海螵蛸質量標準研究

于 靜， 顧青青， 繆瀟瑤， 安 叡， 尤麗莎， 王新宏

（上海中醫藥大學，上海　201203）

海螵蛸質量標準研究

于 靜， 顧青青， 繆瀟瑤， 安 叡， 尤麗莎， 王新宏*

（上海中醫藥大學，上海201203）

目的 建立海螵蛸質量標準。方法 對浙江、山東、江蘇、福建、廣東、廣西、云南、海南和遼寧省產的30批海螵蛸進行了顯微鑒別并對其碳酸鈣含有量、5種重金屬［銅（Cu）、砷（As）、鎘（Cd）、鉛（Pb）和汞（Hg）］和水分、總灰分及酸不溶性灰分進行了測定。結果 碳酸鈣在0.050 1～0.160 1 g范圍內線性關系良好（r= 0.999 5）；平均加樣回收率為100.9%，RSD 0.24%（n=9）；精密度試驗RSD 0.10%（n=5）；重復性試驗RSD 0.13%（n=5）；穩定性試驗RSD 0.26%（n=5）。不同產地海螵蛸的碳酸鈣含有量范圍為83.20%～95.42%，平均值為90.09%；水分測定結果為0.92%～2.71%，平均值為1.79%；總灰分結果為83.50%～95.87%，平均值為90.66%；酸不溶性灰分結果為0.01%～0.34%，平均值為0.17%。2個樣本含銅量超過限度、9個樣本的含鎘量超過限度。結論 規定碳酸鈣含有量不得少于86.0%，可使93%的樣本被覆蓋在合格范圍內；海螵蛸水分不得高于2.5%，可使96%的樣本被覆蓋在合格范圍內。

海螵蛸；質量標準；碳酸鈣；水分

海螵蛸為烏賊科動物無針烏賊Sepiella maindroni de Rochebrune或金烏賊Sepia esculenta Hoyle的干燥骨狀內殼，具有收斂止血、澀精止帶、制酸止痛、收濕斂瘡等作用［1］。早在公元前三世紀左右，《黃帝內經》中已有烏賊骨作丸飲以鮑魚汁治血枯的記載［2］。海螵蛸主要成分為碳酸鈣，尚含多糖［3］、氨基酸［4］、殼角質、黏液質和多種微量元素。現代藥理研究表明，海螵蛸所含的碳酸鈣能中和胃酸，改變胃內容物pH，降低胃蛋白酶活性，促進潰瘍面愈合，緩解嘔酸及燒心癥狀，又可促進潰瘍面炎癥吸收，阻止出血，減輕局部疼痛。林乾良等［5］證明海螵蛸收斂作用源于富含的鈣，方爾笠等［6］發現海螵蛸具有防治胃潰瘍作用。此外，海螵蛸對婦科病［7］、眼病［8］、哮喘［9］和骨科病［10-12］等也有較好療效。在《中國藥典》2010年版一部海螵蛸項下，顯微鑒別簡單，無水分、灰分、酸不溶性灰分和重金屬測定等內容［1］，難以達到有效控制藥材質量的目的。為此，本實驗收集不同產地海螵蛸樣品，開展了相關研究，旨在為提升海螵蛸藥材質量標準提供依據。

1　材料

1.1儀器7500Ce電感耦合等離子質譜儀（美國Agilent公司）；Mars-xp微波消解儀（美國CEM公司）；Milli-Q超純水系統（美國Millipore公司）；Zentrifugen D78532 Tuffingen離心機（德國Hettich公司）；SZJX箱式電爐（上海陽光實驗儀器有限公司）；DHG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海恒科技有限公司）；電子天平（BSA224S，賽多利斯科學儀器有限公司）；鐵架臺；滴定管（50 mL）；錐形瓶（250 mL）等。

