HPLC同時測定羊藿三七膠囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量

汪楊麗，鄧開英，鄭小平，楊帆

(重慶市食品藥品檢驗檢測研究院 重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

·中藥工業(yè)·

HPLC同時測定羊藿三七膠囊中朝藿定C和淫羊藿苷的含量

汪楊麗*，鄧開英，鄭小平，楊帆

(重慶市食品藥品檢驗檢測研究院 重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

目的：建立同時測定羊藿三七膠囊中朝藿定C和淫羊藿苷含量的高效液相色譜法。方法：采用Agilent C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液(26∶74)；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為270 nm。結(jié)果：朝藿定C進樣量在0.288～9.198 μg、淫羊藿苷進樣量在0.111～3.558 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 9)；朝藿定C的平均回收率為103.0%，RSD=0.8%(n=6)；淫羊藿苷的平均回收率為98.9%，RSD=1.8%(n=6)。結(jié)論：本方法簡便、準確，重復(fù)性好，可作為羊藿三七膠囊中淫羊藿的含量測定方法。

高效液相色譜法；羊藿三七膠囊；朝藿定C；淫羊藿苷

羊藿三七膠囊由淫羊藿、三七兩味中藥加工制成，具有溫陽通脈，化淤止痛的功能[1]。用于陽虛血瘀所致的胸痹，癥見胸痛、胸悶、心悸、乏力、氣短等。《中華人民共和國藥典》2010版中淫羊藿的藥用部位由2005版中的地上部分修訂為葉[2-3]。有研究表明[4-5]淫羊藿的葉中總黃酮含量高于淫羊藿的莖。淫羊藿總黃酮的主要成分為朝定藿的淫羊藿苷。淫羊藿總黃酮的主要有效成分是朝藿定C和淫羊藿苷[6]，多數(shù)淫羊藿藥材中朝藿定C含量較高，而淫羊藿苷的含量較低[5，7]。僅以淫羊藿苷作為其質(zhì)量控制指標不盡合理，本文建立一種以朝藿定C和淫羊藿苷為雙檢測指標的高效液相色譜測定法，以期為羊藿三七膠囊質(zhì)量標準的完善提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 2695高效色譜系統(tǒng)；Waters 2489檢測器；Empower色譜工作站。

1.2 試藥

淫羊藿苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110737-200415)；朝藿定C對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-13122312，純度98.17%)；羊藿三七膠囊(重慶三峽云海藥業(yè)公司，批號分別為A0601，A1201，A1202，B0101)；乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取朝藿定C對照品和淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為1.839 7、0.711 6 mg·mL-1的單一成分對照品儲備液。

2.2 供試品溶液的制備

取羊藿三七膠囊裝量差異項下羊藿三七膠囊的內(nèi)容物，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲(功率：500 W，頻率：40 kHz)處理1 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 色譜條件

Agilent C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.05%磷酸溶液(26∶74)；柱溫為30 ℃；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為270 nm；進樣量為10 μL。

2.4 陰性對照溶液的制備

取按處方及工藝制備的缺淫羊藿陰性對照品0.5 g，照2.2項下的供試品制備方法處理，制成缺淫羊藿陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入色譜儀，按2.3項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，在與朝藿定C和淫羊藿苷對照品相應(yīng)的保留時間處沒有色譜峰，說明陰性對照溶液無干擾，見圖1。

注：A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.朝藿定C；2.淫羊藿苷。圖1 朝藿定C和淫羊藿苷HPLC圖

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取朝藿定C、淫羊藿苷對照品儲備液各2.5 mL(質(zhì)量濃度分別為1.839 7、0.711 6 mg·mL-1)，置5 mL量瓶中，搖勻，即得混合對照品溶液。逐級稀釋，得質(zhì)量濃度分別為0.919 8、0.459 9、0.230 0、0.115 0、0.057 5、0.028 8 mg·mL-1朝藿定C與質(zhì)量濃度分別為0.335 8、0.177 9、0.089 0、0.044 5、0.022 2、0.011 1 mg·mL-1淫羊藿苷的混合對照品溶液。精密吸取上述混合對照品溶液各10 μL注入高效液相色譜儀，按2.3項下的色譜條件測定，記錄峰面積。用最小二乘法進行線性回歸，得回歸方程，朝藿定C：Y=2×106X-225 137，r=0.999 9；淫羊藿苷：Y=2×106X-126 878，r=0.999 9。結(jié)果表明，朝藿定C和淫羊藿苷在0.228～9.198 μg、0.111～3.558 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

