.8400 0.9507

250 g/L 嘧菌酯Y=0.1152X+6.38818.92320.9107

300 g/L 苯甲·丙環(huán)唑Y=1.4781X+6.98770.04520.9605

表5 6種殺菌劑對C. acutatum的毒力回歸方程

藥劑名稱毒力回歸方程EC50

（mg·L-1）相關(guān)系數(shù)

（r）

250 g/L 吡唑嘧菌酯Y=1.3629X+7.50410.01450.9550

24% 腈苯唑Y=0.1304X+5.14290.08020.9479

25 g/L 咯菌腈Y=0.3044X+5.73840.00380.9494

500 g/L 氟啶胺Y=0.5931X+5.59730.09840.9515

250 g/L 嘧菌酯Y=0.1377X+5.19740.03690.9432

300 g/L 苯甲·丙環(huán)唑Y=1.0588X+7.59950.00350.9612

2.5 6種殺菌劑對C. gloeosporioides的毒力測定

從表6可以看出，氟啶胺的EC50值最小，為0.0075 mg·L-1;其次為吡唑嘧菌酯、苯甲·丙環(huán)唑、咯菌腈，EC50值分別為0.0079、0.0267、0.2167 mg·L-1;腈苯唑、嘧菌酯的EC50值大，分別為97 296.0565、54 858.7470 mg·L-1。結(jié)果表明，氟啶胺對C. gloeosporioides的抑制效果最好，腈苯唑的抑制效果最差。endprint

表6 6種殺菌劑對C. gloeosporioides的

毒力回歸方程

藥劑名稱毒力回歸方程EC50

（mg·L-1）相關(guān)系數(shù)

（r）

250 g/L 吡唑嘧菌酯Y=1.243X+7.61000.00790.9509

24% 腈苯唑Y=0.0756X+4.622997296.0565 0.9387

25 g/L 咯菌腈Y=0.3245X+5.21550.21670.9549

500 g/L 氟啶胺Y=0.4838X+6.02820.00750.9494

250 g/L 嘧菌酯Y=0.1883X+4.107654858.7470 0.9507

300 g/L 苯甲·丙環(huán)唑Y=1.3888X+7.18560.02670.9598

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)測定了6種殺菌劑對5種藍(lán)莓枝枯病原菌的室內(nèi)毒力，針對引起藍(lán)莓枝枯病的病原菌較多、在田間發(fā)病癥狀相似的特點(diǎn)，應(yīng)選擇殺菌譜廣、高效低毒的農(nóng)藥進(jìn)行防治。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，吡唑嘧菌酯、咯菌腈、苯甲·丙環(huán)唑?qū)?種病原菌均有很好的抑制作用，EC50值介于0.0035～2.2245 mg·L-1之間。并且3種藥作用方式各有不同，吡唑嘧菌酯為新型甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，作用方式為抑制病原菌線粒體呼吸;咯菌腈為新型吡咯類保護(hù)性殺菌劑，作用方式為抑制病原菌葡萄糖磷酰化有關(guān)的轉(zhuǎn)移，抑制真菌菌絲體的生長;苯甲·丙環(huán)唑由兩種三唑類殺菌劑組合而成，作用方式為抑制病原菌的麥角甾醇生物合成，破壞真菌細(xì)胞膜的生理作用。3種農(nóng)藥均具有抗菌譜較廣、高效低毒的特點(diǎn)，為避免病原菌產(chǎn)生抗藥性，建議3種農(nóng)藥輪換使用。

目前國內(nèi)針對藍(lán)莓枝枯病還沒有系統(tǒng)性的防治措施報道。防治藍(lán)莓枝枯病除了要加強(qiáng)田間水肥管理、及時清理銷毀病枝外，適時使用殺菌劑化學(xué)防治也是十分快速有效的手段。枝枯病菌潛伏期長，多在溫度適宜、天氣潮濕的季節(jié)發(fā)病，為預(yù)防枝枯病害的發(fā)生，應(yīng)在春季和夏季產(chǎn)果后提早噴灑藥劑進(jìn)行預(yù)防。本試驗(yàn)中篩選的3種殺菌劑室內(nèi)試驗(yàn)對病原菌有很好的抑制作用，在田間影響因素較多，其效果還需田間驗(yàn)證。

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