HPLC測定蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的含量

覃華亮，韋怡

(1.廣西壯族自治區(qū)柳州食品藥品檢驗所，廣西 柳州 545006；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011)

HPLC測定蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的含量

覃華亮1，韋怡2*

(1.廣西壯族自治區(qū)柳州食品藥品檢驗所，廣西 柳州 545006；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué) 附屬瑞康醫(yī)院，廣西 南寧 530011)

目的：建立蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈含量的測定方法。方法：采用Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.015 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH 6.7)(70∶30)，流速為0.8 mL·min-1，檢測波長為289 nm，柱溫為35 ℃。結(jié)果：紫堇靈進樣量在0.141 5～0.377 3 μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 6)；平均回收率為98.49%(n=6)，RSD=0.45%。結(jié)論：該方法簡便準(zhǔn)確，分離度高，專屬性強，重復(fù)性好，可用于蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的含量測定。

蒲地藍(lán)消炎片；紫堇靈；高效液相色譜法；含量測定

蒲地藍(lán)消炎片由黃芩、蒲公英、苦地丁、板藍(lán)根組成，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》(第三冊)，具有清熱解毒，抗炎消腫的功效，用于癤腫、腮腺炎、咽炎、淋巴腺炎、扁桃腺炎等[1]。紫堇靈是苦地丁中的有效成分之一，具有鎮(zhèn)靜、抗鉤端螺旋體及肝損傷保護作用[2-3]。查閱相關(guān)文獻[4-10]，并沒有關(guān)于蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈含量測定方法的報道，為了更好地控制藥品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法對蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈含量進行測定，并考察了該方法的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

1.1儀器

LC-2010A高效液相色譜儀、紫外可見波長檢測器(日本島津)，LC Solution色譜工作站，UV-2450紫外可見分光光度計(日本島津公司)；Mettler Xp26微量電子分析天平(瑞士梅特勒公司，精密度：百萬分之一)；Mettler AE-200電子分析天平(瑞士梅特勒公司，精密度：萬分之一)；AS7240BT超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

1.2試藥

紫堇靈對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：111734-200601)；蒲地藍(lán)消炎片(廣東心寶制藥有限公司，批號：20140105，20131201，20130905)；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取紫堇靈對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.235 8 mg·mL-1的對照品儲備液，備用。精密吸取上述儲備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為23.58 μg·mL-1的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取重量差異下的樣品，研細(xì)，精密稱定1.0 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 色譜條件

Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇-0.015 mol·mL-1磷酸鹽緩沖液(pH6.7)(70∶30)；流速為0.80 mL·min-1；檢測波長為289 nm；柱溫為35 ℃；進樣量為20 μL。理論板數(shù)按紫堇靈峰計算應(yīng)不低于5 000。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對照品溶液6、8、10、12、14、16 μL，注入色譜儀中，測定，以進樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=1.451×106X+6.042×103，r=0.999 8。結(jié)果表明，紫堇靈在0.141 5～0.377 3 μg具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取2.1項下對照品溶液10 μL，按2.3色譜條件連續(xù)進樣6次，在相同條件下測定，得紫堇靈峰面積的RSD=0.81%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液(批號：20140105)，分別在室溫放置0，6，12，18，24 h后進樣10 μL分析，測定紫堇靈的峰面積，所得峰面積的RSD=0.62%(n=6)。結(jié)果表明，供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品(批號：20140105)，按2.2方法制備6份供試品溶液，按2.3色譜條件下進樣20 μL，測定峰面積，計算紫堇靈平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.21 mg·g-1，RSD=0.93%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.8 專屬性試驗

取按蒲地藍(lán)消炎片處方比例和工藝制成的缺苦地丁的陰性對照品適量，精密稱取1.0 g，按2.2方法制備成缺苦地丁的陰性對照溶液，按2.3色譜條件測定，結(jié)果表明處方中其他成分對紫堇靈的測定無干擾，見圖1。

