奶牛隱性乳房炎的快速診斷及用藥篩選

陳長生

（新疆塔城地區(qū)畜牧科技研究推廣中心，新疆 塔城　834700）

奶牛隱性乳房炎的快速診斷及用藥篩選

陳長生

（新疆塔城地區(qū)畜牧科技研究推廣中心，新疆 塔城834700）

從某集約化奶牛養(yǎng)殖場采樣200份，應(yīng)用SMT、NaOH、H2O2、BTB四種診斷法，對奶樣進(jìn)行檢測對比，比較各種方法的準(zhǔn)確性和各自的優(yōu)缺點(diǎn)，為臨床正確診斷乳房炎打?下基礎(chǔ)；通過藥敏試驗(yàn)，找出抑菌敏感藥物，以期達(dá)到最佳治療效果。快速診斷試驗(yàn)表明，SMT、H2O2的診斷率高；藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，氨芐西林、紅霉素、慶大霉素的抑菌效果最好，治療效果明顯，治愈率達(dá)75%。

奶牛；隱性乳房炎；快速診斷；藥敏試驗(yàn)；治療

奶牛隱性乳房炎無明顯臨床癥狀，乳汁眼觀無異常變化，但乳腺組織已發(fā)生病理變化，乳中體細(xì)胞數(shù)明顯增加，泌乳量減少，嚴(yán)重的導(dǎo)致泌乳功能喪失。因此，只有根據(jù)本場實(shí)際情況，建立一整套確實(shí)有效的診療程序，才是解決問題的關(guān)鍵。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1乳樣采自本地區(qū)某集約化奶牛養(yǎng)殖場（200份）。

1.1.2培養(yǎng)基按常規(guī)制作方法制成普通瓊脂平板。

1.1.3藥敏紙片青霉素、氨芐西林、阿莫西林、頭孢唑啉、慶大霉素、鏈霉素、羅紅霉素、卡那霉素、紅霉素、四環(huán)素、痢特靈、環(huán)丙沙星（均按標(biāo)準(zhǔn)配制）。

1.1.4主要儀器培養(yǎng)箱、潔凈工作臺、電子天平、高壓滅菌鍋、冰箱、試管、檢驗(yàn)盤、培養(yǎng)皿、酒精燈、玻璃棒、移液器、尺子等。

1.1.5治療藥物注射用氨芐西林鈉、注射用乳糖酸紅霉素、硫酸慶大霉素注射液。

1.2方法

1.2.1奶樣采集

先用溫水將乳房擦洗干凈，后用0.2%新潔爾滅擦洗乳房，再用75%的酒精消毒乳頭，擠棄頭三把奶，然后以無菌操作方法每頭奶牛取奶樣約10ml，立即注入備好的無菌瓶內(nèi)，封蓋、標(biāo)號、4℃保存、待用。

1.2.2檢驗(yàn)試劑配制

1.2.2.1SMT（上海乳房炎檢驗(yàn)法）試劑購于上海光明乳業(yè)股份有限公司。

1.2.2.2H2O2（雙氧水）試劑取30%H2O2，按1∶2.33～1∶4的比例加入中性蒸餾水，配成6%～9%的H2O2試劑［1］。

1.2.2.3NaOH（苛性鈉）試劑4%NaOH溶液［1］。

1.2.2.4BTB（溴麝香草酚藍(lán)/溴百里酚藍(lán)/溴代麝香草酚藍(lán)）試劑47.4%乙醇500ml加BTB1ml，再加5%NaOH溶液1.3～1.5ml，混合均勻成為微帶綠色的溶液［1］。

1.2.3快速診斷試驗(yàn)

1.2.3.1SMT檢驗(yàn)法將2ml被檢乳置于塑料乳房炎檢驗(yàn)盤中，再加入試劑2ml，緩慢做同心圓狀攪拌后觀察。判定標(biāo)準(zhǔn)見表1［1］。

表1　SMT檢驗(yàn)法判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3.2H2O2玻片法將載玻片置于白色襯墊物上，滴被檢乳1滴，再加H2O21滴，混合均勻，靜置2min觀察。判定標(biāo)準(zhǔn)見表2［1］。

表2　H2O2玻片法制定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3.3NaOH凝乳檢驗(yàn)法：將載玻片置于黑色襯墊物上，加被檢乳5滴，再加4%NaOH溶液2滴，用細(xì)玻棒或火柴梗迅速攪拌，使其擴(kuò)散成直徑2.5cm的圓形，并繼續(xù)攪拌觀察（此法不適合檢驗(yàn)泌乳初期及接近干乳期的乳）。判定標(biāo)準(zhǔn)見表3［1］。

表3　NaOH凝乳檢驗(yàn)法判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.3.4BTB法先取被檢乳5ml放入試管內(nèi)，再加BTB試劑1ml，觀察接觸面。判定標(biāo)準(zhǔn)見表4［1］。

表4　BTB法判定標(biāo)準(zhǔn)

