烏腺金絲桃醇溶物體外活性研究

楊 洋，常桂英，張成林，劉乘寧，黨曉宇，劉夢(mèng)瓊，張 雷

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物工程學(xué)院，吉林 吉林132101）

烏腺金絲桃（Hypericum attenuatum），又名野金絲桃，屬于藤黃科金絲桃屬植物，是近年來關(guān)注較多的中草藥之一。研究表明，烏腺金絲桃植株中含有黃酮類化合物、金絲桃素和揮發(fā)油等成分，對(duì)心律失常、心肌缺血、心衰有較好的療效，并且能夠增強(qiáng)人體免疫力，同時(shí)還具有抗抑郁、抗腫瘤及抗病毒等功效[1]。目前，對(duì)烏腺金絲桃的研究仍處于初級(jí)階段，如活性成分的提取、藥理學(xué)方向的研究等，故對(duì)烏腺金絲桃其他方面的報(bào)道較少。試驗(yàn)通過對(duì)烏腺金絲桃醇溶物體外活性的研究，試圖尋找純天然、無毒的活性物質(zhì)，為烏腺金絲桃在醫(yī)藥、保健食品、美白化妝品等領(lǐng)域的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)[2]，也為烏腺金絲桃綜合開發(fā)提供方向。

1 材料與方法

1.1 供試材料

烏腺金絲桃，采自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院烏腺金絲桃種植基地。供試大腸桿菌（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室）。試驗(yàn)主要試劑有鄰苯三酚、Tris-HCL、磷酸緩沖液等生化試劑（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室），酪氨酸酶、鄰苯二酚（購自上海源葉生物公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 烏腺金絲桃醇溶物制備 將烏腺金絲桃根、莖、葉、花干燥，粉粹，取粉末各50 g，分別用650 m L 75%乙醇浸提6 h，過濾；向?yàn)V渣中再加入650 m L 75%乙醇重復(fù)提取1 次；合并濾液，于50℃下減壓濃縮至1/4 體積；分別取濃縮液100、80、60、40、20 m L 于100 m L容量瓶中定容，配制4個(gè)部位不同濃度的醇溶物[3]。1.2.2 烏腺金絲桃醇溶物的抑菌活性研究 將活化的大腸桿菌接種到培養(yǎng)基上，然后將不同樣品液浸泡的濾紙片（6 mm）分別貼在平板上，于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，記錄抑菌圈直徑[4]。

1.2.3 烏腺金絲桃醇溶物的抗氧化活性研究——鄰苯三酚自氧化法 在試管中加入4.5 m L 50 mmoL/L Tris-HCL 溶液（pH 值8.2），再分別添加0.1 m L 醇溶物試樣液，然后在25℃水浴中預(yù)熱20 m in；加入25℃預(yù)熱的2.5 mmol/L 鄰苯三酚溶液20 L，并開始計(jì)時(shí)，迅速轉(zhuǎn)入比色皿中，在320 nm 測(cè)其吸光度（Ai），記錄4 min 時(shí)的吸光值。以蒸餾水為空白（吸光值A(chǔ)0）[5-6]。清除率（%）=（A0－Ai）/A0×100

1.2.4 烏腺金絲桃醇溶物對(duì)酪氨酸酶抑制作用的研究 取4 支試管按表1 添加底物、烏腺金絲桃醇溶物和磷酸緩沖液，于30℃水浴中恒溫5 m in 后，再加入0.035 g/m L 酪氨酸酶0.1 m L，反應(yīng)15 m in，移入比色皿中，在410 nm 處分別測(cè)定吸光度A1、A2、A3、A4[7-8]。抑制率（%）=[1－（A3－A4）/（A1－A2）]×100

