肌酸激酶同工酶兩種方法的對比分析

王志尊 郭艷霞 張然

[摘要] 目的 對肌酸激酶同工酶（CK-MB）的兩種測定方法進(jìn)行比較，分別為免疫抑制法和膠體金法。方法 標(biāo)本來自于2014年12月—2015年2月期間在該院住院的患者， 主要針對兒科住院患者送檢的標(biāo)本，年齡段在6個月～3歲，隨機(jī)選取152例。在全自動生化分析儀上分別進(jìn)行測定肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性，并從中選取二者不成比例的標(biāo)本進(jìn)一步用膠體金方法測定CK-MB質(zhì)量。結(jié)果 測定標(biāo)本共152人份，CK在正常范圍內(nèi)，CK-MB升高，高于正常值（51±20） U/L（免疫抑制法結(jié)果），用膠體金法結(jié)果為（2.367±1.038） ng/mL；CK高于正常值時，CK-MB免疫抑制法結(jié)果為（73±30） U/L，膠體金法結(jié)果為（9.152±1.123） ng/mL。結(jié)論 CK-MB的活性測定一般均為免疫抑制法，但由于方法學(xué)的局限性，可引起測定結(jié)果假性升高，出現(xiàn)異常升高時，及時和臨床取得聯(lián)系，可結(jié)合患者的病情，進(jìn)一步用膠體金法測定CK-MB的質(zhì)量，為患者提供更準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

[關(guān)鍵詞] 肌酸激酶同工酶；免疫抑制法；膠體金法

[中圖分類號] R542.22 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）08（c）-0176-02

Comparative Analysis of Two Measure Methods of CK-MB

WANG Zhi-zun， GUO Yan-xia， ZHANG Ran

Clinical laboratory， the Hospital of Shenzhou City， Shenzhou， Hebei Province， 053800 China

[Abstract] Objective To compare the two measure methods of Creatine kinase isoenzyme（CK-MB）， and they were immunosuppression method and colloidal gold method respectively. Methods Specimens were from randomly selected 152 patients hospitalized in our hospital from December 2014 to February 2015，mainly for pediatric inpatients aged 6 months to 3 years. Using auto biochemical analyzer to measure the activity of creatine kinase （CK） and creatine kinase isoenzyme（CK-MB）， and selected those disproportionate specimens for further measure of CK-MB using colloidal gold method. Results Measured 152 specimens in total， and CK was within the normal range， but CK - MB was higher than normal （51±20） U/L（using immune suppression method）， while using colloidal gold method the result was（2.367±1.038） ng/mL； When CK was higher than normal， the immune suppression measure results of CK-MB was （73±30） U/L， and the result of colloidal gold method was （9.152±1.123） ng/mL. Conclusion The measurement of CK-MB activity generally are immune suppression method， but due to the limitation of the methodology， it can cause pseudo rise. When encounter abnormal rise， make contact with clinical doctors， taking the patients state into account， one could use colloidal gold method for further measure of the quality of CK - MB， in order to provide more accurate measure results for patients.

[Key words] CK-MB； Immune suppression method； Colloidal gold method

正常情況下，CK-MB/CK應(yīng)<5%，CK-MB升高，大于或等于正常高值的6%，被認(rèn)為是臨床上心肌損傷的特異性指標(biāo)[1]。理論上CK-MB的活性不可能大于總CK的活性，但在臨床實(shí)際工作中經(jīng)常出現(xiàn)CK-MB活性異常升高甚至高于CK的活性，也有許多相關(guān)的報(bào)道。在實(shí)際工作中有的同志僅憑借工作經(jīng)驗(yàn)，擅自改動檢測結(jié)果，達(dá)到理想的水平，這樣是很不負(fù)責(zé)任的表現(xiàn)，很有可能會造成漏診或是誤診；并且臨床醫(yī)生有時會向檢驗(yàn)科進(jìn)行咨詢，為什么會有時出現(xiàn)CK-MB升高，而CK不高的檢測結(jié)果，與患兒的臨床表現(xiàn)不一致；再考慮到患者的經(jīng)濟(jì)因素和避免不必要的醫(yī)療資源的浪費(fèi)（CK-MB的質(zhì)量濃度測定采用膠體金法，試劑相對比較昂貴）。鑒于以上幾點(diǎn)因素，該研究選擇2014年12月—2015年2月期間在該院住院的患者作為對象進(jìn)行研究，重在探討在什么條件下采用哪一種測定方法測定CK-MB，為臨床提供更為準(zhǔn)確的、合理的檢測結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年12月—2015年2月在深州市醫(yī)院兒科病區(qū)住院的患者。年齡為6個月～3歲，未作性別分組。標(biāo)本由兒科護(hù)士肘靜脈采血，采血后立即送檢驗(yàn)科。所選患兒基本排除肌病、腦病，多為心肌炎。標(biāo)本排除溶血、脂血、黃疸的影響。

1.2 測定方法

1.2.1 儀器與試劑 CK活性檢測用速率法，CK-MB活性檢測用免疫抑制法，均使用日立7600系列生化分析儀。CK試劑是北京百奧泰康生物技術(shù)有限公司提供，CK-MB試劑是北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司提供；CK-MB質(zhì)量測定為膠體金法，儀器為瑞萊生物工程（深圳）有限公司提供的多功能免疫分析儀，及其配套試劑。以上操作均嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程和試劑使用說明書要求進(jìn)行。

