金果欖皂甙提取工藝研究

楊忠飛

（銅仁學院 生物與農林工程學院，貴州 銅仁 554300 ）

金果欖皂甙提取工藝研究

楊忠飛

（銅仁學院 生物與農林工程學院，貴州 銅仁 554300 ）

優選金果欖皂甙的最佳提取工藝，采用正交試驗設計，考察乙醇質量濃度、提取溫度、料液比、提取時間對金果欖皂甙提取率的影響。結果表明：提取最佳的工藝條件為乙醇質量濃度80%，料液比為1：12，提取時間4 h，提取溫度為60 ℃，最優條件下的皂甙得率為4.392 mg/g。

金果欖；皂甙；提取工藝

1.引言

金果欖（Radix tinosporae）為防己科植物青牛膽Tinospora sagittata （Oliv.） Gagnep或金果欖Tinospora capillipes Gagnep的塊根，具有清熱解毒，利咽，止痛的功能，常用于咽喉腫痛、癰疽疔毒、泄瀉、痢疾、脘腹疼痛［1］，臨床上用于治療咽喉炎［2］、扁桃體炎［3］、靜脈炎［4］等癥。現代藥理學研究表明金果欖有抗菌、抗腫瘤及抗癌等功效［5-7］。

金果欖在貴州的分布較廣，民間多用醋磨涂敷患處治療潰瘍面，利用程度較低。金果欖的化學成分研究較少，主要藥理活性成分為藥根堿和防己堿，還含有揮發油、萜類、甾酮類等其他成分［8］，文獻中金果欖皂甙的研究報道極少。金果欖作為民間治療咽喉炎、胃炎的特效藥，其有效活性部位的化學成分和藥理作用需進一步研究，因此，試驗采用乙醇為溶劑提取金果欖皂甙，在單因素試驗的基礎上，通過正交試驗確定金果欖皂甙提取的最佳工藝，以期為金果欖的開發利用提供理論依據。

2.材料與方法

2.1.材料與試劑

金果欖，購于銅仁市民生藥房；齊墩果酸（標準品）、香草醛、冰醋酸、甲醇、正丁醇、高氯酸等分析純均為國產市售。

2.2.儀器與設備

RE-52型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠），T6新世紀紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司），AR124CN電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）。

2.3.方法

2.3.1.材料處理流程

金果欖→恒溫干燥→粉碎→石油醚脫酯→乙醇浸提→過濾濃縮→正丁醇萃取→萃取液濃縮→甲醇溶解→待測液

2.3.2.波長的確定

準確吸取待測液l ml于具塞試管中，加濃度為5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸溶液0.8 ml，混勻、密塞、置70℃恒溫水浴加熱15 min后取出，立即用冰水冷卻5 min，再加入冰醋酸5 ml，搖勻，靜置30 min，以隨行試劑作空白，于360 nm～700 nm處測定吸光度，結果見圖1。

皂甙在強氧化性酸的作用下脫氫，氧化后再與香草醛加成［9］，香草醛-高氯酸能與皂甙形成特征性的紫紅色，是最常用的皂甙顯色法。結果顯示，對照液以高氯酸體系顯色后，在535 nm處有最大吸收，故選擇535 nm為測定波長。

圖1　皂甙的吸收曲線

圖2　齊墩果酸標準曲線圖

2.3.4.最佳提取條件的確定

精密稱取樣品 5.000g（n=3），根據金果欖中皂甙的理化性質的影響，在其它三個因素條件恒定情況下，分別以提取溫度（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）；料液比（1：6、1：8、1：10、1：12、1：14）；乙醇質量濃度（50%、60%、70%、80%、90%）；提取時間（1h、2h、3h、4h、5h）四個因素作為變量進行提取，通過正交軟件設計正交試驗（見表1）。提取液過濾、離心后減壓濃縮，按1.3.3項下方法測定吸光度，由回歸方程計算出供試樣品中皂甙的含量。

表 1 金果欖總皂甙L9（34）正交試驗因素及水平

2.3.5.金果欖皂甙得率計算

式中：x 為粗提物中皂甙含量/（mg/g）；A 為吸光度；m為金果欖粉末質量/g；b 為常數項；a 為回歸直線的系數；V 為樣品定容的體積/mL；n 為稀釋倍數。

3.結果與分析

3.1.不同因素對金果欖皂甙得率的影響

3.1.1.提取時間

準確稱取5份金果欖粉末各5.000g，以提取時間為變量（1h、2h、3h、4h、5h）料液比為 1：6，乙醇濃度80%，浸提溫度為60℃的條件下制備樣品溶液，并測定其中皂苷含量。由圖3可以看出，隨著浸提時間的增加，皂甙含量顯著增高，但在浸提5小時時皂苷提取率反而降低，說明長時間的提取可能使皂甙類成分生物活性受到破壞，同時雜質的溶出率也會相應增高，因此最佳提取時間確定為4小時。

