甲狀腺乳頭狀癌中KAI1的表達及意義

王曉明 盧秀波 呂金鋒

1)河南省焦作市焦作煤業(集團)有限責任公司中央醫院普外科 焦作 454000 2)鄭州大學第一附屬醫院 鄭州 450052

Dong JT［1］于1995年首先報道了位于人染色體11P11.2位點的基因，認為它對前列腺癌轉移的抑制具有特異性，而對腫瘤原發病灶的生長沒有影響，并命名為KAI1。目前研究發現，KAI1 蛋白表達的下調或缺失與多種人體腫瘤的病程進展密切相關:腫瘤病程越晚，其表達就越低［2］。近年來，甲狀腺癌發病率有上升趨勢，其中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid cancer，PTC)占絕大多數，而針對KAI1 在甲狀腺癌中的研究資料甚少。本研究通過檢測PTC、甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織中KAI1 的表達，探討KAI1 與甲狀腺乳頭狀癌發生發展的關系。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集2006 -01—2008 -12 間我院手術切除的PTC58例、甲狀腺腺瘤30例和瘤旁正常甲狀腺組20例作為實驗標本，并把PTC 分為淋巴結轉移組22例和無淋巴結轉移組36例。伴淋巴結轉移的PTC 病例中:男10例，女12例;年齡23～92 歲，平均48.1 歲。無淋巴結轉移的PTC 病例中:男19例，女17例;年齡21～78 歲，平均46.9 歲。每例病例均經病理復查證實，所有病例術前均未曾給予放療和(或)化療。

1.2 試劑 試驗所用試劑均購自武漢博士德生物工程有限公司，包括兔抗人KAI1 多克隆抗體、SABC 免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒。

1.3 實驗方法及步驟 對所有實驗石蠟包埋標本均進行連續4 μm厚切片，每例至少4 張。

1.3.1 對試驗切片進行常規HE 染色。

1.3.2 KAI1 免疫組化染色(SABC 法) 采用前列腺組織為陽性對照，而以PBS 代替一抗作為陰性對照。試驗切片經常規脫蠟至水，并進行微波抗原修復，具體操作步驟按試劑盒說明書進行，之后經DAB 顯色，蘇木素復染，脫水及透明，最后中性樹膠封片。

1.4 結果判斷 判定標準:KAI1 蛋白陽性染色呈棕褐色細小顆粒狀著色，定位于細胞胞漿和細胞膜。染色強度評分標準:無著色記為0 分，淡黃色記為1 分，棕黃色記為2 分，棕褐色記為3分。陽性細胞比例評分標準:＜5%記為0 分，5%～25%記為1分，26%～50%記為2 分，51%～75%記為3 分，＞75%記為4分。根據染色強度評分與陽性細胞比例評分之和所得分數進行染色陽性分級:≥3 分為陽性，≤2 分為陰性。定量標準均以高倍鏡下針對每張切片隨即選取5個不同視野(×200)，同時應用CCD 成像并結合圖像分析系統對kai1 蛋白的表達進行平均灰度值測定，平均灰度值越小(說明染色強度越強及透光度越弱)，蛋白表達量越高，反之則說明其表達量越低。

1.5 統計學方法 所有數據均錄入SPSS 13.0 統計軟件包，計量資料以±s 表示，并對結果進行方差分析和t 檢驗，以P ＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

KAI1 蛋白陽性表現為位于細胞漿和細胞膜的棕黃色顆粒。KAI1 在PTC 中的表達呈陽性或強陽性(如圖1)，在甲狀腺腺瘤中呈陽性或弱陽性，在正常甲狀腺組織中呈弱陽性或陰性(如圖2)。KAI1 蛋白在PTC 中的表達顯著高于甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織，差異均有統計學意義(P ＜0.01)。而KAI1 蛋白在甲狀腺腺瘤中的表達雖然高于正常甲狀腺組織，但差異無統計學意義(P ＞0.05)，見表1。另外，KAI1 蛋白的表達在伴淋巴結轉移的PTC 中顯著低于無淋巴結轉移的PTC，差異有統計學意義(P ＜0.01)，見表2。

表1 KAI1 在各組中的表達(±s)

表1 KAI1 在各組中的表達(±s)

