依達拉奉注射液中有關物質檢查方法的研究

孫　瑩*　姜　波　林大專　孫全樂

（1 長春醫學高等專科學校，吉林 長春 130031；2 長春海悅藥業有限公司，吉林 長春 130021）

依達拉奉注射液中有關物質檢查方法的研究

孫瑩1*姜波2林大專1孫全樂1

（1 長春醫學高等專科學校，吉林 長春 130031；2 長春海悅藥業有限公司，吉林 長春 130021）

目的 建立依達拉奉注射液中有關物質的控制方法。方法 采用高效液相色譜法，通過篩選色譜條件確定有關物質方法i和有關物質方法ii。結果 在篩選出的色譜條件下雜質能有效檢出并與依達拉奉峰完全分離。結論 該方法可作為有效控制依達拉奉注射液中雜質的方法。

依達拉奉注射液；高效液相色譜法；有關物質

依達拉奉注射液是日本三菱東京制藥株式會社開發的中樞神經系統用藥，于2001年在日本首次上市。國內外文獻相繼報道其有關物質的研究［1-3］，主要采用HPLC法控制。但國內質量標準中測定有關物質的色譜條件并不完善，不能有效檢出本品的有關物質。本項研究依據日本最新公布的依達拉奉注射液質量標準，結合本品合成工藝，對可能產生的雜質及制劑的降解產物進行分析，篩選適合的色譜條件，為建立真正能夠有效控制產品質量的標準提供試驗依據。

1　儀器與試藥

1.1主要儀器：島津LC-15C，二極管陣列檢測器（檢測波長240 nm）；有關物質（i），C18柱（島津Wondasil，長250 mm，內徑4.6 mm，填料粒徑5μm）；有關物質（ii），C18柱（島津Wondasil，長150 mm，內徑4.6 mm，填料粒徑5μm）；微電腦光照培養箱（上海博迅實業有限公司，SPR-250B-G）；數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，KQ-300DA）。

1.2主要試藥：甲醇（Fisher Scientific，色譜級）；冰醋酸（西隴化工股份有限公司，AR）；氨水（北京化工廠，AR）；鹽酸（西隴化工股份有限公司，AR）；過氧化氫（北京化工廠，AR）；氫氧化鈉（北京化工廠，AR）。

2　方法與結果

2.1色譜條件篩選：文獻報道本品氧化破壞雜質較多［3］，故用氧化破壞后的同一份樣品進行有關物質檢查，色譜條件（表1）的篩選，由圖譜可知，國內標準Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ有關物質峰形較差，有關物質檢出較少，國內標準Ⅳ依達拉奉主峰前面雜質分離較差，日本標準中有關物質峰形較好，與主峰分離度也符合要求，所以選擇日本方法。

2.2方法：按照日本標準，進行有關物質的檢查。取某藥廠依達拉奉注射液（批號為20120301）作為供試液；精密量取1mL置50mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1mL置20mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。精密量取供試品溶液和對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，結果有關物質i單個雜質為0.02%；有關物質ii相對保留時間0.3雜質為0.03%；相對保留時間0.4雜質為0.01%；其他單個雜質最大為0.01%，均符合規定要求。

2.3方法學驗證

2.3.1專屬性

2.3.1.1未破壞樣品：取供試品溶液、對照溶液、陰性溶液、溶劑，按有關物質方法測定，結果見表2。

2.3.1.2光照破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，置強烈日光下照射16 h，結果見表3。

2.3.1.3高溫破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，置98 ℃水浴中加熱6 h，取出，放冷，再用流動相定容至刻度，結果見表4。

2.3.1.4酸破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加1mol/L鹽酸1.5mL，置98 ℃水浴中加熱5 h，取出，放冷，再加1mol/L氫氧化鈉1.5mL中和，加流動相稀釋至刻度，結果見表5。

2.3.1.5堿破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加1mol/L氫氧化鈉1.5mL，置98 ℃水浴中加熱5 h，取出，放冷，再加1mol/L鹽酸1.5mL中和，加流動相稀釋至刻度，結果見表6。

