DA-6對冬季遲緩期的艾納香生長和有效成分含量的影響△

王丹，馬青松，范佐旺，李小婷，宛駿，袁蕾，陳曉鷺，鄒純禮，龐玉新*

(1.中國熱帶農業科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業部華南作物基因資源與種質創制重點開放實驗室/海南省艾納香工程技術研究中心，海南 儋州 571737； 2.海南艾納香科技發展有限公司，海南 ?？?570208)

·中藥農業·

DA-6對冬季遲緩期的艾納香生長和有效成分含量的影響△

王丹1，馬青松1，范佐旺1，李小婷1，宛駿1，袁蕾1，陳曉鷺1，鄒純禮2，龐玉新1*

(1.中國熱帶農業科學院 熱帶作物品種資源研究所/農業部華南作物基因資源與種質創制重點開放實驗室/海南省艾納香工程技術研究中心，海南 儋州 571737； 2.海南艾納香科技發展有限公司，海南 ?？?570208)

目的：研究DA-6對冬季遲緩期艾納香生長和有效成分含量的影響。方法：以一年生艾納香種子苗為實驗材料，在冬季艾納香生長遲緩期進行3次噴施DA-6。測定艾納香的株高、地徑、葉長和葉寬等生長指標以及葉干重。分別采用紫外可見分光光度法和GC法測定艾納香葉片總黃酮和l-龍腦的相對含量，并計算絕對含量。結果：DA-6顯著促進艾納香生長，增加葉干重，其中10 mg·L-1DA-6作用的效果最顯著。DA-6抑制了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量的積累。CK處理組總黃酮和l-龍腦相對含量最高，顯著高于100 mg·L-1DA-6處理組77.78%和96.49%。DA-6顯著提高了總黃酮和l-龍腦的絕對含量。10 mg·L-1DA-6處理組艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦含量最高，顯著高于其他處理組，是CK處理組的2.33倍和3.33倍。結論：因此，在冬季艾納香生長遲緩期施加DA-6可以促進艾納香生長和葉干重的增加，提高總黃酮和l-龍腦的絕對含量。

DA-6；艾納香；遲緩期；l-龍腦；總黃酮；葉

艾納香為菊科(Asteraceae)植物艾納香Blumeabalsamifera(L.) DC.的新鮮或干燥地上部分，別名大風艾、大葉艾等，具有祛風除濕、溫中止瀉、活血解毒等功效，還具有促進皮膚創傷的作用[1-3]。艾納香廣泛分布于我國的海南、貴州、云南等省[4]。主要含有揮發油類、黃酮類成分以及倍半萜類等化合物，其主要成分為揮發油類成分l-龍腦(l-borneol)[5-7]。施肥是提高藥材產量和質量的有效途徑[8]。在艾納香道地產區貴州省羅甸等地很少對栽培艾納香施肥或僅施少量鈣鎂磷肥。何元農等[9]施用農家肥圈肥、油枯和柴灰，以及尿素、過磷酸鈣和氯化鉀和復合肥等，結果表明施肥組的經濟產量和生物產量高于對照組，且有效成分含量不減。其中氮肥對生物產量增加作用明顯，得油率和l-龍腦含量與K肥用量呈正相關關系。何元農等[10]研究證實氮肥可以提高艾納香藥材的產量和有效成分的含量。王丹等[11]研究發現錳元素極顯著的提高冬季生長遲緩期的艾納香生長指標和生物量，對l-龍腦和總黃酮的相對含量的提高無顯著影響，但是極顯著提高了其絕對含量，即單株質量。因此，如何在獲得較高產量的同時，顯著增加有效成分的含量，是艾納香施肥亟待解決的問題。

DA-6(二烷氨基乙醇羧酸酯，胺鮮酯)是一種新式細胞分裂素類的植物生長調節劑[12]，具有生長素、赤霉素和細胞分裂素等多種功能。眾多研究證實，DA-6可以提高植物葉綠素、核酸和蛋白質等含量，進而促進植物光合作用，增加過氧化物酶和硝酸還原酶的活性。同時，DA-6還可以促進植物細胞分裂、伸長以及C、N代謝等[13-14]。具有安全、高效、價格低廉以及使用方便等特點，具有廣闊的應用前景[15]。根據美國農業部的報道，少量的DA-6可使甜菜等經濟作物增產50%，豆類增產60%，也可以使人參長得如香蕉一樣粗大[13]。目前未見有關DA-6對艾納香的肥效研究。因此，在課題組前期研究的基礎上，在海南的冬季艾納香生長的遲緩期，進行不同濃度的DA-6對艾納香生長指標、生物量以及有效成分相對含量和絕對含量影響的肥效研究。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇一年生艾納香種子苗，經中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所龐玉新副研究員鑒定為艾納香Blumeabalsamifera(L.) DC.。于2014年1月27日開始，每隔10 d進行葉面噴施DA-6，共施肥3次。于3月7日進行取樣。分別設置1、10和100 mg·L-1DA-6 處理組，另設空白對照組(CK)，不進行任何處理。