圖3　提取時間對皂甙含量的影響

3.1.2.提取溫度

準確稱取5份金果欖粉末各5.000g，以提取溫度為變量（40℃、50℃、60℃、70℃、80℃）料液比為1：6，乙醇濃度80%，浸提時間2h的條件下制備樣品溶液，并測定其中皂苷含量。由圖 4可以看出，當浸提溫度為 50℃時，皂甙提取率最高，之后隨著溫度升高反而提取率降低。超過 50℃時，皂甙提取率反而會下降。其原因可能是其中的活性成分被破壞，因此選取50℃為最佳提取溫度結果。

圖4　提取溫度對皂甙含量的影響

3.1.3.乙醇濃度準確稱取

5份金果欖粉末各 5.000g，以乙醇濃度為變量（50%、60%、70%、80%、90%）料液比為1：6提取溫度為60℃、提取時間為2h的條件下制備樣品溶液，并測定其中皂苷含量。由圖5可以看出，隨著乙醇濃度的增大，皂甙提取率顯著增大。當乙醇濃度較小時，一些親水性物質易容溶于溶劑中，金果欖皂苷提取率并不高，而當乙醇體積分數過大時，有礙乙醇向植物細胞內滲透，影響提取效果。乙醇濃度為80%時皂甙含量最高，故本試驗選用最佳乙醇濃度為80%。

圖5　乙醇濃度對皂甙含量的影響

3.1.4.料液比

準確稱取5份金果欖粉末各5.000g，以料液比為變量（1：6、1：8、1：10、1：12、1：14），浸提溫度為60℃，乙醇濃度80%，浸提時間2h的條件下按照制備樣品溶液，并測定其中皂苷含量。由圖 6可以看出，隨著料液比的增大，皂甙含量增高后降低，當料液比為1：10時，皂甙含量最高，因此最佳的料液比為1：10。

3.2.正交試驗設計確定提取最佳條件

由表 2可知各處理的皂甙提取率，其最佳提取因素組合為A2B3C2D3，即乙醇質量濃度80%、料液比為1：12、提取時間4h、提取溫度為60℃。通過極差的數值可反映出各單因素的影響順序為提取溫度＞乙醇濃度＞提取時間＞料液比，提取溫度影響最大，料液比影響最小。

由表 3可以看出：影響金果欖皂甙提取率的最關鍵因素是乙醇濃度，其次是提取溫度，最后是料液比，顯著度為乙醇濃度＞提取溫度＞提取時間＞料液比，這與極差分析基本結果吻合。

3.3.驗證試驗

精密稱取金果欖粉末5.000g，共5份，按最佳提取工藝條件提取，進行驗證試驗，測得金果欖平均皂甙含量為4.392mg/g，均高于正交試驗組，可見該工藝穩定可行。試驗結果如圖7所示。

圖6　料液比對皂甙含量的影響

表2　正交試各處理的皂甙提取率（mg/g）

表3　正交結果的方差分析

圖7　恒溫水浴提取金果欖皂苷驗證性實驗結果

4.結論

在考查金果欖皂甙提取影響因素的正交試驗中，4個因素對提取效果影響的主次順序為提取溫度＞乙醇濃度＞提取時間＞料液比。即金果欖皂甙最佳提取條件為提取溫度為60℃，乙醇質量濃度80%，提取時間4h，料液比為1：12，此條件下金果欖總皂甙的提取率為4.392mg/g。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（第一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

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［3］侯愛風，于豪.中藥吹喉配合點刺治療小兒急性扁桃體炎105例［J］.安徽中醫臨床雜志，2000，12（5）：425-427.

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Study on Extraction Technology of Saponin from Radix Tinosporae

YANG Zhong-fei
（College of Biological & Agro-forestry Engineering，Tongren University，Tongren，Guizhou 554300，China ）

The best extraction of saponin in Radix tinosporae for ethonal concentration，ultrasound power，ratio of liquid to raw materials，extraction time to the extraction ratio of total saponin were investigated using the orthogonal design. The results showed that the optimized conditions are ethonal concentration 80%，ratio of liquid to raw materials 1：12，extraction time 4 h，extraction temperature 60 ℃，the yield of total saponin was 4.392 mg·g-1 at the optimized condition.

radix tinosporae，saponin，extraction technology

R284

A

1673-9639 （2015） 04-0007-04

（責任編輯 徐松金）（責任校對 毛志）（英文編輯 田興斌）

2015-04-03

楊忠飛（1969-），男，貴州銅仁人，副教授，碩士，研究方向：農學。