2.3.1.6氧化破壞樣品：取供試品1mL，置5mL量瓶中，加1%過氧化氫1mL，置60 ℃水浴中加熱1.5 h，取出，放冷，用流動相稀釋至刻度，結果見表7。

表1　國內外不同標準有關物質檢查色譜條件

表2　未破壞樣品測定結果

表3　光照破壞樣品測定結果

表4　高溫破壞樣品測定結果

表5　酸破壞樣品測定結果

表6　堿破壞樣品測定結果

表7　氧化破壞樣品測定結果

2.3.2檢測限：取供試品用流動相逐步稀釋，精密量取10μL注入液相色譜儀，樣品的主峰高為基線噪音的3倍，計算檢測限，有關物質方法i檢測限為0.04 ng，有關物質方法ii檢測限為0.05 ng。

2.4耐用性

2.4.1溶液穩定性

2.4.1.1有關物質方法i溶液穩定性：取供試品溶液和對照溶液，在10 h內于不同的時間進樣，考察溶液穩定性，結果對照溶液峰面積 RSD為0.12%；雜質峰面積RSD為1.0%；主峰面積RSD為0.22%，雜質數1個。表明有關物質方法i穩定性良好。

2.4.1.2有關物質方法ii溶液穩定性：取供試品溶液和對照溶液，在12 h內于不同的時間進樣，考察溶液穩定性，結果對照溶液峰面積 RSD為1.1%；雜質峰面積RSD為1.7%；主峰面積RSD為0.12%，雜質數5個。表明有關物質方法ii穩定性良好。

2.4.2色譜條件變化對有關物質的影響：按有關物質測定方法，每個條件各測試1次，考察不同色譜柱、流速變化、柱溫、pH值等的變化，對測定結果的影響，有關物質方法i色譜條件發生變化時，雜質數都是1個，總雜質量都為0.02%，對測定結果沒有影響。有關物質方法ii，當pH值變化時，對測定結果有影響，即pH=5.5時，雜質數5個，總雜質量為0.05%，pH=5.3時，雜質數4個，總雜質量為0.09%；pH=5.7時，雜質數5個，總雜質量為0.07%。不同色譜柱、流速變化、柱溫對測定結果均沒有影響，即雜質數都是5個，總雜質量都為0.06%。

3　結 論

上述試驗結果表明依達拉奉注射液主要降解途徑是高溫與氧化，為了防止依達拉奉氧化，在制劑中加入抗氧劑并全程充氮；通過破壞試驗并參考日本依達拉峰注射液質量標準，確定有關物質方法i色譜圖運行時間為主成分峰保留時間的7倍，有關物質方法ii調整依達拉奉保留時間約11min，色譜圖運行時間為主成分峰保留時間的2.5倍；破壞出的雜質基本上在240 nm附近有最大吸收，所以檢測波長選擇240 nm；依達拉奉與雜質能得到較好的分離，并能檢測出破壞試驗中產生的降解產物，說明方法專屬性強，可用于依達拉奉注射液的有關物質的檢查。

4　討 論

4.1有關物質方法i氧化破壞時雜質較多，當流速為1.0mL/min，tR=6min時，有關物質分離的不是很好，當流速為0.8mL/min，tR=7min時，氧化破壞有關物質分離的較好；有關物質方法ii當流速為1.5mL/min，tR=9min時，堿破壞時有關物質分離的不是很好，當調整流速使tR=11min時，堿破壞時有關物質分離的很好。

4.2依達拉奉注射液在光照條件下比較穩定，5000lx光照7 d，有兩個新的雜質產生，新產生雜質的量為0.01%，在強烈日光下照射16 h，有兩個新的雜質產生，新產生雜質的量為0.02%，均比較小。

4.3依達拉奉注射液通過高溫破壞，產生新的雜質，最大雜質達到4.10%。

4.4依達拉奉注射液在酸破壞條件相對穩定，通過酸破壞，雖有新的雜質產生，但雜質均較小。

［1］ 古鐵波，陳貴平.高效液相色譜法測定依達拉奉注射液中依達拉奉及有關物質的含量［J］.中國當代醫藥，2013，20（21）：61-65.

［2］ 湯海燕，朱正怡.高效液相色譜法測定依達拉奉注射液的含量及其有關物質［J］.海峽醫藥，2010，22（5）：77-78.

［3］ 趙珍珍，黨小佛.RP-HPLC法測定依達拉奉的含量和有關物質［J］沈陽藥科大學學報，2012，29（5）：359-363.

R927.2

B

1671-8194（2015）10-0066-02

吉林省教育廳“十二五”科學技術研究資助項目（項目編號：545）