《中國藥典》2010年版一部炮姜質量控制標準的改進

韓燕全，　洪 燕，　李 翔，　李鈺馨，，　汪永忠，　夏倫祝*

（1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院，國家中醫藥管理局中藥制劑三級實驗室，安徽　合肥　230038；2.安徽中醫藥大學，安徽　合肥　230031）

《中國藥典》2010年版一部炮姜質量控制標準的改進

韓燕全1，洪 燕2，李 翔1，李鈺馨1，2，汪永忠1，夏倫祝1*

（1.安徽中醫藥大學第一附屬醫院，國家中醫藥管理局中藥制劑三級實驗室，安徽合肥230038；2.安徽中醫藥大學，安徽合肥230031）

目的 探討《中國藥典》2010年版中炮姜薄層鑒別和成分定量測定標準改進的可行性。方法 姜酮和6-姜辣素薄層鑒別以硅膠G薄層板為固定相，以石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯系統為展開劑；姜酮和6-姜辣素HPLC測定的色譜柱為Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫，檢測波長280 nm，體積流量1.0 mL/min。結果 炮姜中姜酮和6-姜辣素的薄層鑒別斑點清晰，HPLC法可同時測定姜酮和6-姜辣素。與自制炮姜飲片相比，市售14份飲片中姜酮和6-姜辣素的量差異明顯。結論 建議炮姜質量控制項下增加姜酮的定量測定，可控制以達不到含量限度的干姜僅輕微炮制即可滿足炮姜的現有質量標準。

中國藥典；炮姜；姜酮；質量標準

炮姜（Paojiang）是姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.干燥根莖經砂燙而成的炮制品。《中國藥典》2010年版炮姜項下質量控制以6-姜辣素（6-姜酚）的薄層鑒別和定量測定為指標，定量測定限度為含6-姜辣素不得少于0.30%［1］。本課題組前期研究和文獻報道均表明，干姜在炮制成炮姜后6-姜辣素量會降低15%～42%左右［2］，且在炮制過程中會有新成分姜酮的產生［3-4］。筆者認為此質量控制標準存有如下問題：只對炮制過程中會降低的6-姜辣素量作了最低限度規定，忽視了對炮制工藝規范的限定要求，如選擇質量稍次的干姜飲片，其雖達不到干姜的含量限度要求，但輕微炮制即可滿足炮姜的質量標準，如此炮制過程的重要性就被忽略了。鑒于炮姜質量控制存在的上述問題和課題組前期研究結果，本實驗增加了姜酮的薄層鑒別并改進了炮姜的薄層鑒別條件；同時，建立了HPLC同時測定姜酮和6-姜辣素的測定方法，并對14份不同產地的市售炮姜和4份實驗室自制樣品進行了測定，以期能為進一步完善《中國藥典》2010年版一部中炮姜的質量控制方法提供參考。

1　儀器與材料

1.1儀器 超高效液相色譜儀（美國Waters Acquity H-C1ass UPLC），包括四元梯度泵自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器以及Empower 2工作站；KQ3200DB型超聲儀（江蘇昆山超聲儀器有限公司）；HFB-200型高速中藥粉碎機（吉首市中州中藥機械廠）；炒藥設備（自制）。

1.2藥品與試劑 乙腈為色譜純；乙醇、磷酸等試劑均為分析純，屈臣氏公司蒸餾水；0.2μm微孔濾膜（上海陸納生物科技有限公司）。姜酮（批號122-485）、6-姜辣素（批號23513-146）對照品由上海鼎瑞化工提供，經1H-NMR、13C-NMR、MS、IR和UV等光譜檢測確認其結構。生姜購于合肥市蜀山區三里庵菜市場，經安徽中醫藥大學第一附屬醫院韓燕全博士鑒定均為姜科植物姜Zingiber officinalies Rose.的干燥根莖，晾干后得到干姜藥材；自制炮姜由課題組按照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅡD項下砂燙法要求，在砂溫度200℃、砂燙6 min左右炮制得到；14份市售炮姜藥材購自全國不同地區藥店；干姜及炮姜樣品信息見表1。

表1　干姜及炮姜樣品來源信息Tab.1 Origin for nineteen batches of dried ginger and Paojiang

2　方法與結果

2.1姜酮和6-姜辣素薄層色譜鑒別［5-6］取樣品粉末2 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理10 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取姜酮對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各6μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-乙酸乙酯（7∶3∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以香草醛硫酸試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖1。

2.2HPLC法測定姜酮和6-姜辣素

2.2.1對照品溶液的制備 分別稱取一定量姜酮、6-姜辣素對照品，置量瓶中，分別配制成0.711 mg/mL和0.701 mg/mL的對照品貯備液；分別取姜酮和對照品貯備液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mL和6-姜辣素1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL量瓶中，加乙醇定容至刻度，得5份不同質量濃度的姜酮和6-姜辣素的混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 分別精密稱取各干姜、炮姜0.5 g，置10 mL量瓶中，加90%乙醇定容至刻度，超聲（150 W，40 Hz）40 min，放冷，稱量，加乙醇補足失質量，搖勻，0.2μm濾膜濾過，取續濾液，即得。