1.2試劑 乙二胺四乙酸二鈉（批號F20100223）、濃鹽酸（批號T20100426）、氫氧化鉀（批號T20090224）、氨水（批號20130606）、鈣黃綠素指示劑（批號20130424）、甲基紅（批號F20071107）均為分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司；鉻黑T（國藥集團化學試劑有限公司，批號F20110330）；氧化鋅（工作基準物質，天津市化學試劑研究所）；碳酸鈣（上海泗聯化工廠有限公司，批號130301）；硝酸為優級純（美國Merck公司），水為去離子水。銅、砷、鎘、汞和鉛單元素標準溶液均購自國家標準物質中心，質量濃度均為1.000 g/L。

1.3樣品 海螵蛸藥材共30批次，分別購自浙江、上海、安徽、河北、江蘇、北京、遼寧等地，經上海中醫藥大學吳立宏研究員鑒定，均符合《中國藥典》2010年版一部海螵蛸項下規定。樣品收集信息見表1。

表1　海螵蛸樣品收集信息Tab.1 Information on cuttlebone samp les collected

2　方法與結果

2.1粉末顯微鑒別 《中國藥典》2010年版一部的海螵蛸鑒別項為：本品粉末類白色。多數為不規則透明薄片，有的具細條紋。不規則碎塊，表面顯網狀或點狀紋理［1］。

而經過本課題組進一步對海螵蛸粉末的顯微鑒別，其顯微特征見圖1，可表述為：本品粉末類白色。背面角質層碎塊多類四邊形，表面具橫裂紋和細密縱紋交織而成的網狀紋理，亦可見只有縱紋的碎塊。中間及腹側石灰質碎塊多具分支狀蛇形管道；棱柱體碎塊基部膨大，柄呈柱狀，有的類T形；一般石灰質碎塊呈條形、類四邊形或不規則狀，具細條紋。

圖1　海螵蛸粉末特征Fig.1 Powder characteristics of cuttlebone

2.2碳酸鈣測定

2.2.1EDTA配制與標定 參照《中國藥典》2010年版二部附錄XV F乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05 mol/L）的配制與標定方法［13］進行配制與標定。

2.2.2EDTA配位滴定法 取本品細粉約0.12 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，沸水浴加熱使溶解，冷卻，加水20 mL與甲基紅指示劑1滴，滴加10%KOH溶液至溶液顯微黃色，繼續多加10 mL，并加鈣黃綠素指示劑少量，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05 mol/L）滴定至黃綠色熒光消失而顯橙色。每1 mL乙二胺四醋酸二鈉滴定液（0.05 mol/L）相當于5.004 mg碳酸鈣（Ca-CO3）。

2.2.3線性關系考察 分別稱取碳酸鈣對照品0.050 1、0.075 0、0.100 0、0.120 0、0.140 1、0.160 1 g，精密稱定，按照“2.2.2 EDTA配位滴定法”，測定各對照品消耗EDTA-2Na滴定液的體積。以碳酸鈣對照品量為橫坐標（X），消耗的滴定液體積為縱坐標（Y）繪制標準曲線。線性方程為Y=197.4X（r=0.999 5），表明碳酸鈣在0.050 1～0.160 1 g范圍內線性關系良好。

2.2.4精密度試驗 稱取碳酸鈣對照品5份，各約0.10 g，精密稱定，依照“2.2.2 EDTA配位滴定法”連續測定碳酸鈣量。結果平均含有量為99.70%，RSD為0.10%，表明該方法精密度良好，符合分析方法的要求。

2.2.5重復性試驗 稱取第3批海螵蛸樣品細粉5份，各約0.12 g，精密稱定，依照“2.2.2”項連續測定碳酸鈣。結果樣品中碳酸鈣平均含有量為92.21%，RSD為0.13%，表明該方法重復性良好，符合相關要求。

2.2.6穩定性試驗 稱取第3批海螵蛸樣品細粉5份，各約0.12 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加稀鹽酸10 mL，加熱使溶解，放置0、2、4、6、8 h后依照“2.2.2”項測定碳酸鈣。穩定性試驗RSD為0.26%，表明樣品溶解后所含成分在8 h內穩定。

