潔婦爾洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚靜玲，宋愛華，覃金玲，祝汪洋，丁曉萍*

(1.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北 武漢 430064；2.馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，湖北 武漢 430064；3.湖北四環(huán)制藥有限公司，湖北 武漢 430056)

·中藥工業(yè)·

潔婦爾洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚靜玲1，宋愛華2，覃金玲2，祝汪洋3，丁曉萍1*

(1.湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，湖北 武漢 430064；2.馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，湖北 武漢 430064；3.湖北四環(huán)制藥有限公司，湖北 武漢 430056)

目的：對潔婦爾洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。方法：采用薄層色譜(TLC)法對苦豆子、蛇床子、冰片進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對苦參堿的含量進(jìn)行定量測定。結(jié)果：TLC鑒別方法專屬性強(qiáng)，HPLC含量測定方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好。結(jié)論：該標(biāo)準(zhǔn)可有效控制潔婦爾洗劑的質(zhì)量。

潔婦爾洗劑；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；苦參堿；苦豆子；蛇床子；冰片

潔婦爾洗劑屬民族中藥復(fù)方制劑，由民間古方開發(fā)研制而成。該處方由苦豆子、蛇床子、冰片、花椒、沒食子等6味中藥組成，具有清熱解毒、止癢、抗菌消炎之功能[1]。臨床廣泛應(yīng)用于各種細(xì)菌性、霉菌性、滴蟲性外陰炎、陰道炎所致婦女陰部紅腫、瘙癢和白帶過多等癥狀。潔婦爾洗劑原標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)分冊，為了更有效地控制本品質(zhì)量，根據(jù)處方藥味、相關(guān)文獻(xiàn)[2-5]及試驗(yàn)研究結(jié)果，筆者在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，即采用薄層色譜(TLC)法對苦豆子、蛇床子、冰片進(jìn)行鑒別；采用高效液相色譜法對君藥苦豆子中的有效成分苦參堿進(jìn)行含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津10 AT-VP型高效液相色譜；島津SPD-10 AVP紫外檢測器；AT-930柱溫箱(上海民儀電子有限公司)；紫外分光光度儀UV 1101 (上海天美科學(xué)儀器有限公司)；KQ-100 DE型數(shù)控超聲波清洗器(100 W，40 KHz，昆山市超聲儀器有限公司)；SZ-93自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；MS204S/Z、AG135電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.2 試藥

苦參堿對照品、槐定堿對照品、冰片對照品、蛇床子對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110805-200507，110784-200303，110743-200303，121030-200405)；潔婦爾洗劑(自制，批號分別為20100801～20100803，20101201～20101204，20110101～20110103)；甲醇、乙腈為色譜純；水為二次重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 鑒別

2.1 苦豆子的薄層色譜鑒別

取本品5 mL，分別加氨試液3 mL、水15 mL，后加三氯甲烷振搖提取3次，每次15 mL，分取三氯甲烷層，合并，回收溶劑至干，殘?jiān)右掖? mL，使其溶解，作為供試品溶液。另取槐定堿對照品，加乙醇制成質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。按處方比例，制備缺苦豆子的陰性樣品，同法制成陰性供試品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-氨水(5∶0.6∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的橙色斑點(diǎn)，陰性供試品無干擾。見圖1。

注：1.苦豆子陰性供試品；2.供試品(批號：20100801)；3.供試品(批號：20100802)；4.槐定堿對照品；5.供試品(批號：20100803)。圖1 潔婦爾洗劑中苦豆子的TLC鑒別圖

2.2 蛇床子的薄層鑒別

取本品20 mL，加乙醚振搖提取2次，每次40 mL，分取乙醚液，合并，揮干，殘?jiān)訜o水乙醇1 mL，使其溶解，作為供試品溶液。另取蛇床子對照藥材1 g，加水20 mL，超聲提取1 h，過濾，取濾液，加乙醚振搖提取，同法制成對照藥材溶液。按處方比例，制備缺蛇床子的陰性樣品，同法制成陰性供試品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各15 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性供試品無干擾。見圖2。

注：1.蛇床子陰性供試品；2.供試品(批號：20100801)；3.蛇床子對照藥材；4.供試品(批號：20100802)；5.供試品(批號：20100803)。圖2 潔婦爾洗劑中蛇床子的TLC鑒別圖

2.3 冰片的薄層鑒別

取2.2項(xiàng)下的供試品溶液，另取冰片對照品，加乙酸乙酯制成質(zhì)量濃度為0.5 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。按處方比例，制備缺冰片的陰性樣品，同法制成陰性供試品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性供試品無干擾。見圖3。