圖1　對照品和樣品的薄層色譜圖Fig.1　TLC chrom atogram of reference substance and samp Ies

2.2.3色譜條件［7-9］Waters Symmetry C18色譜柱（4.6 mm×250 mm）；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脫（0～10 min，30%A；10～20 min，30%A；20～25 min，50%A；25～27 min，30%A；27～30 min，30%A）；檢測波長280 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫為室溫。

2.2.4系統適用性試驗 按照“2.2.3”項下色譜條件，分別取對照品混合溶液、干姜供試品溶液和炮姜供試品溶液各10μL進樣。結果姜酮和6-姜酚的色譜峰峰形對稱因子均在0.95～1.05之間，分離完全，與其他色譜峰的分離度均大于1.5；姜酮和6-姜酚的理論塔板數分別為10 646和13 811。姜酮、6-姜辣素混合對照品，干姜，市售炮姜，自制炮姜的HPLC色譜圖見圖2。

2.2.5標準曲線的制備 取“2.2.1”項下不同質量濃度混合對照品溶液各10μL，自動進樣，測定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標，姜酮、6-姜辣素質量濃度（Ⅹ）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，結果見表2。

圖2　混合對照品溶液（A）、干姜樣品（B）、市售炮姜樣品（C）和自制炮姜樣品（D）的HPLC色譜圖Fig.2　HPLC chromatograms of m ixed reference substances（A），Ganjiang sam p Ie（B），commerciaI Paojiangsam p Ie（C）and hom emade Paojiang sam p Ie（D）

表2　姜酮、6-姜辣素線性回歸方程及相關系數Tab.2 Linear regression equation and correIation coefficient of zingerone and 6-gingeroI

2.2.6穩定性試驗 取17號炮姜樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、24 h進樣并測定峰面積，結果姜酮和6-姜辣素的RSD（n=6）分別為0.8%和1.5%，結果表明該樣品穩定性良好。

2.2.7精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液10μL，自動進樣6次，測定峰面積，計算得姜酮與6-姜辣素的RSD（n=6）分別為0.5%和0.4%，表明儀器精密度良好。

2.2.8重復性試驗 取16號炮姜樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，精密吸取10μL，自動進樣6次，測定峰面積并計算，姜酮與6-姜辣素的RSD（n=6）分別為2.4%和2.2%，表明該方法重復性良好。

2.2.9加樣回收試驗 取已知含有量18號炮姜（姜酮、6-姜辣素分別為1.378、3.577mg/g）樣品6份，每份0.21g左右，精密稱定后分別加入對照品姜酮0.35mg和6-姜辣素0.76mg，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.3”項下色譜條件進行測定，每次進樣10μL計算回收率，見表3。

表3　姜酮、6-姜辣素的加樣回收試驗結果Tab.3 ResuItsofrecoverytestsforzingeroneand6-gingeroI

2.2.10樣品測定 取表1中各干、炮姜0.5g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.3”項下色譜條件進行進樣，每個樣品進樣2次，測定峰面積并計算，見表4。

表4　樣品中姜酮和6-姜辣素的測定結果Tab.4 DeterminationresuItsofzingeroneand6-gingeroIfromsampIes

結果表明：市售14份炮姜中，6-姜辣素含有量符合《中國藥典》2010年版項下規定的0.30%標準的僅為5份，而姜酮含有量差異更加明顯，提示炮姜的質量控制標準制定過程中需要考慮炮制過程的重要性，筆者建議炮姜質量控制項下增加姜酮的定量測定，可促使生產者使用符合標準的干姜生產炮姜。

3　討論

中藥炮制是體現中醫辯證用藥特點的主要手段之一，而中藥的功效與其炮制方法有極為密切的關系。因此，在制定炮制品質量標準時如能選擇可體現炮制過程變化的成分進行質量控制，將對了解炮制品是否“依法炮制”具有十分重要的意義。文獻和課題組前期研究均表明，干姜在炮制為炮姜過程中會產生新生成分——姜酮，藥理學研究表明，姜酮具有一定的抗炎、抗氧化、抗菌等活性［10-11］；課題組前期已對姜酮在炮制過程產生的條件進行了考察，表明姜酮的含有量受炮制的溫度、時間影響十分明顯。姜辣素類成分是姜中的主要活性成分，包括6-、8-、10-、12-姜酚等10余種，其中6-姜辣素（姜酚）含有量最高，本次實驗結果表明市售炮姜樣品中6-姜辣素能達到《中國藥典》2010年版0.30%標準的樣品數量不足一半，同時姜酮含有量又偏低提示以低質量的干姜藥材炮制炮姜現象存在。根據實驗結果，筆者建議在測定6-姜辣素的基礎上，增加姜酮定量測定來控制炮姜的質量，這對于控制炮姜的炮制過程具有一定的科學性。