2.2.7加樣回收試驗 分別稱取一定量的碳酸鈣對照品9份，精密稱定，加入到已知碳酸鈣含有量的第3批次樣品粉末中，加入量分別達到已知碳酸鈣量的80%、100%、120%，按照“2.2.2 EDTA配位滴定法”測定碳酸鈣，結果見表2。平均回收率為100.9%，RSD為0.24%，表明采用該方法測定樣品中碳酸鈣回收率高，準確性好。

表2　加樣回收率試驗結果Tab.2 Results of recovery tests

2.3樣品測定 分別稱取各批次海螵蛸細粉約0.12 g，按照“2.2.2”項測定，每批平行測定3份，計算碳酸鈣量（以干燥品計），結果見表3。

2.4檢查

2.4.1水分的測定 稱取各批次海螵蛸細粉約2 g（過五號篩），精密稱定，按照《中國藥典》（2010年版一部）附錄ⅨH水分測定法第一法［1］進行測定。每批平行測定3份，結果見表3。

2.4.2總灰分、酸不溶性灰分的測定 稱取各批次海螵蛸細粉約2 g（過五號篩），精密稱定，按《中國藥典》（2010年版一部）附錄ⅨK總灰分、酸不溶性灰分測定法［1］測定。每批平行測定3份，結果見表3。

表3　碳酸鈣、水分、總灰分和酸不溶性灰分的測定（n= 3）Tab.3 Results of the content of CaCO3，water，ash and acid-insoluble ash（n=3）

2.4.3ICP-MS法測定海螵蛸中5種重金屬

2.4.3.1ICP-MS測定工作條件 射頻功率1 250 W，采樣深度7 mm，等離子氣體積流量15.8 L/min，輔助氣體積流量1.0 L/min，載氣體積流量0.9 L/min，采樣錐孔徑1.0 mm，截取錐孔徑0.7 mm，霧化室溫度2℃，數據采集重復3次。

2.4.3.2供試品溶液的制備 精密稱取本品細粉0.5 g，置耐壓耐高溫微波消解罐中，加優級純硝酸5 mL，按各微波消解儀的要求密閉樣品消解罐，按表4消解程序消解，消解完全后，冷卻消解液低于60℃，取出消解罐，放冷，將消解液轉移至50 mL聚四氟乙烯材料的量瓶中，用去離子水少量洗滌消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入1μg/mL的標準金溶液50μL，用去離子水稀釋至刻度，搖勻，即得。同時另加優級純硝酸5 mL，置耐壓耐高溫微波消解罐中，同供試品溶液制備方法制備樣品空白溶液。

表4　微波消解程序Tab.4 M icrowave digestion procedure

2.4.3.3樣品分析 照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅨB鉛、砷、汞、鎘、銅測定法［1］對抽取的11批次不同來源的海螵蛸樣品中鉛、砷、鎘、汞、銅元素進行測定，測定結果見表5。

表5　5種重金屬檢測結果（mg·kg-1，n=3）Tab.5 Results of the content of five kinds of heavy metal（mg·kg-1，n=3）

注：鎘（以Cd計）最低檢出限為0.003 mg·kg-1汞（以Hg計）最低檢出限為0.004 mg·kg-1

3　討論

3.1本實驗對海螵蛸中碳酸鈣量進行了測定，所采用的方法操作簡便，結果準確可靠，可有效地控制海螵蛸質量。另外，貝殼類藥材所含鈣的存在形式主要為碳酸鈣，也可能含少量磷酸鈣。為研究海螵蛸中磷酸鈣是否對碳酸鈣的測定產生影響，采用了磷鉬藍法［14］測定海螵蛸中磷酸根的量，結果顯示磷酸根僅為0.003 4%（g/g）。說明海螵蛸中磷酸鈣含有量甚微，海螵蛸中鈣離子主要以碳酸鈣形式存在，通過本研究建立的方法得到碳酸鈣的含有量結果是準確合理的。

