優質觀賞百合品種“索邦”愈傷組織培養研究

張悅　張正海　李愛民等

摘要： 以觀賞百合優質品種“索邦”鱗莖為材料進行愈傷組織培養研究，并成功獲得再生植株。結果表明：最佳滅菌方法為75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，污染率僅為30.00%；最佳再生培養基為1/2 MS+2.0 mg/L 2，4-D，平均再生苗數為10.3；再生苗最佳生根培養基為B5+0.10 mg/L NAA，平均生根數為22.7條。

關鍵詞： 觀賞百合；索邦；愈傷培養；再生培養基；生根培養基；配方

中圖分類號：S682.2+65.04+3 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）08-0049-02

百合是百合科（Liliaccae）百合屬（Lilium）植物的總稱，因其“數十片相累，狀如白蓮花，百葉合成”而得名 [1]。百合是最受歡迎鮮切花之一，在世界各地廣為栽培，在世界鮮切花市場占有十分重要的地位。百合靠常規的小鱗莖分株方法繁殖，繁殖系數較低，有些種類可用鱗片扦插繁殖，但往往容易腐爛。百合長期靠營養繁殖，容易感染病毒病，而影響百合品質。組織培養快速繁殖技術，能夠迅速去除病毒和更新品種，具有較高的經濟價值和開發潛力。近年來，中國農業科學院特產研究所引進了一批優質觀賞百合品種（木門、索邦、西伯利亞、小太陽、粉冠軍、橙色年代等），為適應市場需求，筆者以“索邦”為試材開展了組織培養研究，取得了積極成果。

1 材料與方法

1.1 材料

觀賞百合“索邦”引自北京綠爾農業科技開發有限公司，栽植于中國農業科學院特產研究所左家實驗基地。試驗時選取生長健康、無病蟲害的“索邦”種球鱗片為試驗材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒 用流動水將鱗莖外泥土沖去后用洗衣粉溶液仔細刷洗剝分后的鱗片，洗凈后再用流動水沖洗過夜。接種前用75%乙醇溶液浸洗30 s、無菌水沖洗4～5次后，再用0.1%HgCl2溶液浸洗8、10、15、20 min或用30%84消毒水消毒8、10、15、20 min，最后用無菌水再次沖洗鱗片4～5次。在清洗過程中需要不斷震蕩搖晃，以確保溶液能充分浸潤并充分沖洗材料。將消毒后的百合鱗片放置于1/2 MS+0.1 mg/L 2，4-D培養基中培養觀察。

1.2.2 培養條件 將消毒滅菌后的鱗片接種于1/2MS固體培養基上，設定培養溫度（24±2） ℃、培養濕度50%～60%、光照強度2 000 lx，在光照時長為12 h/d的條件下培養。培養間定期用乳酸滅菌法消毒。

1.2.3 愈傷誘導培養基的選擇 將鱗片切去四邊，切成 0.5 cm×0.5 cm的方塊，在生物潔凈工作臺中分別接種到不添加激素的1/2 MS、MS和B5培養基中。

1.2.4 誘導激素的選擇

1.2.4.1 不同濃度2，4-D對愈傷誘導的影響 在“1.2.3”節的試驗基礎上，將經過處理后的百合鱗片內側向上放置于添加不同濃度2，4-D的1/2MS培養基上。2，4-D濃度梯度為0、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0、10.0 mg/L，每瓶培養基放入1片鱗片，每組處理30瓶，觀察并記錄愈傷出現時間，60 d后統計誘導率。

1.2.4.2 不同濃度毒莠定對愈傷誘導的影響 在“1.2.3”節的試驗基礎上，將經過處理后的百合鱗片內側向上放置于添加不同濃度毒莠定的1/2MS培養基上。毒莠定濃度為1 mg/L 和2 mg/L，每瓶培養基放入3片鱗片，每組處理20瓶，并與“1.2.4.1”中最佳結果進行對比。

1.2.5 生根培養基的選擇 以B5作為基礎培養基，添加不同濃度NAA（0、0.01、0.05、0.10 mg/L），每個濃度處理30瓶，40 d后觀察生根情況并計算平均生根數。

