蝙蝠葛酚性堿（ PAMD）調控Glil基因抗胰腺癌的機制研究

魏冬梅 陳宏 尹鋼 仲麗 周忠光

關鍵詞：蝙蝠葛酚性堿；Glil；胰腺癌中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

文章編號：1007 - 2349（ 2015） 03 - 0064 - 02

PAMD為多種脂溶性生物堿的混合物，是從中藥北豆根（防己科植物蝙蝠葛根莖）中所提取。為了證實PAMD抗胰腺癌的相關作用機理是否與通過抑制Hedgehog信號通路的激活所發揮的作用有關，本實驗主要采用了RT - PCR檢測PAMD對人胰腺癌細胞株BxPC -3裸鼠移植瘤Hedgehog信號通路中關鍵分子GlilmRNA表達的影響，探討PAMD的抗腫瘤作用以及Hedgehog信號通路在胰腺癌中的作用機制，為臨床上抗腫瘤新藥的研發提供了新的方向和思路。1 實驗材料

PAMD購自于黑龍江中醫藥大學藥學院；5-氟尿嘧啶（5 - Fu）購自sigma公司；人源性胰腺癌BxPC -3細胞株購自中國科學院（上海生命科學院細胞資源中心）；實驗動物購自上海斯萊克動物實驗有限公司；胰蛋白酶（GIBCO分裝伯安生命技術有限公司）；DU800核酸蛋白分析儀購自Beckman公司；SYBR Premix Ex Taq試劑盒購自TaKaRa公司：Prime -Script RT試劑盒購自TaKaRa公司；ABI 7500實時熒光PCR儀購自Applied Biosystems公司。2實驗方法2.1 動物分組50只裸鼠，雌性，（4 -6）W齡。造模24 h后，隨機將其分成5組，分別為模型對照組、空白組、5 - FU組、PAMD低劑量組、PAMD高劑量組，每組10只。2.2給藥途徑及劑量實驗分組和給藥劑量：模型組及空白組：每天給予同等容積的生理鹽水（0. 9% NaCl），但空白組不需要接種瘤株；5 - FU組：按20 mg/kg腹腔注射給藥PAMD；低劑量組：按10 mg/kg腹腔注射給藥；PAMD高劑量組：按20 mg/kg腹腔注射給藥。各實驗用藥治療組均連續給藥21 d。2.3造模及取材取凍存胰腺癌細胞株BXPC -3，投入37℃水中，1min內融化，離心去除凍存液，用約10倍冷RPMI1640完全培養液洗1次，接種于培養瓶中，置于37C、飽和濕度、5% C02培養箱中，隔日換液，細胞長成單層后，用0.25%胰酶、EDTA消化、傳代，并以倒置顯微鏡監控。待細胞進入對數生長期后，收集細胞并用RPMI1640調整濃度為5×l06個·mL-1的細胞懸液，接種于40只裸鼠右腋窩皮下，每只鼠0.2 mL。21天后處死動物，取瘤組織1.0g，Trizol法進行提取總RNA，Trizol法提取總RNA，總RNA反轉錄為cDNA，相對定量數據處理（2-△△CT法）。引物由上海生工生物工程公司合成。2.4統計學方法數據經檢測均符合正態分布和方差齊分析，并用統計學軟件SPSS 19.0數據處理分析，所得實驗數據以均數±標準差表示，而多組間的差異性比較主要采用單因素的方差分析（ one way ANOVA）。3實驗結果3.1 p - action擴增曲線及溶解曲線 B- action mRNAReal - time PCR擴增曲線及Ct值見圖1，溶解曲線見圖2。3.2 Glil mRNA Real - time PCR擴增曲線及溶解曲線 GlilmRNA Real - time PCR擴增曲線及Ct值見圖3，溶解曲線見圖4。3.3

PA MD對Glil mRNA表達影響 PAMD對Glil mRNA表達的影響見表l。

從表l結果表明，PAMD治療組Glil mRNA的表達與模型對照組比較，差異顯著具有統計學意義（P<0.01）。4討論

研究顯示，Hedgehog信號通路的調節失衡或異常激活與胰腺癌的產生以及其惡性的生物學特性是密切相關的，但在正常的胰腺組織中卻不表達或僅有輕度的表達[1]。本實驗結果表明Gli - 1蛋白在模型組中呈高表達、強陽性。而PAMD治療組與模型對照組比較表達水平均有所降低，有差異性具有統計學意義（P<0.01）。結果提示：在胰腺癌的腫瘤組織中Hedgehog信號通路的活性被重新激活，其主要成員表達異常增高，這與其他惡性腫瘤中該通路的表達情況是一致的[2-4].同時說明PAMD具有抑制此信號通路主要蛋白表達的功能，從而起到抗腫瘤的作用。參考文獻：[1] Kayed H，Kleeff J，Esposito I，et al.Localization of the human hedgehog-interacting protein（ Hip） in the normal and diseased pancreas[J].Mol Carcinog，2005 ，42 （4）：183-192.[2] Oro A E，Higgins K M，Hu Z，et al.Basal cell carcinomas in mice over—expressing sonic hedgehog[J].Science ，1997 ，276（ 5313）：817 -821[3] Thayer S P，di Magliano M P，Heiser P W，et al.Hedgehog is an earlyand late mediator of pancreatic canCer tumorigenesis[J].Nature ，2003，425（ 6960）：851-856.[4] Lauth M，Toftg1/4rd R.Non - Canonical Activation of GLI TranscriptionFactors[J].Cell Cycle ，2007，6（20）：2458-2462.

（收稿日期：2014-12-09）^_^臭參的降血脂抗疲勞及抗缺氧作用研究

董麗丹.錢子剛，楊兆祥，程永現（1.云南中醫學院中藥學院，云南昆明650500；2.中國科學院昆明植物研究所植物化學與西部植物資源 持續利用國家重點實驗室，云南昆明650201；3昆明制藥集團股份有限公司，云南昆明650100） 摘要：目的探討臭參的降血脂、抗疲勞及抗缺氧作用功效。方法該研究分別采用混合型高脂血癥大鼠模型，小鼠負重游泳和常壓缺氧模型，選用血脂四項指標（總膽固醇（ TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（ HDL - C），低密度脂蛋白膽固醇（ LDL - C》，負重游泳時間，常壓耐缺氧時間作為評價指標。結果 與高脂模型組相比較給藥組大鼠血清Tg，TC和LDL -C含量均顯著性降低（P<0.05）；臭參能明顯延長小鼠負重游泳時間（P<0.05）；但不能明顯提高小鼠常壓耐缺氧時間。結論 臭參具有較好的降血脂和抗疲勞作用，但無抗缺氧作用，提示臭參可作為高血脂患者的食材。