1.2.4奶樣處理

隨機(jī)抽取乳房炎奶樣8份，在無菌條件下，用生理鹽水按10%的比例稀釋。

1.2.5藥敏試驗(yàn)（平板紙片法）

用微量移液器吸取10μl稀釋的乳液均勻涂于培養(yǎng)基（平皿使用前在溫箱中放置1h，然后在室溫下放置一段時間，使表面液體略干燥），再用滅菌鑷子將藥敏片貼于平皿內(nèi)，將平皿倒置于37℃的溫箱中培養(yǎng)24h，最后用尺子測量抑菌圈直徑。

1.2.6治療

隨機(jī)抽取患病牛24頭，8頭/組，分別用以下藥物治療。

經(jīng)乳腺導(dǎo)管向乳房內(nèi)注入注射用氨芐西林鈉，一次量，200mg/乳室，每天1次，連用3～5d，重癥用量加倍。經(jīng)乳腺導(dǎo)管向乳房內(nèi)注入注射用乳糖酸紅霉素，一次量，200mg/乳室，每天1次，連用3～5d。經(jīng)乳腺導(dǎo)管向乳房內(nèi)注入硫酸慶大霉素注射液，一次量，200mg/乳室，每天2次，連用2～3d。

乳房內(nèi)注入時，將乳頭管口用酒精棉球擦拭消毒，注入后乳頭輕揉幾下，有利于藥物吸收。

1.2.7治療效果評定

治療5d后，采患畜奶樣，采用SMT檢驗(yàn)法，判定治療效果。

2　結(jié)果

2.1快速診斷試驗(yàn)結(jié)果（見表5）

表5　快速診斷試驗(yàn)結(jié)果

2.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果（見表6）

表6　藥敏試驗(yàn)結(jié)果　（單位：mm）

2.3治療結(jié)果（見表7）

表7 治療結(jié)果

3　分析與討論

3.1陽性檢驗(yàn)調(diào)查結(jié)果（見表8）

表8　陽性檢驗(yàn)調(diào)查結(jié)果

通過幾種診斷方法比較，SMT、H2O2陽性率較高，NaOH、BTB較低，但是SMT診斷液相對昂貴，建議在檢測奶牛乳房炎時用H2O2法。

乳房炎是當(dāng)今世界奶牛業(yè)中最常見和造成損失最大的一種疾病。隱性型乳房炎發(fā)病率高且不易發(fā)現(xiàn)，因此及時準(zhǔn)確地做出早期診斷意義重大。所以，只有根據(jù)本場的實(shí)際情況，建立一整套確實(shí)有效的診斷程序，才是解決問題的關(guān)鍵。

3.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

8個病例中的病原菌對氨芐西林、紅霉素、慶大霉素敏感；對環(huán)丙沙星、卡那霉素中敏；對其他藥物相對不敏感。藥敏試驗(yàn)結(jié)果同殷波等［2］報道結(jié)果一致，病原菌對氨芐西林敏感。

3.3治療試驗(yàn)結(jié)果

分別使用氨芐西林、紅霉素、慶大霉素這3種藥物治療乳房炎，氨芐西林的治療效果最好，治愈率達(dá)75%。該牛場治療乳房炎有效藥物為氨芐西林。

乳房炎的治療方法很多，但臨床上長期使用抗生素，致使耐藥菌株不斷增多，細(xì)菌對常用抗生素的耐藥性愈來愈強(qiáng)。這不僅給奶牛乳房炎治療選擇用藥帶來很大困難，而且這些存在于質(zhì)粒染色體的耐藥基因是可以以結(jié)合方式在各菌種、動物以及人類之間傳播，這就意味著當(dāng)這些動物和人類發(fā)病時，很多抗菌藥物將無效。目前開發(fā)一種新的抗生素需要十年左右的時間，而一代耐藥菌的產(chǎn)生只要兩年時間，即抗生素的研制速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)趕不上耐藥菌的繁殖速度，如此下去，相當(dāng)多的由耐藥菌引起的疾病將無藥可治。因此臨床用藥時一定要注意避免耐藥菌株產(chǎn)生（如采用交替用藥和輪換用藥）。

對奶牛乳房炎應(yīng)采取綜合預(yù)防，以防為主，防治結(jié)合，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、畜舍衛(wèi)生。根據(jù)本場實(shí)際建立一整套的預(yù)防程序，加強(qiáng)技術(shù)人員的培訓(xùn)，減少乳房炎的感染幾率；對牛群要進(jìn)行定期檢查，詳細(xì)記錄檢查結(jié)果，根據(jù)實(shí)際情況及時治療。

［1］趙興緒.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)［M］.中國農(nóng)業(yè)出版社，2002.

［2］殷波，熊焰.臨床型奶牛乳房炎病原分離鑒定及藥敏試驗(yàn)［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006，（2）：61-62.

［3］蔣春茂，周新民，周廣生，等.奶牛乳房炎研究進(jìn)展［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2004，31（5）：36-37.

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［5］陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)［M］.中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

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1004-5090（2015）04-0007-03

2015-03-20）