1.2 試驗儀器和試劑

7890A氣相色譜儀(美國安捷倫科技公司)，FID氫火焰離子化檢測器(美國安捷倫科技公司)，G4513A 16位自動進樣器(美國安捷倫科技公司)，2012-PCS紫外分光光度計(尤尼柯(上海)儀器有限公司)，CPA225D電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，KQ-500DB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；左旋龍腦對照品(阿法埃莎化學有限公司，批號為10147015，純度>98%)，蘆丁標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707，純度：92.5%)；水楊酸甲酯(天津光復精細化工研究所)，乙酸乙酯、甲醇、氫氧化鈉(西隴化工股份有限公司)，亞硝酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司)，九水合硝酸鋁(廣州化學試劑廠)均為國產分析純。DA-6購自鄭州神雨生物制品有限公司。

1.3 生長指標的測定

用直尺和卷尺分別測量株高、葉長和葉寬，使用電子游標卡尺測量地徑，陰干后用天平測量葉干重。

1.4 總黃酮相對含量和絕對含量測定

1.4.1 對照品溶液的配制及標準曲線的制備 對照品溶液的配制以及標準曲線的制備同王丹等[11]實驗中所用方法。

1.4.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取艾納香葉(過20目篩)粉末1.000 0 g，至具塞錐形瓶中，加甲醇溶液50 mL，稱定重量，冷浸30 min后，在超聲頻率為80 Hz的超聲清洗器中超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻后過濾，取濾液作為供試品。

1.4.3 方法學考察 分別按照精密度、穩定性、重復性和加樣回收試驗進行方法學考察，結果均表明該測定方法良好。

1.4.4 總黃酮相對含量測定 進行供試品溶液吸光度指測定，計算艾納香不同部位總黃酮相對含量，為質量百分數，單位為%。

1.4.5 總黃酮絕對含量計算 總黃酮的絕對含量為艾納香總黃酮產量，指艾納香不同部位中所含總黃酮的質量。

總黃酮絕對含量=不同部位總黃酮相對含量/100×對應部位藥材生物量，單位為g/株。

1.5 左旋龍腦含量測定

1.5.1l-龍腦含量測定 采用GC法測定艾納香葉片中l-龍腦含量，具體見王丹等[11]實驗中采用方法。并且，精密度、穩定性、重復性和加樣回收試驗均表明該方法良好。所得為艾納香葉片中l-龍腦的相對含量。

1.5.2l-龍腦絕對含量計算l-龍腦的絕對含量為艾納香總黃酮產量，指艾納香不同部位中所含總黃酮的質量。

l-龍腦絕對含量=不同部位l-龍腦相對含量/100×對應部位藥材生物量，單位為g。

1.6 數據分析

采用Excel進行數據錄入及圖表的繪制，采用SPSS 16.0軟件進行統計與One-way ANOVA方差分析，并用Duncan檢驗法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 DA-6對艾納香生長指標的影響

方差分析結果表明，不同濃度DA-6處理，艾納香株高在各處理間差異顯著(P<0.05)，地徑、葉長和葉寬差異極顯著(P<0.01)。由表1可見，較CK處理相比，10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組的株高顯著增加了49.71%和48.87%。1、10和100 mg·L-1DA-6處理組的葉長和葉寬均極顯著高于CK處理，其中葉長分別是CK的1.89、2.26和2.22倍。

表1 DA-6對艾納香生長指標的影響

注：*表示不同處理間在0.05水平差異顯著；**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.2 DA-6對艾納香葉干重的影響

方差分析結果表明，不同濃度的DA-6處理組，艾納香葉干重在各處理間差異極顯著(P<0.01)。由表2可見，10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組的葉干重極顯著高于CK處理組，分別是CK處理組的5.59和3.39倍。較1 mg·L-1DA-6處理組相比，二者顯著增加了124.44%和36.14%。1 mg·L-1DA-6處理組的葉干重是CK的2.49倍。

表2 DA-6對艾納香葉干重的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.3 DA-6對艾納香葉片中總黃酮相對和絕對含量的影響

方差分析結果表明，不同濃度的DA-6處理，艾納香葉片中總黃酮相對含量和絕對含量均差異極顯著(P<0.01)。由表3可見，施加不同濃度的DA-6顯著降低了總黃酮的相對含量，其中CK處理組的總黃酮相對含量為2.24%，顯著高于1、10和100 mg·L-1DA-6處理組53.43%、140.86%和96.49%。10 mg·L-1DA-6處理組艾納香葉片中總黃酮含量最高，為0.91 g，顯著高于其他處理組，是CK處理組的2.33倍。

表3 DA-6對艾納香葉片總黃酮相對含量和絕對含量的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著；表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

2.4 DA-6對艾納香葉片中l-龍腦相對和絕對含量的影響

方差分析結果表明，不同濃度的DA-6處理組，艾納香葉中l-龍腦相對含量和絕對含量在各處理間差異極顯著(P<0.01)。由表4可見，CK處理組的l-龍腦相對含量最高，為0.16%，顯著高于10 mg·L-1和100 mg·L-1DA-6處理組60.00%和77.78%。10 mg·L-1DA-6處理組的艾納香葉片中l-龍腦絕對含量最高，顯著高于其他處理組。