本實驗收集了不同產地的海螵蛸共30批，樣品具有一定的代表性，根據測定結果，不同產地海螵蛸的碳酸鈣含有量范圍為83.20%～95.46%，平均值為90.09%。不同產地海螵蛸的水分含有量范圍為0.92%～2.71%，平均值為1.79%。根據不同產地海螵蛸的碳酸鈣和水分測定結果，暫規定碳酸鈣含有量不得少于86.0%，可使93%的樣本被覆蓋在合格范圍內；海螵蛸水分不得高于2.5%，可使96%的樣本被覆蓋在合格范圍內。

3.2由海螵蛸總灰分所測值均大于80%，可知其屬于生理性灰分高的藥材，經分析，所有批次海螵蛸所含總灰分和碳酸鈣含量均相近。因此，碳酸鈣為海螵蛸總灰分的主要組成，這與李蘭等［2］應用X-ray的衍射分析和熱分析技術證明海螵蛸主要成分為碳酸鈣和劉永剛等［15］認為海螵蛸主要的功效歸于其豐富的碳酸鈣含量相符合。碳酸鈣對于一些植物性藥材而言屬于總灰分，但是海螵蛸主要成分為碳酸鈣，屬于其自有成分，可以直接測定碳酸鈣的量代替測定總灰分；而其酸不溶性灰分值均未超過0.34%，說明非金屬氧化物如SiO2等、酸不溶性金屬氧化物如AlO3等以及酸不溶性硫酸鹽、鹵化物等酸不溶性灰分含有量甚少，不足以影響海螵蛸質量和藥效，無須作為質量控制指標。

3.3中藥中有害重金屬元素通常指銅（Cu）、砷（As）、鎘（Cd）、鉛（Pb）和汞（Hg）等。《中國藥典》2010年版一部對黃芪、甘草、白芍、丹參、金銀花、西洋參、山楂、枸杞子等重金屬含有量規定了限度：銅（Cu）≤20.0 mg/kg，砷（As）≤2.0 mg/kg，鎘（Cd）≤0.3 mg/kg，鉛（Pb）≤5.0 mg/kg，汞（Hg）≤0.2 mg/kg。所抽取的11批次海螵蛸樣品，分別來自不同產地或收集地，取樣具有一定的廣泛性和代表性，結果5種重金屬元素含有量差別較大，但大部分樣品均檢測到銅、鎘、鉛、砷，表明這4種元素在海螵蛸樣品中普遍存在。其中銅元素含有量范圍為0.950～23.68 mg/kg，砷元素含有量范圍2.691～8.374 mg/kg，鎘元素含有量范圍為0.150～6.722mg/kg，鉛元素含有量范圍為0～0.200 mg/kg，汞元素均未檢出。經比較分析，對于銅元素，有2個樣品超過限度，其余樣品均符合國家藥典標準；而有9個樣本的鎘元素超過限度；鉛元素含有量均遠低于限度；而砷元素含有量均超過限度，須引起足夠重視。

3.4中藥質量標準的制定，應根據藥材或飲片的具體特征規定檢測項目、真實反映其質量的指標和限度，以確保其安全有效。結合本實驗結果和海螵蛸藥理文獻資料，經綜合分析，將碳酸鈣含有量作為海螵蛸中成分定量測定項，可建立符合中醫藥特點的質量標準體系。

致謝：真誠感謝中國藥科大學李會軍教授在海螵蛸粉末顯微鑒定過程中給予的幫助與支持！

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［2］ 李 蘭，吳啟南.海螵蛸的化學成分研究［J］.現代中藥研究與實踐，2009（2）：52-54.

［3］ 魏江洲，張建鵬，劉軍華，等.海螵蛸多糖CPS-1對小鼠實驗性漬瘍性結腸炎作用的初步觀察［J］.第二軍醫大學學報，2006，27（1）：28-30.

