無菌檢查試驗的先天缺陷及應對策略的思考

張錚

【摘 要】本文對無菌檢查試驗的存在的問題進行介紹并提出應對策略。

【關鍵詞】無菌檢查；試驗；策略

無菌檢查法系指檢查藥品、敷料、縫合線、無菌器具及適用于藥典要求無菌檢查的其他品種是否無菌的一種方法[1-2]。無菌 （asepsis） 物體中無活的微生物存在，稱為無菌。我國開展藥品無菌檢查和微生物限度檢查已有數十年的歷史。新中國第一部藥典（1953年版）收載了無菌檢查法，以后每部進行了不斷的修訂和完善，從樣品的取樣量到培養時間的變化都更加的科學，合理[3-4]。本文對無菌檢查試驗的存在的問題進行介紹并提出應對策略。

1.無菌檢查試驗的先天缺陷

1.1采樣

由于沒有從統計學的角度考慮采樣，使無菌檢查試驗檢測污染物的能力受到限制，出現錯誤結果的可能性很大。有學者從統計學角度分析發現污染率越低對污染物漏檢的可能性越大。由于不可能對一批成品的每一包裝單位進行檢測，所以藥品生產者必須遵守GMP進行生產。無菌生產工藝的驗證、良好廠房設計、員工的培訓，才能取得高水平的無菌保障[5]。

1.2培養條件

研究表明，藥典規定的微生物培養條件并不是許多細菌和真菌的最適生長條件[6]。細菌生長在二十五攝氏度到四十攝氏度之間，真菌生長在二十五攝氏度到三十攝氏度之間，而藥典規定在二十攝氏度到二十五攝氏度下培養。 藥典對溫度規定的目的是檢測環境中的污染菌。美國藥典無菌試驗專家委員會推薦25～30℃為細菌、酵母菌和霉菌的培養溫度[6]。用不同的培養基檢查不同的細菌、酵母菌和霉菌，結果發現， 二十六攝氏度培養真菌和酵母菌10天后，胰酪胨大豆胨肉湯培養基的效率不及蛋白胨肝消化肉湯等培養基[6]。硫乙醇酸鹽流體培養基也不適用于苛求厭氧菌的恢復培養[7]。胰酪胨大豆胨肉湯培養基不適用于對苛求微生物的培養。

2.西方國家相應的對策

2.1美國

2012年修訂的美國聯邦法規21CFR610.12，規定了一個不同于藥典描述的無菌檢查方法。FDA修訂該法規的目的是為了確保生物制品的安全性。21CFR61O.12取消了微生物、培養時間、培養溫度、培養基、取樣量和采樣計劃等內容并允許使用非培養的檢測方法。

2.2歐洲

歐洲藥典的非強制章節“5.1.9無菌試驗使用指南”指出，無菌試驗合格結果的保證水平取決于批次的均一性、生產條件、采樣方法等的有效性；對于最終滅菌產品提供滅菌過程的證據比無菌試驗更重要。2007年新載入歐洲藥典的“細胞產品的微生物控制”中指的方法可代替無菌檢查。

2.3澳大利亞

在2006年發布的《治療產品無菌檢查指南》中提出了控制無菌檢查試驗的附加試驗一停滯試驗。停滯試驗目的是要證明使用的培養基在整個培養期是否具有支持生長的能力。《治療產品無菌檢查指南》的原理部分指出：統計學考慮也是無菌檢驗成功的重要一環；藥典無沒有對所使用的培養基作具體要求，只是從原則上菌檢查方法不利于對低水平污染的檢出。

3.對規范我國藥品標準中無菌檢查試驗的思考

3.1應對無菌檢查試驗做出充分的解釋

我國少數藥品生產企業的部分從業人員對藥品無菌檢查試驗的原理理解不深，導致無菌檢查試驗方法不規范。藥品監督管理部門對生產企業加強監管的同時，應制訂與歐洲藥典“無菌試驗使用指南”相類似的文件，促進我國藥品質量的提高。我國藥典沒有對無菌檢查試驗的原理、所起作用等做詳細的解釋說明。這樣導致了部分企業重無菌檢查結果，輕質量管理。我國藥典或相關法規應以適當方式提示至少注意以下幾點：對于最終滅菌的產品提供滅菌過程的證據比無菌檢查試驗更重要；沒有絕對的無菌保證，通過驗證很重要；即使整個批次均一，能檢測出低水平污染的可能性也是非常小的。

3.2無菌檢查方法的制訂要考慮生物制品的特殊性

美國、歐洲、澳大利亞的藥典或其它法規中，對生物制品的無菌檢查方法都另有專門的規定[8-10]。生物制品因為其原料、生產過程、內含成份、具有生物活性等特點，使用單一的無菌檢查方法會存在風險[11]。我國也應對生物制品的無菌檢查做專門規定，特別在使用培養基和相應培養條件等方面。

3.3抽樣方案

國藥典規定了不同藥物產品的原液、半成品、成品最少抽驗數量，沒有對抽樣方式做具體規定。我國應參考歐洲、美國、澳大利亞的相關規定并結合自身特點，增加對抽樣方式的規定。

3.4對培養基的規定

中國藥典無菌檢查法規定使用2個培養基：硫乙醇酸鹽流體培養基和改良馬丁培養基，用兩個培養基完全覆蓋所有需要無菌檢查的藥品并不現實。歐洲藥典“細胞產品微生物控制”沒有指定培養基，但規定了更嚴格的培養基促生長性能檢查法和基于實踐中最可能污染微生物的方法驗證。中國應對于某些特殊藥品應允許使用經驗證的替代培養基。

3.5微生物檢驗的新技術

應用微生物檢驗的新技術如生物發光技術、電化學技術、比濁法、固相細胞計數法、流式細胞計數法、脂肪酸測定技術、核酸擴增技術、基因指紋分析技術等。微生物檢驗的新技術與傳統的檢驗方法比較，具有檢驗簡便，速度快的特點，有實時或近實時監控的潛力，能夠對生產過程的關鍵工藝環節作出及時的微生物質量評價，因此在醫藥行業完全有必要也有可能使用微生物檢驗的替代方法。采用非藥典規定的替代方法進行微生物檢驗時，應進行替代方法的驗證，確認其應用效果優于或等同于藥典的方法。 [科]

【參考文獻】

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[10]Australian Government，Departm ent of Health and Ageing，Therapeutic Goods Administration （TGA）.TGA Guide—lines for Sterility Testing of Therapeutic Goods[BE/（）I ].[2014—2—20]http：//www.tga.gov.au/docs/html/sterilit.htm.

[11]Richard MJ，Sabatini C，Ardiot S，et a1.Ten Years of External Quality Control for Cellular Therapy Products in France.In： Progress in M olecular and EnvironmentalBioengineering—-—-FromAnalysisandModelingtoTechnologyApplica

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