小兒輪狀病毒感染免疫應(yīng)答的研究

任曉蘭

[摘要] 目的 對小兒輪狀病毒感染的免疫應(yīng)答進行研究。方法 以該院2014年1月—2015年3月收治的62例輪狀病毒感染患兒作為觀察組，以同期在該院進行健康體檢的60例小兒作為對照組，對比兩組研究對象的抗原及糞便標本與血漿中的特異性抗體，并檢測輪狀病毒基因類型。結(jié)果 觀察組62例患兒的糞標本中的輪狀病毒分型P型中Ps型所占比例最高，為82.26%，G分型中以G3所占比例最高，為79.03%，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。觀察組患兒的CD19+細胞比例明顯高于對照組，CD4+比例明顯低于對照組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。同對照組相比，觀察組患兒的外周血單個核細胞IFN-γ mRNA表達水平在發(fā)病3 d內(nèi)出現(xiàn)明顯升高，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。IL-12p40 mRNA在疾病構(gòu)成中均明顯高于對照組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 輪狀病毒感染患兒的免疫應(yīng)答中以特異性體液免疫為主，特別是黏膜免疫顯著性增強。

[關(guān)鍵詞] 輪狀病毒感染；免疫應(yīng)答；兒童

[中圖分類號] R725.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）08（c）-0103-03

Study of Immune Response to Rotavirus Infections in Children

REN Xiao-lan

Department of Pediatrics， Qingdao Third Peoples Hospital， Qingdao， Shandong Province， 266000 China

[Abstract] Objective To study the immune response to rotavirus infections in Children. Methods 62 children with rotavirus infections admitted to our hospital and 60 other children who taken physical examination here between January 2014 and March 2015 were assigned to observation group and control group respectively to compare the antigen and the specific antibodies in feces and plasma between the two groups and determine the gene types of rotavirus. Results In the observation group， in P and G type rotavirus from feces specimens， P8-type and G3-type were most prominent， accounting for 82.26% and 79.03%， respectively， and the differences were statistically significant， P<0.05. The proportion of CD19+ Cells were higher and that of CD4+ lower in the observation group than in the control group， and the differences were statistically significant， P<0.05. Compared with the control group， IFN-γ， and mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells in the observation group increased significantly within 3 days after onset， and the difference was statistically significant，P<0.05. IL-12p40 and mRNA in the diseases constitution were higher in the observation group than in the control group with statistical differences， P<0.05. Conclusion Immune response to rotavirus infections in children is mainly specific humoral immune response， especially that of mucosal immune.

[Key words] Rotavirus； Immune response； Children

輪狀病毒為導(dǎo)致兒童嚴重脫水腹瀉的重要病原體，全世界每年有100萬左右的患兒死于該病[1]。因為輪狀病毒會首先損害腸道黏膜上皮細胞，免疫反應(yīng)主要表現(xiàn)為典型黏膜免疫反應(yīng)特點[2-3]。為了對小兒輪狀病毒感染的免疫應(yīng)答特點進行分析探討，筆者對該院62例患兒的臨床資料進行回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年1月—2015年3月期間，該院共收治62例輪狀病毒感染患兒，其中男38例，女24例；年齡為4～30個月，平均年齡為（16.4±2.8）個月；每日排便次數(shù)為1～24次，平均（8.4±1.7）次。以同期在該院進行健康體檢的60例小兒作為對照組，其中男32例，女28例，年齡為6～38個月，平均（18.6±4.7）個月。兩組研究對象的性別、年齡等基本資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05，有可比性。

1.2 檢驗方法

①外周單個核細胞分離：在采集肝素抗凝血之后，加入等量的Ficoll分離液，離心20 min，取上層血漿存入-70℃冰箱中保存。將中間層細胞吸出，以氯化鈉溶液（0.9%）進行沖洗，離心10分鐘，留細胞沉淀。

②淋巴細胞亞群檢測：采集50 μL肝素抗凝血，加入熒光標記體，然后混合均勻，于室溫下避光30 min，加入450 μL溶血劑，混合均勻之后，靜止20 min，進行流式細胞儀檢測。

③細胞因子基因表達檢測：將TRIzol1mL加入外周血單個細胞沉淀，于室溫條件下保存5 min，加入氯仿200 μL，劇烈搖晃20 s，靜止5 min。取上層置入Eppendorf管，再加入異丙醇500 μL，混合均勻，于室溫條件下靜止10 min，離心10 min。取上清液，以乙醇（70%）洗一次，離心5 min，在沉淀晾干后，加入3 μLDEPC水，檢測260 nm與280 nmA值。

1.3 觀察指標

以SPSS 22.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行處理分析，對計數(shù)資料以χ2檢驗，以例數(shù)百分比的形式表示，對計量資料以t檢驗，以（x±s）的形式表示，當P<0.05時，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 輪狀病毒基因型檢測結(jié)果

觀察組62例患兒的糞標本中的輪狀病毒分型P型中P8型所占比例最高，為82.26%（51/62）（χ2=7.742，8.105，P<0.05），G分型中以G3所占比例最高，為79.03%（49/62），（χ2=7.085，11.383，P<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 觀察組患兒糞便的輪狀病毒基因分型（n=62）