［4］ 趙中杰，江佩芬，李 昂.海螵蛸中碳酸鈣、微量元素和氨基酸的測定［J］.中國中藥雜志，1990，15（1）：41-43.

［5］ 林乾良.海洋動物藥的臨床應用［J］.海洋藥物，1984（2）：3.

［6］ 方爾笠，顧 洛，田蘇平，等.海螵蛸防治胃潰瘍作用的機理探討［J］.中國中西醫結合雜志，1994（2）：101-103.

［7］ 周俊兵.海洋藥物婦科應用的文獻整理［J］.南京中醫藥大學學報：社會科學版，2002，3（2）：87-88.

［8］ 鄭曉明.海螵蛸治療眼病一得［J］.實用中醫藥雜志，2006，22（2）：107.

［9］ 高淑琴.海螵蛸治療慢性哮喘26例［J］.中國民間療法，2007，15（5）：25.

［10］ 高 云，董福慧，鄭 軍.海螵蛸對骨愈合相關基因表達的影響［J］.中醫正骨，2004，26（7）：1-3.

［11］ 劉 藝，顧國奎，劉克泉，等.海螵蛸接骨動物實驗的組織學研究［J］.中國中醫骨傷科研究，1995，3（5）：6-8.

［12］ 李建秋，李雪鋒，周薇薇，等.海螵蛸顆粒劑干預尿毒癥血透患者鈣磷代謝的臨床研究［J］.中國中西醫結合腎病雜志，2012，13（3）：46-47.

［13］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版二部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［14］ 李素芹，張 軍，王俊鳳，等.磷鉬藍光度法測定磷酸鈣中的磷含量［J］.無機鹽工業，2008，40（3）：55-56，60.

［15］ 劉永剛，趙富花，何進來.海螵蛸的研究概況［J］.時珍國醫國藥，2005：16（1）：72-73.

Quality standard for cuttlebone

YU Jing， GU Qing-qing， MIAO Xiao-yao， AN Rui， YOU Li-sha， WANG Xin-hong*
（Shanghai Uniυersity of Traditional Chinese Medicine，Shanghai201203，China）

AIM To establish the quality standard for cuttlebone（Sepiae endoconcha）.METHODS The identification of themicroscopic characteristics and the determinations of CaCO3，water content，ash content，acidinsoluble ash and five kinds of heavymetals of cuttlebone from Zhejiang，Shandong，Jiangsu，Fujian，Guangdong，Guangxi，Yunnan，Hainan and Liaoning Province were carried out.RESULTS The methodology validation for the assay of CaCO3presented the good linearity in the range of0.050 1-0.160 1 g，and the average recovery was100.9%with the RSD 0.24%（n=9）.In addition，the RSDs of reproducibility，precision and stability experimentswere 0.13%，0.10%and 0.26%，respectively.As a result，the contentof CaCO3，water，ash and acid-insoluble ash of cuttlebone from different batches ranged from 83.20%to 95.42%，0.92%to 2.71%，83.50%to 95.87%and 0.01%to 0.34%，respectively，and their averageswere 90.09%，1.79%，90.66%and 0.17%，correspondingly.Besides，Cu content of two sampleswas out of limitation，the same to Cd contentof nine samples. CONCLUSION If the standard of CaCO3content is higher than 86.0%，it covers 28 out of30 samples.Otherwise water content is lower than 2.5%，it covers 29 out of 30 samples of cuttlebone.

cuttlebone（Sepiae endoconcha）；quality standard；CaCO3；water content

R284.1

A

1001-1528（2015）03-0583-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.027

2014-04-14

國家“863”計劃-海洋生物來源中藥材質量標準研究（2013AA093002）

于 靜（1990—），女，碩士生，主要從事中藥質量標準研究。Tel：（021）51322450，E-mail：jingyu_peaceful@163.com

王新宏（1963—），男，教授，博士生導師，研究方向：藥物分析。Tel：（021）51322183，E-mail：wangxinh6020@ 126.com