A.紫堇靈對照品；B.供試品；C.缺苦地丁的陰性樣品；1.紫堇靈。圖1 蒲地藍(lán)消炎片及對照品HPLC圖

2.9加樣回收率試驗

精密稱取6份已知含量的供試品(批號：20140105，含紫堇靈0.21 mg·g-1)，各0.50 g，分別精密加入2.1紫堇靈對照品儲備液0.5 mL，按上述制備方法及色譜條件操作，結(jié)果見表1。

表1 蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈加樣回收率試驗

注：紫堇靈對照品加入量均為0.117 9 mg。

2.10 蒲地藍(lán)消炎片樣品的測定

取3批蒲地藍(lán)消炎片樣品(批號：20140105，20131201，20130905)，測定紫堇靈的含量，每一批樣品按2.2方法制備3份供試品溶液，按上述方法進樣分析，結(jié)果見表2。

表2 蒲地藍(lán)消炎片中紫堇靈的測定(n=3) mg/片

3 討論

在初試驗時，采用《中國藥典》2010版一部中苦地丁含量測定項下的流動相和檢測波長檢測樣品中紫堇靈的含量[11]，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，紫堇靈出峰的峰形好，基線平穩(wěn)，柱效高，保留時間適中，達到良好的分離效果，由此確定色譜條件。

紫堇靈為異喹啉類生物堿，易溶于三氯甲烷、丙酮等有機溶劑。筆者分別考察了以甲醇、丙酮、三氯甲烷為溶劑的提取效率，其中甲醇提取最為完全。提取方法考察了加熱回流和超聲提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加熱回流提取所得成分較多，導(dǎo)致干擾峰數(shù)量多、面積大，而紫堇靈含量相對較低，無法對紫堇靈峰進行準(zhǔn)確積分，最終選用超聲法進行提取。提取方法確定后，分別考察了10，20，30，40，60 min的超聲提取，結(jié)果表明30 min以后，樣品中紫堇靈的含量不再提高，因此確定提取時間為30 min。

有研究表明[12]，目前市場上不同產(chǎn)地的苦地丁所含紫堇靈的差異很大，選用不同產(chǎn)地的苦地丁投料，必然會影響到蒲地藍(lán)消炎片的質(zhì)量。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，除檢查項外，無鑒別及含量測定項目，無法較好地控制藥品質(zhì)量。本文采用高效液相色譜法測定蒲地藍(lán)消炎片中的紫堇靈含量，樣品處理簡單，方法快速準(zhǔn)確，對其質(zhì)量控制具有一定的參考價值。

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DeterminationofCorynolineinPudilanAnti-InflammatoryTabletbyHPLC

TAN Hualiang1，WEIYi2*

(1.LiuzhouInstituteforFoodandDrugControl，Liuzhou545006，China；2.RuikangHospitalAffiliatedtoGuangxiUniversityofChineseMedicine，Nanning530011，China)

Objective：To establish an HPLC method to determine the content of corynoline in Pudilan Anti-Inflammatory tablet.Methods：The Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used.The mobile phase consisted of methanol -0.015 mol·L-1phosphate buffered solution(pH 6.7)(70∶30 for volume)at flow rate of 0.8 mL·min-1.The detection wavelength was 289 nm and the column temperature was 35 ℃.Results：The calibration curve was in good linearity within the range of 0.141 5-0.377 3 μg(r=0.999 8，n=6).The average recovery was 98.49%，and the RSD was 0.45%(n=6).Conclusion：This method is simple，accurate，high separation degree，strong specificity and good repeatability，which can be used for determining the content of corynoline in Pudilan Anti-Inflammatory tablet.

Pudilan Anti-Inflammatory tablet；Corynoline；HPLC；Content determination

2014-04-29)

*

韋怡，講師，研究方向：中醫(yī)臨床及教學(xué)；E-mail：65653067@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.015