注：1.冰片陰性供試品；2.供試品(批號：20100801)；3.冰片對照品；4.供試品(批號：20100802)；5.供試品(批號：20100803)。圖3 潔婦爾洗劑中冰片的TLC鑒別圖

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-磷酸鹽緩沖液(取0.2 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液250 mL，加0.2 moL·L-1氫氧化鈉溶液118 mL，加水稀釋至1000 mL，再加入三乙胺0.5 mL)(11∶89)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：220 nm。理論板數(shù)按苦參堿色譜峰計(jì)，不得低于4000。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取苦參堿對照品適量，加流動相制成質(zhì)量濃度為0.15 mg·mL-1的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備

精密量取本品5 mL，置分液漏斗中，加氨水2 mL，用三氯甲烷(20、20、15、15、10 mL)振搖提取5次，合并三氯甲烷層，回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，定容，搖勻，精密量取5 mL置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 陰性供試品溶液的制備

取按處方比例及工藝制備的缺苦豆子陰性對照樣品，按3.3項(xiàng)下方法制成陰性供試品溶液。

3.5 專屬性試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，依法測定，陰性供試品溶液在與苦參堿對照品色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間處無吸收峰。結(jié)果表明，其他組分對測定無干擾。見圖4。

注：A.對照品；B.潔婦爾洗劑供試品；C.陰性供試品；1.苦參堿。圖4 苦參的HPLC圖譜

3.6 線性關(guān)系的考察

精密稱取苦參堿對照品32.55 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為苦參堿對照品儲備液。精密量取對照品儲備液1、2、4、6、8 mL，分別置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對照品溶液及對照品儲備液各10 μL，分別注入高效色譜儀，按3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，以苦參堿對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算，得回歸方程：Y=14 679 485.52X+150 357.06，r=0.999 5。結(jié)果表明，苦參堿質(zhì)量濃度在0.013～1.30 mg·mL-1具有良好的線性關(guān)系。

3.7 精密度試驗(yàn)

取3.2項(xiàng)下的苦參堿對照品溶液10 μL，按上述色譜條件測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定苦參堿峰面積，計(jì)算RSD為1.5%，表明儀器精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份潔婦爾洗劑(批號：20100801)供試品溶液，分別在制備后第0、1、2、4、8、24 h進(jìn)樣，測定苦參堿峰面積并計(jì)算RSD。結(jié)果，供試品溶液中苦參堿峰面積的RSD為1.2%，表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批潔婦爾洗劑(批號：20100801)，按3.3項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，在上述色譜條件下測定苦參堿峰面積，經(jīng)計(jì)算，潔婦爾洗劑中苦參堿的平均質(zhì)量濃度為1.49 mg·mL-1，RSD為1.1%，表明該方法的重復(fù)性良好。

3.10 中間精密度試驗(yàn)

取同批潔婦爾洗劑(批號：20100801)，由不同分析人員，于不同時(shí)間按3.3項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，在同一儀器上測定，計(jì)算得潔婦爾洗劑中苦參堿的平均質(zhì)量濃度為1.48 mg·mL-1，RSD為1.2%，經(jīng)與重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果比較，α=0.88%。

3.11 加樣回收試驗(yàn)

精密量取已知含量的潔婦爾洗劑(批號：20100801)2 mL，分別加入苦參堿對照品溶液(1.514 mg·mL-1，溶媒為三氯甲烷)2 mL，加水1 mL，加氨水2 mL，其余按3.3項(xiàng)下方法制備樣品溶液，平行6份，測定苦參堿含量。計(jì)算平均回收率為97.1%，RSD為1.7%。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

3.12 樣品測定

按上述色譜條件對10批樣品進(jìn)行含量測定，測定結(jié)果見表2。

表2 潔婦爾洗劑中苦參堿含量測定結(jié)果(mg·mL-1，n=2)

由表2可知，10批樣品中苦參堿的平均含量為1.46 mg·mL-1，按平均含量的80%折算成含量限度，暫定潔婦爾洗劑每mL含苦豆子以苦參堿(C15H24N2O)計(jì)，不得少于1.2 mg。待收集到更多來源的藥材和更多批次的樣品后，再結(jié)合制劑生產(chǎn)、貯藏等因素對限度值進(jìn)行更深入的研究。