2.2 兩組研究對象的淋巴細胞亞群測定結(jié)果

觀察組患兒的CD19+細胞比例明顯高于對照組，CD4+比例明顯低于對照組，P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.3 外周血單個細胞因子mRNA表達變化

同對照組相比，觀察組患兒的外周血單個核細胞IFN-γ mRNA表達水平在發(fā)病3 d內(nèi)明顯升高（χ2=10.994，P<0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。兩組研究對象的IL-2、IL-4及IL-10水平無顯著性變化（t=0.014，0.106，0.004，P>0.05），見表3。

3 討論

觀察組患兒的輪狀病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白為VP4與VP7，其中VP7為外殼糖蛋白，是主要中和抗原[4]。按照VP7差異可將輪狀病毒分為14個不同G型，臨床常見性嬰幼兒輪狀病毒有G1、G2、G3及G4[5]。該研究中，觀察組患兒的G分型主要有G3，比例約占79.03%。VP4為另一種糖蛋白，可誘導(dǎo)中和抗體，常見類型主要有P4、P6及P8型[6]。該研究中，P分型主要以P8為主，比例約為82.26%。

該研究中，觀察組患兒在感染輪狀病毒之后，外周血的主要淋巴細胞比例出現(xiàn)明顯變化，主要表現(xiàn)為CD19+細胞比例為（30.6±7.5）%，符合相關(guān)文獻報道[9]，且明顯高于對照組的（23.3±7.4）（P<0.05）。原因為，患兒在感染輪狀病毒之后，免疫系統(tǒng)會經(jīng)識別病原體來激活免疫反應(yīng)，如產(chǎn)生特異抗體、激活T細胞等[7]。因為輪狀病毒會首先對腸道黏膜的上皮細胞造成侵犯，產(chǎn)生IgG、IgA及IgM三類抗體。這三類抗體抑制用作輪狀病毒免疫應(yīng)答的主要評價指標，其中產(chǎn)生IgA抗體是重要特點[8]。

血漿與糞便標本中的輪狀病毒特異性IgA抗體水平同患兒病情程度有密切關(guān)系。每天排便次數(shù)5次以上、腹瀉時間超過6 d的患兒的糞便標本中的IgA抗體的滴度更高。臨床上關(guān)于輪狀病毒感染患兒的臨床特點及特異性抗體的報道比較少，且因人種、地區(qū)、血樣采集時間等不同，結(jié)論不同。研究指出[10]，腹瀉嚴重患兒的腸道上皮細胞內(nèi)可能會有更多的輪狀病毒增殖及感染，并且會對局部淋巴細胞造成刺激，引發(fā)免疫反應(yīng)，進而引發(fā)更多IgA抗體。小兒的幼齡階段會感染多次輪狀病毒，前次嚴重腹瀉者，可有效降低下一次病情程度。

綜上所述，小兒輪狀病毒感染病情嚴重者的IgA水平更高，能夠?qū)純涸俅胃腥据啝畈《具M行有效抵抗。

[參考文獻]

[1] Troll樣受體在小兒輪狀病毒感染中的研究進展[D]. 蚌埠：蚌埠醫(yī)學(xué)院，2013.5.

[2] 余曼莉.輪狀病毒致新生鼠腸道外感染后肝臟損傷與NF-kB及TNF-α的相關(guān)性研究[D]. 蚌埠：蚌埠醫(yī)學(xué)院，2011.5.

[3] Ujjwai K， Reena M， Suked N， et al. Alterations in oxidant/antioxidant balance， high-mobility group box 1 protein and acute phase response in cross-bred suckling piglets suffering from rotaviral enteritis[J].Immunotherapeutics，2014，46（7）：1127-1133.

[4] Drek W， Mark A， Baudouin S， et al. Public health impact of accelerated immunization against rotavirus infection among children aged less than 6 months in the United States[J]. Taylor & Francis Journal，2014，10（7）：2032-2038.

[5] Girishanthy K， Kitaw D， Patrick L， et al. Clinical and cost burden of rotavirus infection before and after introduction of rotavirus vaccines among commercially and Medicaid insured children in the United States[J]. Human Vaccines& Immunotherapeutics，2014，10（8）：2255-2266.

[6] Z， Dubal， M. Mawlong， B. Susngi， et al. Comparison of agarose gel electrophoresis and RNA-PAGE for rapid detection of rotavirus from faecal samples[J]. Journal of Applied Animal Research，2015，Vol，43 （1）：77-82.

[7] 張標，佟琳，易山，等. 輪狀病毒滅活疫苗和減毒活疫苗序貫免疫的體液免疫應(yīng)答效果[J]. 中國生物工程雜志，2013，33（2）：14-20.

[8] 周金芳，鐘紅平.炎琥寧聯(lián)合更昔洛韋治療小兒輪狀病毒感染性腹瀉的臨床療效[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2014，29（7）：795-798.

[9] 楊琳東，袁強.不同方案治療小兒輪狀病毒感染性腹瀉 70 例療效比較[J].九江學(xué)院學(xué)報：自然科學(xué)版，2014，4（4）：66-68.

[10] 胡海珍.更昔洛韋治療小兒輪狀病毒性腸炎 30 例觀察[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（4）：181-184.

（收稿日期：2015-05-15）