在《中國藥典》2010版炮姜薄層板鑒別基礎上，優化了展開條件，增加了姜酮的薄層鑒別方法，炮姜中姜酮和6-姜辣素的薄層斑點清晰，可實現定性鑒別。成分定量測定實驗過程中分別考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸和甲醇-0.1%磷酸等流動相系統，結果以乙腈-0.1%磷酸作流動相較佳；實驗分別考察了Agi1ent TC-C18（4.6 mm×250 mm）、大連依利特Kromasi1 C18（4.6 mm×250 mm）、大連日普利Kromasi1 C18（4.6 mm×250 mm）和Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm）4種不同品牌的色譜柱，結果以Waters Symmetry C18色譜柱對兩種成分分離度、保留時間等方面較佳；同時優化了體積流量、進樣量等實驗因素，最終建立了HPLC法同時定量測定炮姜中姜酮和6-姜辣素的方法。實驗建立的姜酮和6-姜辣素的薄層鑒別和定量檢測方法簡單、穩定、重復性好，可為炮姜的質量控制改進和進一步開發提供依據。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：13-15.

［2］韓燕全，洪 燕，高家榮，等.基于UPLC特征指紋圖譜和指標成分定量測定研究炮姜的炮制工藝［J］.中草藥，2013，44（1）：42-46.

［3］韓燕全，洪 燕，桂 潔，等.不同產地生、干、炮姜的UPLC指紋圖譜比較研究［J］.中成藥，2013，35（2）：356-359.

［4］王維皓，李 娟，高慧敏，等.從HPLC特征圖譜分析姜在炮制過程中的化學成分變化［J］.藥物分析雜志，2009，29（8）：1248-1252.

［5］劉彩艷，宋 英，胡 清，等.三才降糖顆粒的質量控制［J］.中成藥，2014，36（4）：753-758.

［6］李德斌，黃志芳，劉云華，等.黃藥子質量標準研究［J］.中成藥，2014，36（5）：1037-1040.

［7］孟 江，盧國勇，程軒軒，等.一測多評法同時測定干姜中4種姜酚類成分的含量［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（7）：77-80.

［8］韓燕全，左 冬，夏倫祝，等.不同干燥方法和溫度對干姜中6、8、10姜酚含量的影響［J］.中藥材，2011，34（10）：1152-1154.

［9］彭穩穩，李俊松，李 文，等.干姜與附子配伍前后對干姜中4種姜辣素成分含量的影響［J］.中國中藥雜志，2012，37（14）：2076-2078.

［10］Hsiang C Y，Lo H Y，Huang H C，et al.Ginger extract and zingerone ame1iorated trinitrobenzene su1phonic acid-induced co-1itis in mice viamodu1ation of nuc1ear factor-κB activity and inter1eukin-1βsigna11ing pathway［J］.Food chem，2013，136（1）：170-177.

［11］Manjunatha JR，Bettadaiah B K，Negi P S，etal.Synthesis of quino1ine derivatives of tetrahydrocurcumin and zingerone and eva1uation of their antioxidant and anti-bacteria1attributes［J］. Food chem，2013，136（2）：650-658.

Im provement in quaIity controI of Zingiberis Rhizoma praeparatum in Chinese Pharmacopoeia（2010 Edition）

HAN Yan-quan1， HONG Yan2， LIXiang1， LIYu-xin1，2， WANG Yong-zhong1， XIA Lun-zhu1*
（1.The First Affiliated Hospital，Anhui University of Chinese Medicine，Grade3 Laboratory of TCM Preparation，State Administration of AnhuiUniversity of Chinese Medicine，Hefei230031，China 2.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei230038，China）

AIM To exp1ore the feasibi1ity of improving TLC identification and content determination of Paojiang（Zingiberis Rhizoma praeparatum）in Chinese Pharmacopoeia（2010 Edition）.METHODS TLCmethod for zingerone and 6-gingero1adopted si1ica ge1G p1ate as the stationary phase，petro1eum ether-ch1oroform-ethy1acetate system as deve1oper，and their HPLCmethod emp1oyed Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）as co1umn，acetonitri1e-0.1%phosphoric acid asmobi1e phasewith 1.0mL/min vo1umn speed at280 nm detection wave1ength in a gradient e1utionmode.RESULTS The TLC spots of zingerone and 6-gingero1were c1ear，HPLC cou1d simu1taneous1y determine the above measured constituents.As compared with homemade，the contents of zingerone and 6-gingero1 from fourteen commercia1Paojiang made marked1y difference.CONCLUSION It is suggested that the increase in the determination of zingerone cou1d avoid using the poor dried ginger by simp1e processing to satisfy the current qua1ity contro1of Paojiang.

Chinese Pharmacopoeia；Paojiang（Zingiberis Rhizoma praeparatum）；zingerone；qua1ity contro1 standardization

R283

A

1001-1528（2015）01-0160-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.034

2014-05-29

國家自然科學基金項目（81102811）；安徽省自然科學基金項目（10040606Q40）；國家中醫藥重點學科臨床中藥學建設項目（國中醫藥人教發［2012］32號）

韓燕全，男，副主任中藥師，研究方向：中藥炮制與質量控制。E-mai1：hyquan2003@163.com

夏倫祝，主任藥師，教授，碩士生導師，研究方向：中藥制劑和臨床藥學。E-mai1：xia1unzhu@sohu.com