大鼠高位結腸透析方法的初步建立及療效探析

姚輝潔 黃銀蘭 李洋洋 呂楊 洪權 杜婧

[摘要] 目的 建立大鼠高位結腸透析方法， 探析該方法對急性腎功能衰竭大鼠的治療效果。 方法 健康雄性SD大鼠15只，隨機分為正常組、模型組和治療組（各5只），正常組不作任何處理，模型組和治療組甘油誘導建立急性腎功能衰竭模型，治療組給予高位結腸透析治療，觀察各組血肌酐、尿素氮水平變化。 結果 模型組和治療組的血肌酐、尿素氮水平較正常組明顯升高，差異具有統計學意義（P<0.05）；治療組的血肌酐值（230.98±95.51）μmol/L較模型組（317.90±77.63）μmol/L明顯降低（P<0.05）；治療組血尿素氮水平（35.00±11.93）mmol/L較模型組（52.53±21.5）mmol/L也有明顯降低趨勢，差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 成功建立了大鼠高位結腸透析方法，期望為后期實驗利用動物實驗進行高位結腸透析的方法改進和機制研究奠定基礎。

[關鍵詞] 高位結腸透析；大鼠；方法

[中圖分類號] R473.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）08（c）-0059-03

Preliminary Establishment of High Colon Dialysis in Rat and Its Efficacy

YAO Hui-jie1， HUANG Yin-lan1，LI Yang-yang1，LV Yang2， HONG Quan2， DU Jing2，3

1.Traditional Chinese Medicine College， Ningxia Medical University， Yinchuan， Ningxia，750004 China；2. Kidney Center of PLA and National Key Laboratory， General Hospital of PLA， Beijing， 100853 China；3. Department of Geriatric Nephrology， General Hospital of PLA， Beijing， 100853 China

[Abstract] Objective To establish the high colonic dialysis and observe its efficacy in treating acute renal failure in rats. Methods 15 healthy male SD rats were randomized into normal group， model group and treatment group with 5 in each group. The normal group was untreated， while acute renal failure model were established in the model group and treatment group followed by high colonic dialysis performed in the treatment group. The changes of serum creatinine and blood urea nitrogen levels were observed in all the three groups. Results The serum creatinine and blood urea nitrogen levels were higher in the model group and treatment group than in the normal group， and the differences were statistically significant， P<0.05； the serum creatinine level was lower in the treatment group than in the normal group， 230.98±95.51μmol/L vs 317.90±77.63μmol/L， and the difference was statistically significant， P<0.05； the blood urea nitrogen level was lower in the treatment group than in the normal group， 35.00±11.93 mmol/L vs 52.53±21.5 mmol/L， but the difference was not statistically significant， P﹥0.05. Conclusion Preliminary establishment of high colon dialysis in rat is realized， which may lay the foundation for the future improvement of high colon dialysis upon animal experiment， and for the study on its mechanism.

[Key words] High colon dialysis； Rat； Method

高位結腸透析是在傳統中藥灌腸的基礎上逐漸發展起來的一種治療方法，由于該方法操作簡單、費用低、無明顯不良反應，已被臨床上用于急、慢性腎功能衰竭、重癥肝病、高尿酸血癥等疾病的治療[1-4]。經查閱文獻，該研究發現關于結腸透析的臨床觀察很多，但尚未見到通過動物實驗進一步探究結腸透析的文章。我們嘗試建立大鼠高位結腸透析方法，期望能夠為后期實驗中高位結腸透析的方法改進和機制研究奠定基礎，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年5—10月，健康雄性SD大鼠15只（300±25）g，隨機分為正常組、模型組和治療組（各5只），動物室保持12 h晝夜循環，室溫控制在19～29℃，濕度40%～70%，大鼠自由攝取水和食物，適應性喂養一周后，甘油誘導建立大鼠急性腎衰竭模型，以觀察大鼠高位結腸透析的治療效果。方法如下：實驗動物限水不限食24 h，模型組和治療組用50%甘油雙下肢肌肉注射（8 mL/kg）誘導急性腎衰竭模型，正常組注射同等劑量的生理鹽水。治療組于造模前2 d開始給予大鼠高位結腸透析治療， 1次/d， 1次1 h ，共5次。

1.2 方法

1.2.1 配置透析液 實驗用透析液為按比例配制而成的碳酸氫鹽透析液，排毒固腎湯由中國人民解放軍總醫院中藥房一批購進大黃等中藥，按需制成中藥湯劑。

1.2.2 簡易手動的結腸透析裝置 大鼠體型小，沒有合適的結腸透析機，我們選擇帶有刻度的一次性注射器制作簡易手動的結腸透析裝置，定量灌注透析液。醫用管路采用一次性靜脈輸液針的軟管作為單腔管路（約15 cm），先將針頭剪掉并把軟管一端修整圓鈍，防止在操作過程中劃傷大鼠，再將針托和注射器連接，制成簡易手動的結腸透析裝置。

