非小細胞癌組織和血清中表皮生長因子受體突變一致性

盧萬朋

（遼寧省大連市大連大學附屬中山醫院，遼寧 大連 116001）

非小細胞癌組織和血清中表皮生長因子受體突變一致性

盧萬朋

（遼寧省大連市大連大學附屬中山醫院，遼寧 大連 116001）

目的 對非小細胞癌（NSCLC）組織和血清中表皮生長因子受體（EGFR）突變的一致性進行分析研究。方法 抽取90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標本，采用直接測序法檢測EGFR基因中第19和21外顯子的突變狀態，分析腫瘤組織和EGFR中基因突變的一致性。結論 腫瘤組織總突變檢測率為32.2%，血清總突變檢出率5.6%。直接測序法檢測血清EGFR活化性突變的特異度為100%，靈敏度為17.2%，血清和腫瘤組織EGFR活化性突變的一致率為5.6%。結論 血清的突變檢出率明顯低于腫瘤組織，腫瘤組織可作為評價NSCLC患者EGFR基因突變狀態的依據。

非小細胞癌；腫瘤組織；表皮生長因子；基因突變

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，近年來，其發生率和病死率均明顯上升，多項研究表明［1-2］，NSCLC患者表皮生長因子受體突變均發生在酪氨酸激酶域ATP結合域附近（第18～21外顯子），約90%EGFR基因突變集中在第19和2l外顯子，第18和20外顯子為耐藥性突變，第19和21外顯子為活化性突變，但部分晚期肺癌患者因腫瘤部位取材困難很難獲得足量腫瘤組織用于基因檢測。由于EGFR突變基因具有腫瘤體細胞遺傳的特性，因而在血液游離DNA中可能會檢測到相同的遺傳改變。各國學者采用多種方法進行研究，至今為止結論尚未統一，本組研究抽取90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標本，對NSCLC組織和EGFR突變的一致性進行分析研究，現將結果總結報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料：隨機抽取2010年5月至2014年5月90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標本，所有患者均經臨床病理組織檢查確診，未接受過靶向治療及輔助化療，患者病理分型參考2004年WHO肺癌組織分類［2］，臨床分期參考IASLC肺癌TNM分期標準，取材均符合倫理要求。

1.2方法：血清標本均在手術前抽取全血，腫瘤組織經手術切除后浸泡于液氮中，將腫瘤標本和相匹配的血清標本保存于一80 ℃冰箱中待測。選用DNAmini Kit 51304試劑盒（Qiagen），直接測序所用引物和Mix（大連寶生物工程有限公司）。ABI 3730XL，DxS EGFR29 Mutation Kit，Lightcycler 480，PCR 8聯反應條輔助器。所有標本均經DNA提取試劑盒提取，步驟按試劑盒說明書進行。將所提取的DNA采用超微量分光光度計檢測，保存于一20 ℃冰箱中。PCR擴增和直接測序：PCR總反應體系為50μL，Mix 25μL，上游引物、下游引物均2μL，去離子水19μL，DNA模板2μL，擴增條件：93 ℃預變性2min，94 ℃30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃中30 s，72 ℃ 2min，共35個循環。PCR反應設置內參照GAPDH，內參照擴增條件：93 ℃預變性3min，94 ℃30 s，59 ℃ 30 s，72 ℃中30 s，72 ℃ 3min，共35個循環。去PCR產物5μL，采用3%瓊脂糖凝膠進行電泳，Gel-Pro Analyzer凝膠圖像分析分析目的基因。對顯示目的基因的PCR產物進行直接測序。

1.3統計學處理：所有數據均采用SPSS17.0軟件進行統計分析，計數資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

腫瘤組織總共檢出29例EGFR基因突變，總突變檢測率為32.2%（29/90），其中19-del缺失16例（55.2%），L858R點突變13例（44.8%）；血清共檢測出5例EGFR突變，均為L858R點突變，突變檢出率5.6%（5/90）。

直接測序法檢測血清EGFR活化性突變的特異度為100%（61/61），靈敏度為17.2%（5/29），陽性預測價值100%（5/5），陰性預測價值71.8%（61/85）。血清和腫瘤組織EGFR活化性突變的一致率為5.6%（5/90），具體見表1。

表1　血清及腫瘤組織EGFR活化性突變一致率

3　討 論

近年來，多種靶向藥物被廣泛應用于NSCLC的臨床治療中。據相關研究報道，對確診的EGFR基因第19或21外顯子突變的NSCM患者行一線藥物化療和厄洛替尼治療，患者平均進展生存期分別為4.6、13.1個月，提示對NSCLC患者進行EGFR基因第19、21外顯子突變狀態的檢測對指導臨床治療具有重要意義。本組研究抽取90例NSCLC患者的腫瘤組織及匹配的血清標本，采用直接測序法檢測EGFR基因中第19、21外顯子的突變狀態，結果顯示，腫瘤組織總突變檢測率為32.2%，血清總突變檢出率5.6%，血清的突變檢出率明顯低于腫瘤組織，與張靜等研究結論吻合［3］，血清和腫瘤組織EGFR活化性突變的一致率為5.6%，此結果與鄒敏等人研究報道一致［4］，此外，且靈敏度及特異度也低于腫瘤組織，說明在評價NSCLC患者EGFR基因突變狀態方面，腫瘤組織檢測更具優勢。

［1］ 張志紅，倪琛琛，于敏，等.105例非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變分析［J］.安徽醫科大學學報，2011，46（8）：740-742.

［2］ 宋國紅，邸立軍，任軍，等.中國非小細胞肺癌患者表皮生長因子受體基因突變的研究［J］.現代腫瘤醫學，2008，16（4）：553-556.

［3］ 張靜，梁智勇，曾碹，等.應用蝎形探針擴增組織突變系統檢測非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理改變的關系［J］.中華病理學雜志，2008，37（5）：294-299.

［4］ 鄒敏，周韶璋.非小細胞肺癌患者腫瘤組織和血清表皮生長因子受體第19、21外顯子的檢測及其臨床特征的分析［J］.中國病理生理雜志，2013，29（5）：839-842.

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1671-8194（2015）10-0213-01