注:* P ＜0.01 VS PTC 組，■P ＜0.01 VS PTC 組，▼P ＞0.05 VS 甲狀腺腺瘤組

分組例數 KAI1 表達(灰度值)PTC 58 63.31 ±6.52甲狀腺腺瘤 30 117.53 ±7.67*正常甲狀腺 20 123.71 ±8.49■▼

表2 KAI1 在不同PTC 中的表達(±s)

表2 KAI1 在不同PTC 中的表達(±s)

注:▲P ＜0.01 VS 無轉移的PTC 組

分組例數 KAI1 表達(灰度值)無轉移的PTC 22 47.68 ±7.49轉移的PTC 36 83.23 ±8.27▲

圖1 KAI1 在甲狀腺乳頭狀癌陽性表達

圖2 KAI1 在正常甲狀腺組織陰性表達

3 討論

近年來，我國甲狀腺癌的發病率呈現逐年上升的趨勢，而其中80%為PTC［3］。作為最常見的內分泌系統惡性腫瘤之一的PTC，不但起病隱匿，而且臨床表現及其生物學特征復雜多變，同時存在較高的隱性頸部淋巴結轉移率［4］。目前有關其發病及轉移機制尚未清楚。隨著分子生物克隆技術的逐漸發展，腫瘤轉移抑制基因是近年來發現的一類與腫瘤轉移相關的基因。它對腫瘤浸潤及轉移起負向調控的作用越來越受到人們的重視。研究表明［5］，腫瘤轉移抑制基因在非轉移腫瘤組織中表達較高，而在有淋巴結轉移的腫瘤組織中表達較低，由此，認為它與抑制腫瘤的浸潤和轉移密切關。

KAI1 是1995年首先由Dong 等［1］從人前列腺癌雜交細胞AT6.1 中所克隆出的轉移抑制基因，是穿膜四超家族(transmembrane 4 super-family，TM4SF)成員之一，其生物學結構為細胞膜糖蛋白，主要影響細胞間及細胞與細胞外基質間的信號傳導，同時參與細胞增生的調節。早期的研究認為KAI1 基因只是前列腺癌的特異性的轉移抑制基因，在目前已知的與腫瘤轉移相關的基因中，KAI1 基因是較為明確的抑癌基因。在人類其他腫瘤中如肺癌［6］、乳腺癌［7］、胃癌［8］、肝癌［9］、胰腺癌［10］、卵巢癌［11］、子宮內膜癌［12］等多種惡性腫瘤的體內或體外實驗大都表明，其表達缺失或下降與分化程度、臨床進程以及淋巴結轉移密切相關。腫瘤分化程度越低，臨床進程越晚，KAI1 蛋白的表達就越少。本研究顯示，KAI1 蛋白在PTC 中的表達，顯著高于甲狀腺腺瘤及正常甲狀腺組織(P 均＜0.01)，這也可能與甲狀腺乳頭狀癌具有惡性程度較低和預后較好的生物學行為有關。

PTC 中頸部淋巴結轉移較常見，本研究結果表明，KAI1 蛋白在無淋巴結轉移的PTC 組織中陽性或弱陽性表達，而在淋巴結轉移的PTC 組織中呈弱陽性或陰性表達。KAI1 蛋白的表達在伴淋巴結轉移的PTC 中顯著低于無淋巴結轉移的PTC(P ＜0.01)，這也更加明確了KAI1 是一個腫瘤轉移抑制基因，它與腫瘤的淋巴結轉移有一定關系。既往已有的證據也表明，KAI1 基因表達降低在腫瘤進展轉移過程中起著重要作用，它可通過調節腫瘤細胞的運動、增殖、分化和信號轉導等發揮作用，進而抑制腫瘤細胞的轉移能力［13-16］。因此，KAI1 促進PTC 轉移的機制可能是KAI1 的低表達使腫瘤組織細胞功能進一步減弱或喪失，導致腫瘤細胞間黏附力減弱、而移動性增強、同時細胞分化降低，進而增強其侵襲性，最終發生淋巴結轉移。PTC 在頸部淋巴結轉移過程中KAI1 低表達所起的作用及作用的大小，以及發生這種淋巴結規律性轉移的具體機制目前仍不明確，需進一步研究證實。

綜上所述，本實驗結果顯示KAI1 的表達異常可能與PTC 的發生、發展以及淋巴結轉移密切相關，臨床上通過檢測PTC 中KAI1 的表達，對判斷腫瘤的惡性程度、轉移潛能以及預后均具有重要的指導意義。

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