精密吸取質(zhì)量濃度為0.459 9 mg·mL-1朝藿定C和質(zhì)量濃度為0.177 9 mg·mL-1淫羊藿苷的混合對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。計算朝藿定C和淫羊藿苷峰面積的RSD均為0.3%。

2.8 重復(fù)性試驗

取同批樣品(批號：B0101)，按2.2項下的方法制備6份供試品溶液，計算含量。結(jié)果朝藿定C平均含量為12.0 mg/粒，RSD為0.4%；淫羊藿苷平均含量為4.4 mg/粒，RSD為1.3%。

2.9 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液(批號：B0101)，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣10 μL，測定峰面積，結(jié)果朝藿定C和淫羊藿苷峰面積的RSD分別為0.2%、0.9%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗

精密吸取2.1項下的朝藿定C對照品溶液5.3 mL、淫羊藿苷對照品溶液5.4 mL，同時置6個具塞錐形瓶中，溶劑蒸干，精密稱取已測定含量的樣品(批號：B0101)0.25 g，共6份，分別加入上述具塞錐形瓶中。按2.2項下的方法制備供試品溶液，測定朝藿定C和淫羊藿苷的含量，計算平均回收率，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.11 耐用性試驗

采用Agilent 1100色譜儀、Waters C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)和Waters 2695色譜儀、Agilent C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，按2.3項下譜條件分別測定同批樣品(批號：B0101)，結(jié)果顯示：供試品溶液均得到很好地分離，朝藿定C的含量分別為12.03、11.99 mg/粒，淫羊藿苷的含量分別為4.49、4.44 mg/粒。

2.12 樣品測定

取4批羊藿三七膠囊(批號分別為A0601，A1201，A1202，B0101)，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.3項下色譜條件測定，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果 (mg/粒)

3 討論

3.1參考文獻[3，11]試驗中比較了甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇4種提取溶劑，提取時間分別考察了20、40、60、80 min。結(jié)果表明，稀乙醇超聲處理1 h的提取效果好。試驗又考察了稀乙醇超聲提取1 h和原標準的甲醇索氏提取4 h兩種方法，結(jié)果表明2種方法提取效率均可，但超聲提取操作相對簡單、快捷。

3.2試驗曾選用了乙腈-水、乙腈-1%冰醋酸[12]、乙腈-0.05%磷酸等流動相，結(jié)果乙腈-水系統(tǒng)使樣品中淫羊藿苷的保留時間不穩(wěn)定；與乙腈-1%冰醋酸相比，乙腈-0.05%磷酸系統(tǒng)中朝藿定C和淫羊藿苷2個色譜峰的分離效果更好，且保留時間適宜。

3.34批羊藿三七膠囊中朝藿定C含量基本比淫羊藿苷含量高一倍，印證了朝藿定C是淫羊藿總黃酮類的主要有效成分之一，初步認定以朝藿定C和淫羊藿苷的總量評價該制劑中淫羊藿的質(zhì)量更合理。

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SimultaneousDeterminationofEpimedinCandIcariininYanghuoSanqiCapsulesbyHPLC

WANGYangli*，DENGKaiying，ZHENGXiaoping，YANGFan

(ChongqingInstituteForFoodandDrugControl，ChongqingEngineeringTechnologyResearchCenterforPharmaceuticalProcessandQualityControl，Chongqing401121，China)

Objective：To establish a HPLC method for simultaneous determination of epimedin C and icariin in Yanghuo Sanqi Capsules.Methods：The samples were separated on Agilent C18 column(150 mm×4.6 mm，5 μm)by acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution(26∶74)as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1and the detection wavelength was 270 nm.Results：The calibration curves showed good linearity in the range of 0.288-9.198 μg(epimedin C)，0.111-3.558 μg(icariin).The average recoverise(n=6)were 103.0%(RSD=0.8%)，98.9%(RSD=1.8%)，respectively.Conclusion：The method is simple and accurate with good reproducibility.It can be used for the determination ofEpimediiFolium in Yanghuo Sanqi Capsules.

HPLC；Yanghuo Sanqi Capsules；epimedin C；icariin

2014-08-25)

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汪楊麗，碩士，主管中藥師，研究方向：中藥分析；Tel：(023)86072753，E-mail：wangyangli27@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.5.017