1.2.2 方法 對標(biāo)本先在日立7600系列全自動生化分析儀進(jìn)行CK和CK-MB活性測定，對二者不成比例的進(jìn)行CK-MB質(zhì)量測定。CK活性結(jié)果>240 U/L為升高，CK-MB活性結(jié)果>24 U/L，質(zhì)量濃度>6 ng/mL為升高。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料如為正態(tài)分布采用（x±s）表示。

2 結(jié)果

選取152份標(biāo)本，其中有82份標(biāo)本為已確診為心肌炎的， 并在該院兒科病區(qū)住院經(jīng)過治療前、后的兩次標(biāo)本，70份標(biāo)本為門診患者。對所測定結(jié)果進(jìn)行比較分析。其中CK和CK-MB同時成比例升高的標(biāo)本有123份，與理論也基本符合，CK 均值為（485±108）U/L，CK-MB的均值為（73±30）U/L，結(jié)果見表1.但有29份標(biāo)本二者結(jié)果與理論不符，均為CK小于240 U/L，但CK-MB大于24 U/L，進(jìn)一步用膠體金法測定CK-MB質(zhì)量，測定結(jié)果在正常范圍內(nèi)，見表2。

表1 CK升高>240 U/L（x±s）

表2 CK正常<240U/L（x±s）

3 討論

在該研究中有29份標(biāo)本與理論的CK與CK-MB的比值不相符，進(jìn)一步測定CK-MB的質(zhì)量，結(jié)果比較和臨床相一致。其中有5例診斷為心肌炎，經(jīng)過一個療程的治療后，復(fù)查心肌酶譜，其它幾項(xiàng)均恢復(fù)正常，只有CK-MB>24 U/L，但是CK-MB的質(zhì)量濃度在正常范圍內(nèi)。

CK以二聚體的形式存在，由兩種亞基組成-M亞基和B亞基，形成三種同工酶的結(jié)構(gòu)：CK-MM、CK-MB、CK-BB。M亞基主要存在于肌肉中，不同肌肉中同工酶的比例不同，骨骼肌中CK-MM占絕大部分，CK-MB<3%。心肌是人體唯一含CK-MB最多的器官，CK-MB占15%～40%[2]。B亞基主要存在于腦及神經(jīng)細(xì)胞中。CK-MB免疫抑制法的檢測原理是試劑中含有抗M抗體，與M亞單位結(jié)合且抑制其活性，測定血清的B亞基活性，所測酶活性乘以因數(shù)2即代表血清CK-MB的活性，因CK-BB含量極少，可略而不計(jì)。CK-MB質(zhì)量法采用膠體金法，利用雙向側(cè)流免疫反應(yīng)原理，通過雙抗體夾心法制備而成。樣本中的CK-MB抗原首先與化學(xué)耦合墊上的抗CK-MB抗體偶合物發(fā)生免疫反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物。其后免疫復(fù)合物隨著樣品在硝基纖維素膜上層析流動，當(dāng)免疫復(fù)合物層析至檢測區(qū)時，與抗CK-MB抗體發(fā)生反應(yīng)。血液中的CK-MB越多，測試帶的復(fù)合物越多，條帶上的光密度值越高。

目前常規(guī)測定CK-MB的活性方法為免疫抑制法，在全自動生化分析儀檢測，其檢測成本低、速度快，臨床應(yīng)用比較普遍。但由于方法學(xué)的局限性，可引起測定結(jié)果的假性升高。有報(bào)道稱腫瘤患者和腦病患者中CK-MB/CK>25%的比例比較高[2]，這可能是CK-BB、巨CK、巨CK2的干擾所致[3-5]。另外由于生理因素的原因，血清中的CK-BB含量與年齡存在一定的關(guān)系，兒童血清中的CK-BB的含量高于成人[6]。因此免疫抑制法測定的CK-MB的活性偏高，但是CK-MB的質(zhì)量測定一般均在正常范圍內(nèi)[2]。這與該研究結(jié)果基本一致。

另有報(bào)道認(rèn)為在哮喘兒童中CK-MB升高提示患兒缺氧狀態(tài)，CK-MB可認(rèn)為是呼吸功能損傷的一項(xiàng)指標(biāo)[8]。因此在檢測結(jié)果出現(xiàn)CK與CK-MB二者不成比例時，應(yīng)該綜合分析結(jié)合患兒的病史資料，進(jìn)一步的進(jìn)行CK-MB質(zhì)量測定，或者進(jìn)一步的檢測肌鈣蛋白I，Troponin I濃度為0.034 ug/L為臨界值判斷心肌損傷[7]。為患者提供更為準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。這是對患者負(fù)責(zé)也是對自己負(fù)責(zé)。在目前醫(yī)患關(guān)系比較緊張的局勢下，作為醫(yī)務(wù)工作者，我們更應(yīng)該認(rèn)真對待每一份檢測結(jié)果，對每一個數(shù)據(jù)都應(yīng)該做到心中有數(shù)，無論是患者還是臨床咨詢都應(yīng)該給出合理的、科學(xué)的解釋。

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（收稿日期：2015-05-05）