表4 DA-6對艾納香葉片中l-龍腦相對含量和絕對含量的影響

注：**表示在0.01水平差異極顯著，表中不同小寫字母表示不同處理間在0.05水平差異顯著。

3 討論與結論

適當濃度的DA-6有助于冬季遲緩期艾納香生長：DA-6是一種細胞分裂素類植物生長素，它可以通過提高植物葉片中葉綠素的含量，進而提高植物的光合速率，促進葉片生長。研究表明，低濃度DA-6可以顯著促進秋季草莓[15]、菠菜[16]、黃燈籠辣椒[17]、野大麥[18]等葉片生長，提高葉片的生物量。周天等[19]研究發現，10 mg·L-1DA-6處理組可以顯著提高羊草幼苗的生物量，與對照組相比顯著增加了64.0%。何元農等[20]研究發現1～2月是艾納香生長遲緩期，3月為生長恢復期。本研究在海南冬季即艾納香生長遲緩期進行DA-6對艾納香的肥效研究。未進行任何處理的CK組，艾納香生長緩慢，甚至停止生長。施加不同濃度的DA-6可以顯著促進艾納香生長，提高生長指標和葉干重，其中10 mg·L-1DA-6處理組作用的效果最明顯。因此，在海南冬季，艾納香生長的遲緩期施加10 mg·L-1DA-6有利于促進艾納香植物生長和生物量的積累。

DA-6抑制了冬季遲緩期艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦的相對含量，然而，增加了其絕對含量：本研究發現在冬季艾納香生長的遲緩期，施加DA-6抑制了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量的積累。其中100 mg·L-1DA-6處理組顯著抑制了葉片中總黃酮和l-龍腦相對含量，CK處理下相對含量最高，顯著高于100 mg·L-1DA-6處理組77.78%和96.49%。這主要可能由于總黃酮和l-龍腦是次生代謝產物，其積累代謝是一個持續而動態變化的過程，而在良好的環境條件下，植物生長的越快，其次生代謝產物數量越少[21]，并且次生代謝產物的積累也受到季節的影響[22]，這一結果說明在海南冬季艾納香生長遲緩期，總黃酮和l-龍腦的積累比較緩慢，外源施加植物激素會抑制其積累過程，導致其積累量的降低。然而，不同濃度的DA-6均顯著提高了艾納香葉片中總黃酮和l-龍腦的絕對含量。這說明在本實驗的處理階段，艾納香的初生代謝進程較快，受DA-6的影響大，效果遠超過對次生代謝過程的影響。本研究為后續進行艾納香專用肥的研究提供了數據支持和理論依據。

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EffectofDA-6onGrowthandContentsofEffectiveConstituentsinBlumeaBalsamiferainSlowGrowthPeriodofWinter

WANGDan1，MAQingsong1，FANZuowang1，LIXiaoting1，WANJun1，YUANLei1，CHENXiaolu1，ZOUChunli2，PANGYuxin1*

(1.TropicalCropsGeneticResourcesInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancementinSouthernChina/HainanProvincialEngineeringResearchCenterforBlumeaBalsamifera，Danzhou 571737，China；2.Hainan Xiangdaolijia Biotechnology Co.，Ltd.，Haikou 570208，China)

Objective：To investigate the effect of DA-6 on growth and contents of effective constituents inBlumeabalsamifera(L.) DC.in slow growth period of winter.Methods：The seedlings of one-year-oldB.balsamiferawere applied with DA-6 in slow growth period of winter three times.The height，ground diameter，length of leaf，width of leaf and leaf biomasses were measured.Then，the relative contents of total flavonoids andl-borneol in leaves ofB.balsamiferawere determined by UV and GC methods，respectively.The absolute contents were calculated.Results：The DA-6 significantly enhanced the growth ofB.balsamifera，and increased leaf biomass.The effect of 10 mg·L-1DA-6 treatment group was the most obvious.The application of DA-6 significantly inhibited the accumulation of relative contents of total flavonoids andl-borneol.The relative contents of total flavonoids andl-borneol under CK treatment were the highest，which were over 100 mg·L-1DA-6 treatment with 77.78% and 96.49%.However，DA-6 significantly increased the absolute contents of total flavonoids andl-borneol in leaves.The absolute contents of total flavonoids andl-borneol under 10 mg·L-1DA-6 treatment were the highest，which were 2.33 and 3.33 times than that of CK.Conclusion：Therefore，the DA-6 could significantly promote the growth and the accumulation of leaves，as well as the absolute contents of total flavonoids andl-borneol inB.balsamiferain slow growth period of winter.

DA-6；Blumeabalsamifera；slow growth period；l-borneol；total flavonoids；leaf

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.017

2015-01-08)

國家自然科學基金項目(81403035)；科技型中小企業技術創新基金(14C26214602908)

*

龐玉新，副研究員，研究方向：南藥資源研究與開發；Tel：(0898)23300268，E-mail：blumeachina@126.com