4 討論

4.1苦豆子主要有效成分為生物堿類，在以槐定堿為對照品進(jìn)行鑒別過程中，對參考文獻(xiàn)[6]的展開劑系統(tǒng)進(jìn)行了篩選優(yōu)化，改善了原鑒別條件下的分離度低和易拖尾現(xiàn)象，最終以三氯甲烷-甲醇-氨水(5∶0.6∶0.2)為展開劑，結(jié)果表明，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度良好。

蛇床子的TLC鑒別試驗(yàn)中，分別比較了乙醚直接提取、加氨水后以乙酸乙酯萃取和加氨水后以三氯甲烷萃取3種不同的提取方法，以及石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)、甲苯-乙酸乙酯-正已烷(3∶3∶2)、甲苯-乙酸乙酯(30∶1)等不同的展開系統(tǒng)。結(jié)果表明，采用乙醚直接提取，以石油醚(30～60 ℃)-乙酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)為展開劑分離效果最佳，且陰性供試品無干擾。

冰片的薄層鑒別試驗(yàn)中，分別選用三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚3種不同的提取溶媒，采用甲苯-丙酮(9∶1)、甲苯-乙酸乙酯(19∶1)、環(huán)已烷-乙酸乙酯(17∶3)等不同的展開劑分別進(jìn)行展開，并以5%香草醛硫酸溶液進(jìn)行顯色。試驗(yàn)結(jié)果表明，以乙醚萃取，環(huán)已烷-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑時(shí)斑點(diǎn)清晰，耐用性好，且陰性供試品無干擾。

本研究亦對組方中其他藥味如花椒的薄層色譜進(jìn)行研究，但在多次嘗試后，無法取得滿意效果(薄層圖色帶較重，無特征斑點(diǎn)，且陰性供試品有干擾)，因此未進(jìn)行鑒別。

4.2本標(biāo)準(zhǔn)制定過程中，考慮已對苦豆子中的槐定堿進(jìn)行薄層色譜鑒別，故選擇其含量較高的特征性活性成分[7-8]苦參堿作為指標(biāo)成分進(jìn)行HPLC的含量測定。參考了相關(guān)文獻(xiàn)[9-10]對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化1)檢測波長的選擇：采用紫外分分光光度法對苦參堿對照品的甲醇溶液進(jìn)行全波長掃描，根據(jù)光譜圖，選擇220 nm作為測定波長；2)流動相優(yōu)化：先后以乙腈-0.1%磷酸(20∶80)、乙腈-0.1%磷酸(10∶90)、甲醇-0.04%三乙胺溶液(61∶39)、乙腈-磷酸鹽緩沖液(取0.2 moL·L-1磷酸二氫鉀溶液250 mL，加0.2 moL·L-1氫氧化鈉溶液118 mL，加水稀釋至1000 mL，再加入0.5 mL三乙胺)(11∶89)、乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液(16∶7∶77)等分別進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，以乙腈-磷酸鹽緩沖液(11∶89)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果最為理想。對色譜條件進(jìn)行耐用性考察，如色譜柱、流動相比例、流速等，結(jié)果表明，該色譜條件下耐用性良好；3)含量測定中供試品溶液的制備方法考察：分別對氨水用量(1、2、3、4 mL)及三氯甲烷萃取次數(shù)(1、2、3、4、5、6次，依次以20、20、15、15、10、10 mL)進(jìn)行考察，結(jié)果表明，氨水用量2 mL，萃取5次時(shí)苦參堿提取較完全，且含量測定結(jié)果穩(wěn)定。

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StudyonQualityStandardofJiefuerLotion

TANJingling1，SONGAihua2，QINJinling2，ZHUWangyang3，DINGXiaoping1*

(1.HubeiInstituteforFoodandDrugControl，HubeiWuhan430064，China；2.WuhanMayinglongPharmaceuticalGroupStockCo.，Ltd，HubeiWuhan430064，China；3.HubeiSihuanPharmaceuticalCo.，Ltd，HubeiWuhan430056，China)

Objective：To study the quality standard for Jiefuer lotion.Methods：Sophoraalopecuroides，Cnidiummonnieriand borneol was qualitative identified by TLC.Quantitative determination of matrine performed by HPLC.Results：The method of identification by TLC was highly specific，the established HPLC method was accurate and repetitive.Conclusion：The proposed standards can effectively control the quality of Jiefuer lotion.

JJiefuer Lotion；quality standard；matrine；Sophoraalopecuroides；Cnidiummonnieri；borneol

2015-03-01)

*

丁曉萍，副 主任藥師，研究方向：中成藥質(zhì)量控制研究；Tel：(027)87272513，E-amil:dxp2888@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.10.021