表1 烏腺金絲桃醇溶物對(duì)酪氨酸酶抑制作用的反應(yīng)（物mL加）液量

2 結(jié)果與分析

2.1 烏腺金絲桃醇溶物對(duì)大腸桿菌的抑制作用

從圖1 中可以看出，較低濃度（如20%）時(shí)，花、莖、根的醇溶物對(duì)大腸桿菌無抑菌活性，葉的醇溶物抑菌圈直徑為7.35 mm；隨著濃度的增加，各部位醇溶物對(duì)大腸桿菌的抑菌活性呈增強(qiáng)趨勢(shì)；當(dāng)醇溶物濃度為40%時(shí)，烏腺金絲桃各部位對(duì)大腸桿菌的抑制作用由強(qiáng)到弱依次為葉＞花＞莖＞根，其中根的醇溶物無抑菌活性；當(dāng)在醇溶物濃度為60%時(shí)，各部位對(duì)大腸桿菌的抑制作用由強(qiáng)到弱依次為花＞葉＞根＞莖；當(dāng)醇溶物濃度為80%時(shí)，各部位對(duì)大腸桿菌的抑制作用由強(qiáng)到弱依次為根＞花＞葉＞莖；當(dāng)醇溶物濃度為100%時(shí)，各部位的抑菌活性均達(dá)最大值，其中花、葉、根的抑菌效果相近，抑菌圈達(dá)8.80 mm 以上，以葉的醇溶物抑菌活性最強(qiáng)，抑菌圈直徑達(dá)8.93 mm，而莖的抑菌效果明顯較低，抑菌圈僅7.90 mm。

2.2 烏腺金絲桃醇溶物抗氧化活性

由圖2 可知，不同部位的醇溶物均具備一定的抗氧化活性，且隨著醇溶物濃度的增加，其抗氧化活性逐漸增強(qiáng)；其中，在醇溶物濃度相同的情況下，葉的抗氧化活性顯著高于其他部位，清除率均在50%以上；當(dāng)醇溶物濃度為20%和40%時(shí)，各部位的抗氧化活性由強(qiáng)到弱均為葉＞花＞莖＞根；當(dāng)醇溶物濃度為60%時(shí)，各部位的抗氧化活性由強(qiáng)到弱依次為葉＞花＞根＞莖；當(dāng)醇溶物濃度為80%時(shí)，各部位的抗氧化活性由強(qiáng)到弱均為葉＞莖＞花＞根；當(dāng)醇溶物濃度為100%時(shí)，各部位的抗氧化活性由強(qiáng)到弱均為葉＞花＞莖＞根。

圖2 烏腺金絲桃醇溶物的抗氧化活性

2.3 烏腺金絲桃醇溶物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用

從圖3 中可以看出，除了20%花的醇溶物以外，其他3個(gè)部位的各濃度醇溶物以及花的其他濃度醇溶物對(duì)酪氨酸酶均表現(xiàn)出一定的抑制作用，且隨著醇溶物濃度的增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)；當(dāng)醇溶物濃度為20%時(shí)，各部位對(duì)酪氨酸酶的抑制作用由強(qiáng)到弱依次為葉＞根＞莖＞花；當(dāng)醇溶物濃度為40%時(shí)，各部位對(duì)酪氨酸酶的抑制作用由強(qiáng)到弱依次為葉＞花＞莖＞根；當(dāng)醇溶物濃度≥60%，各部位對(duì)酪氨酸酶的抑制作用由強(qiáng)到弱均表現(xiàn)為葉＞花＞根＞莖；其中，在濃度相同的情況下，葉的醇溶物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用顯著高于其他部位，抑制率在6.08%～48.78%范圍內(nèi)。

圖3 烏腺金絲桃醇溶物對(duì)酪氨酸酶抑制作用

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，藥用植物烏腺金絲桃的根、莖、葉、花4個(gè)部位對(duì)大腸桿菌有一定的抑制作用，同時(shí)還具有較強(qiáng)的抗氧化活性，對(duì)酪氨酸酶也有相當(dāng)?shù)囊种谱饔茫灰?0%的醇溶物濃度為例，各部位對(duì)大腸桿菌的抑菌活性由強(qiáng)到弱依次為葉＞花＞莖＞根，抗氧化活性由強(qiáng)到弱均為葉＞花＞莖＞根，對(duì)酪氨酸酶的抑制作用由強(qiáng)到弱依次為葉＞花＞莖＞根；且隨著醇溶物濃度的升高，各種作用逐漸加強(qiáng)；同時(shí)，葉片中的作用效果明顯高于其他部位，當(dāng)濃度達(dá)100%時(shí)，葉醇溶物的抑菌圈直徑為8.93 mm，對(duì)鄰苯三酚的清除率為94.1%；對(duì)酪氨酸酶的抑制率為48.78%。這說明在4個(gè)部位中，葉片中的醇溶物比其他部位的具有更高的生物活性。由此可以認(rèn)為，烏腺金絲桃的葉可作為新型安全天然活性物質(zhì)開發(fā)的主要原料，是一種新的藥用植物資源。烏腺金絲桃提取物可以作為天然的美白活性物質(zhì)、具有抑菌活性的天然防腐劑以及具有抗氧化活性的功能，但該研究未涉及烏腺金絲桃醇溶物的成分分析，故尚不清楚其醇溶物的活性物質(zhì)成分及作用機(jī)理，需進(jìn)一步研究探索。

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