1.2.3 大鼠高位結腸透析治療及取材 選擇長度約20 cm、直徑5～6 cm、口徑2～3 cm的瓶子，去掉瓶蓋作為透氣孔，在瓶子底部上2～3 cm處將瓶子分成兩截，前半部分作為固定器的主筒，后半部分作為后蓋，后蓋上挖直徑3～4 cm的孔，以充分暴露大鼠臀部，待大鼠鉆進主筒后，將后蓋蓋上并固定，尾巴露出在固定器外，輕拉大鼠尾巴充分暴露臀部，①腸道清洗：將簡易結腸透析裝置的單腔管路由肛門緩慢插入到結腸中下段（距離肛門約10 cm），邊插邊注入生理鹽水，重復注入直至大鼠無糞便排出。②結腸透析：一次性灌注碳酸氫鹽透析液5 mL，每隔一分鐘補充灌注一次，一次1 mL，重復操作1 h。③中藥保留灌腸：一次性灌注排毒固腎湯5 mL，保留30 min。高位結腸透析治療于造模前2 d開始，造模后第3天結束，1次/d，共5次。實驗結束時戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血，放于促凝管中，顛倒混勻。

1.3 觀察指標

血液采集后室溫靜置40～120 min，3000 r/min離心10 min。分離上層血清，送中國人民解放軍總醫院生化科，全自動生化分析儀檢測血肌酐、尿素氮值。

1.4 統計方法

采用SPSS17.0進行統計學分析，計量資料以（x±s）表示，不同組之間比較用單因素方差分析，P <0.05為差異有統計學意義。

2 結果

模型組大鼠反應遲鈍，精神萎靡，雙下肢局部疼痛，行動受限， 1-4 h可見肉眼血尿，進食進水量減少；治療組大鼠反應和精神狀態較模型組有所改善，進食進水量亦有增加；正常對照組反應靈敏，精神良好，進食進水正常，尿液顏色正常。模型組血肌酐、尿素氮較正常組明顯增加（P<0.05）； 和模型組相比，治療組大鼠的血肌酐水平有所降低，差異有統計學意義（P<0.05），尿素氮水平也有所降低，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

表1 急性腎衰竭大鼠的血肌酐、尿素氮改變（x±s）

注：*與模型組比較，P<0.05；#與正常組比較，P<0.05。

3 討論

該研究嘗試建立大鼠高位結腸透析方法，并觀察該方法在大鼠急性腎功能衰竭模型中的治療效果。在實驗中，該研究采用從大鼠肛門反復灌注生理鹽水，刺激腸蠕動，對腸道進行較徹底的清洗，減少了結腸粘膜對有毒物質的吸收和腎臟的負擔，同時可以增大結腸粘膜的可灌洗面積、促進毒素排出體外。另一方面，該研究采用一次性注射器和靜脈輸液針的軟管制作簡易手動的結腸透析裝置，可以使透析液深入到大鼠的降結腸甚至橫結腸，從而增加了結腸黏膜的吸收面積，促進毒物排出體外。此外，在研究中利用大鼠固定器對大鼠進行固定，避免多次藥物麻醉對實驗動物的生理功能、機體狀況造成較大影響，減少實驗結果的干擾因素。該研究結果表明，經高位結腸透析治療后，治療組的血肌酐值（230.98±95.51）μmol/L較模型組（317.90±77.63） μmol/L明顯降低，差異有統計學意義；同時，治療組血尿素氮水平（35.00±11.93）mmol/L較模型組（52.53±21.5）mmol/L也有明顯降低趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05），考慮可能與治療時間較短、樣本量較小有關。這說明該研究中建立的大鼠高位結腸透析方法對急性腎功能衰竭大鼠的腎功能改善有明顯效果。

近年來，結腸透析已經被用于腎功能衰竭患者的治療中。結腸粘膜具有半透膜特性，具有選擇性吸收和分泌功能。利用這種半透膜特性，可以將結腸黏膜當做透析膜，在透析液持續灌入結腸后，由于結腸黏膜毛細血管與透析液之間存在不同的溶質濃度梯度和滲透壓梯度，通過彌散和滲透的作用，體內的毒素和水分可以進入到透析液中，同時透析液中對人體有用的物質被吸收入血。相關研究表明，高位結腸透析可以改善急、慢性腎功能衰竭患者的臨床癥狀、延緩腎功能惡化，改善患者的生存質量，且無明顯的副反應，有廣闊的發展前景[5-6]。張少泉等[7]利用高位結腸透析聯合中藥灌腸治療慢性腎臟病（3～4期），治療后患者的血肌酐、尿素氮、尿酸等都有所下降，患者的腎功能得到明顯改善。黃新艷等[8]亦證明通腑降濁方結腸透析聯合基礎治療慢性腎功能衰竭有較好的療效。該研究結果表明大鼠高位結腸透析治療急性腎功能衰竭可以有效改善大鼠的腎功能，這一研究結果與相關文獻報道的數據相吻合。

綜上，該研究初步建立了大鼠結腸透析治療方法，可以排除體內積聚的毒素、延緩腎功能惡化。但是，大鼠結腸透析方法只是初步建立，樣本量較少，在后續的研究中還需要進一步擴大樣本量進行驗證，同時對高位結腸透析的作用機理進一步深入研究探討，并觀察該方法的長期的療效。

[參考文獻]

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[7] 張少泉，劉東漢，倪向榮，等. 序貫式結腸透析聯合中藥灌腸治療慢性腎臟病臨床觀察[J].山西中醫，2015（1）：9-10.

[8] 黃新艷，李桂花，李平，等.通腑降濁方結腸透析聯合西藥治療慢性腎功能衰竭隨機平行對照研究[J].實用中醫內科雜志，2015（3）：87-88.

（收稿日期：2015-05-27）