正交試驗(yàn)優(yōu)選歸藤通管灌腸劑水提取工藝

王紅麗，唐進(jìn)法，衛(wèi)愛武，翟海容，程偉，康冰亞*

(1.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000；2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

·中藥工業(yè)·

正交試驗(yàn)優(yōu)選歸藤通管灌腸劑水提取工藝

王紅麗1，唐進(jìn)法1，衛(wèi)愛武1，翟海容2，程偉2，康冰亞1*

(1.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000；2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

目的：優(yōu)選歸藤通管灌腸劑水提取工藝。方法：以綠原酸為指標(biāo)，采用HPLC測(cè)定其含量，選取加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選歸藤通管灌腸劑水煎煮工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為加6倍量水，煎煮2次，每次1.5 h。結(jié)論：優(yōu)選的水提取工藝穩(wěn)定、合理，可為歸藤通管灌腸劑的制劑生產(chǎn)提供參考。

歸藤通管灌腸劑；綠原酸；正交試驗(yàn)；高效液相色譜法

歸藤通管灌腸劑為河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院開發(fā)的院內(nèi)新制劑，是由該院生殖醫(yī)學(xué)科衛(wèi)愛武主任醫(yī)師結(jié)合臨床醫(yī)療實(shí)踐總結(jié)出來的經(jīng)驗(yàn)方，主要由忍冬藤、當(dāng)歸、雞血藤、大血藤等多味中藥組成，具有活血祛瘀通絡(luò)，清熱解毒消癰的功能，是治療瘀血、濕熱所致輸卵管不通暢、阻塞或積水等引起的不孕癥的良藥。本文在進(jìn)行制備工藝研究時(shí)，根據(jù)飲片理化性質(zhì)，采用水提取法以加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，以忍冬藤中的綠原酸為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳提取工藝，為歸藤通管灌腸劑的研究提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

CP225D賽多利斯電子分析天平(德國(guó))；Waters 2695高效液相色譜儀；Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器；Empower操作系統(tǒng)；GL型暗箱式雙光紫外儀；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)。

1.2 試藥

綠原酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110753-200413)；甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純；忍冬藤、當(dāng)歸、雞血藤、大血藤等飲片均購(gòu)于安徽濟(jì)仁藥業(yè)有限公司，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部陳天朝主任藥師鑒定，均符合2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)項(xiàng)下要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸的含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件 采用Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相為乙腈(A)-0.4%磷酸溶液(B)(10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為10 μL[1-4]。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，加50%甲醇制成質(zhì)量濃度為0.052 5 g·L-1的對(duì)照品溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 精密吸取樣品溶液5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋定容，靜置過夜，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液3、6、9、12、15、18、21 μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得綠原酸回歸方程Y=15 396X+2143(r=1)，綠原酸在1.575～11.025 μg呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，按2.1.1色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，依法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果綠原酸的RSD為0.52%，表明儀器的精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 同一供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12 h，依法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果綠原酸的RSD為1.72%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密吸取已知含量的供試品溶液6份，分別精密加入一定量的綠原酸對(duì)照品，依法進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果綠原酸的平均回收率為100.96%，RSD為1.05%，表明此方法可行。

2.2 提取工藝考察

2.2.1 正交試驗(yàn)優(yōu)選 以綠原酸為考察指標(biāo)，選擇加水倍數(shù)、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，選用L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)選水提取工藝，因素水平見表1。分別按處方配比稱取忍冬藤、當(dāng)歸、雞血藤等飲片共9份，每份98 g，按正交表安排進(jìn)行提取備用。試驗(yàn)安排及結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 水提取工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)因素水平表

表2 水提取工藝優(yōu)選正交試驗(yàn)安排

表3 水提取工藝方差分析

注：F0.1(2，2)=9；F0.05(2，2)=19。

由表2可知，各因素對(duì)提取工藝的影響順序?yàn)椋篊>B>A，以A1B2C3組合方案為佳。方差分析結(jié)果表明，顯著水平為0.1時(shí)，因素C具有顯著影響，因素A，B均無顯著性差異。綜合考慮到節(jié)省能源及提取完全等因素，最終確定提取工藝條件為A1B2C2，即加6倍量水提取2次，每次1.5 h。

2.2.2 驗(yàn)證試驗(yàn) 按比例稱取藥材各3份，每份98 g，按優(yōu)選的工藝條件驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果綠原酸提取量分別為97.65、97.52、97.76 g·L-1，表明該提取工藝合理、穩(wěn)定、可行。

3 討論與結(jié)論

本方中忍冬藤、當(dāng)歸、雞血藤、大血藤等藥材飲片在臨床上常以湯劑入藥，所含成分經(jīng)預(yù)試驗(yàn)考察，采用水煎煮法可將其基本提取完全，從而保證制劑的療效。忍冬藤為君藥，現(xiàn)代化學(xué)、藥理研究表明[5-7]，忍冬藤中的主要活性成分為有機(jī)酸類，綠原酸在忍冬藤中含量較高，具有一定的抗菌、抗感染作用，是忍冬藤主要活性成分及藥理作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，發(fā)揮著清熱解毒的藥效。因此本試驗(yàn)選擇綠原酸為指標(biāo)，通過測(cè)定其含量來評(píng)價(jià)歸藤通管灌腸劑的內(nèi)在質(zhì)量。

流動(dòng)相選擇上考察了甲醇和乙腈兩種流動(dòng)相，乙腈紫外吸收小，產(chǎn)生的噪聲小，適合在進(jìn)行紫外短波長(zhǎng)上的高靈敏度分析。乙腈作為流動(dòng)相壓力較小，對(duì)色譜柱的損害小，洗脫能力強(qiáng)且比甲醇出峰早，因此選擇了乙腈作為本試驗(yàn)的流動(dòng)相。

臨床上，歸藤通管長(zhǎng)期以湯劑給藥，療效確切，未發(fā)生毒副作用。但湯劑煎煮、攜帶、服用不方便，久置易霉變，故將其研制成灌腸劑，既保持了湯劑的綜合療效，又解決了其不便之處。

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Optimization of Water Extraction for Guiteng Tongguan Enema by Orthogonal Test

WANG Hongli1，TANG Jinfa1，WEI Aiwu1，ZHAI Hairong2，CHENG Wei2，KANG Bingya1*

(1.Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Henan University of Traditional Chinese Medicine(TCM)，Zhengzhou450000，China；2.Henan University of TCM，Zhengzhou 450046，China)

Objective：To optimize boiling water extraction of Guiteng Tongguan Enema.Methods：With the content of chlorogenic acid as index，orthogonal test was used to optimized boilingwater extractionof Guiteng Tongguan Enema with the amount of water，extraction time and times as factors.Results：Optimal extraction was as follows：sixfold amount of water，extract 2 times with 1.5 hours per time.Conclusion：Optimized extraction method is reasonable and feasible，it could be applied in mass production of Guiteng Tongguan Enema.

Guiteng Tongguan Enema；chlorogenic acid；orthogonal test；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.2.018

2014-06-10)

*

康冰亞，主管中藥師，研究方向：中藥制劑的研究與開發(fā)；E-mail：kangby2008@163.com