2 結果與分析

2.1 “索邦”百合鱗片消毒方法的篩選

隨著消毒時間的延長，百合鱗片染菌率下降，但消毒時間過長則外植體鱗片成活率降低，愈傷誘導率同時下降。試驗結果表明，最佳消毒方法為75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，染菌率為30.00%，誘導率高達63.33%（表1）。

2.2 誘導培養基的篩選

在表2所示3種培養基中分別接入30個經過消毒處理的鱗片，30 d后觀察結果，根據愈傷誘導率和愈傷質量，確定最佳誘導培養基為1/2MS。

2.3 不同激素水平對愈傷誘導的影響

2.3.1 不同濃度2，4-D對愈傷誘導的影響 在“2.2”節研究結果基礎上，以1/2MS作為基礎培養基，添加不同濃度 [JP2]2，4-D，觀察并記錄愈傷出現時間和誘導數量。由表3可知，在不同濃度2，4-D影響下，愈傷組織形態明顯不同。當2，4-D 濃度在1.0～2.0 mg/L范圍時，誘導出的愈傷生長疏松，體積大且顏色為黃綠色，誘導時間較短且誘導數目最高。

2.3.2 不同濃度毒莠定對愈傷誘導的影響 在1/2MS培養基中分別加入1、2 mg/L毒莠定，觀察到毒莠定誘導愈傷組織出現時間在20 d左右，與添加2.0 mg/L 2，4-D相比大概延后1周。30 d后觀察添加1 mg/L 毒莠定誘導出的愈傷組織顏色為鵝黃色，生長狀態良好，誘導率70.00%；添加 2 mg/L 毒莠定培養基誘導出的愈傷組織顏色為棕黃色，生長狀態良好，誘導率63.33%。40 d后添加1 mg/L 毒莠定培養基中觀察到愈傷組織中分化出再生苗，此時分化率為6.7%。

2.3.3 植株再生培養基激素濃度的篩選 結合“2.3.1”節和“2.3.2”節試驗結果，計算培養基添加3種不同激素在90 d后分化出的平均再生苗數（表4）。如表4所知，3組平均再生苗數目相近，無明顯差異；但第3組分化出再生苗的時間遠遠提前于添加不同濃度毒莠定的第1、2組。誘導愈傷及再生植株見圖1、圖2。

2.4 不同濃度萘乙酸對再生苗生根的影響

系誘導率最高，平均生根22.7條；在0.00～0.10 mg/L NAA范圍內，隨濃度增加根系誘導率升高，根長且粗壯。

3 結論與討論

[JP2]本研究利用索邦百合的鱗莖為外植體誘導愈傷，確定了索 [JP2]邦百合鱗莖誘導愈傷培養基為1/2MS+0.1 mg/L 2，4-D，誘導率為66.67%；最佳消毒方法為75%乙醇30 s+0.1%HgCl2 15 min，污染率僅為30.00%；最佳再生培養基為1/2MS+ 2.0 mg/L 2，4-D，平均再生苗數為10.3株且分化時間短；再生苗最佳生根培養基為B5+0.10 mg/L NAA，平均生根數為22.7條，顏色翠綠，根長均勻，大于2 cm。

[JP2]東方百合“索邦”是百合科百合屬多年生球根類花卉，花大而美，粉色艷麗，葉片長橢圓形，墨綠互生。索邦百合是目前市場暢銷品種，深受消費者歡迎，繁殖主要靠鱗莖分株進行 [2]，繁殖量小且易造成種性退化。目前索邦百合的快繁研究一直側重于外植體誘導叢生芽建立再生體系，而對誘導愈傷組織分化再生植株的研究未見報道。本研究成果為建立索邦百合和其他優質觀賞百合品種快繁技術體系提供技術支持和參考。

[HS2*2][HT8.5H]參考文獻：

[1] 梁 云，馮慧穎，徐雷鋒，等. “百合”植物名稱及原植物考證[J]. 北京林業大學學報：社會科學版，2013，12（2）：69-72.

[2]李衛鋒，王 丹，黃海濤. 荷蘭百合新品種索爾邦的快繁技術研究[J]. 北方園藝，2007（9）：191-192.