高效液相色譜法測(cè)定半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量

付靜，朱月月，聶詩明

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065）

高效液相色譜法測(cè)定半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量

付靜，朱月月，聶詩明

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖北武漢430065）

目的建立測(cè)定半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法采用Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），以pH=3.0的0.02mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（含0.4%的三乙胺）-甲醇（90∶10）為流動(dòng)相，流速為1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量濃度分別在1.934 4～92.85μg/mL和2.481 3～119.10μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，線性回歸方程分別為Y=0.888 8X-0.067 2，r=1.000 0（n=6）和Y=0.691 1X-0.139 6，r=1.000 0（n=6），回收率均大于95.00%（n=6）。結(jié)論該方法分離度、線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率均符合要求，適合于半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿的含量測(cè)定。

半夏糖漿；麻黃堿；偽麻黃堿；高效液相色譜法

半夏糖漿由生半夏、麻黃、紫菀、桔梗、枇杷葉、遠(yuǎn)志、陳皮、甘草、薄荷油組方，具有止咳化痰的功效，臨床常用于治療咳嗽、多痰及支氣管炎［1］。為更好地控制半夏糖漿的質(zhì)量，本研究中以該方主藥生半夏、麻黃為含量檢測(cè)對(duì)象。由于生半夏和麻黃中均含有麻黃堿和偽麻黃堿，兩組分為擬腎上腺素藥，對(duì)心血管、胃腸均有作用［2］，故本研究中建立了半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿含量的測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

P680型高效液相色譜儀（戴安公司）；UVD-170型紫外檢測(cè)器；十萬分之一電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；SK7200HP型超聲清洗機(jī)。半夏糖漿（湖北端正藥業(yè)有限公司，批號(hào)為121201，121202，121203）；鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為171241-201007，供含量測(cè)定用）；鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為171241-201009，供含量測(cè)定用）；雙蒸水（實(shí)驗(yàn)室自制），甲醇（美國(guó)天地公司）、乙醇及甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品3.095mg，精密稱定，置10mL容量瓶，用流動(dòng)相定容，得鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液；精密稱取鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品3.970mg，置10mL容量瓶，用流動(dòng)相定容，得鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品貯備液；精密吸取半夏糖漿5 mL，加水5 mL稀釋，用氨水調(diào)pH至11以上，用無水乙醚80 mL萃取4次，每次20 mL，揮干乙醚，殘留物用流動(dòng)相溶解并定容至10 mL，用0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；按處方及工藝制成不含生半夏、麻黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：pH=3.0的0.02 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液（含0.4%的三乙胺）-甲醇（90∶10）；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；進(jìn)樣量：20μL。在此色譜條件下，理論板數(shù)按麻黃堿峰計(jì)不少于6 000，色譜圖見圖1。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：將鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品貯備液分別稀釋為系列質(zhì)量濃度，精密吸取上述不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂方法測(cè)定色譜峰面積，以溶液的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸得鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回歸方程分別為Y=0.888 8X-0.067 2（r=1.000 0）和Y=0.691 1X-0.139 6（r=1.000 0）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的質(zhì)量濃度分別在1.934 4～92.85μg/mL和2.481 3～119.10μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液，照擬訂色譜條件依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.84%和1.06%（n=5），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品5份，依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.69%和1.18%（n=5），表明該方法的重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于1，4，8，12，24 h時(shí)測(cè)定峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為0.74%和1.82%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量的同批次半夏糖漿6份，分別加入鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿，每個(gè)質(zhì)量濃度各2份，制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量。3批樣品每1mL以鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿計(jì)的總量為33～51μg，結(jié)果見表2。

3 討論

測(cè)定麻黃堿的方法有分光光度法［3］、有薄層掃描法［4］、有高效液相法［5-6］，但這些方法一般都是測(cè)定鹽酸麻黃堿的單種成分，很少有同時(shí)測(cè)定的。麻黃堿和偽麻黃堿為異構(gòu)體，色譜分離通常比較困難。2010年版《中國(guó)藥典（一部）》采用的是極性乙醚連接苯基鍵合硅膠柱，專門用于測(cè)定麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿的含量［7］。本研究中以通用的C18柱，參考文獻(xiàn)［8-10］，使用乙腈-水相關(guān)色譜條件，以pH=3.0的0.02mol/L磷酸二氫鈉緩沖液-甲醇（90∶10）為流動(dòng)相，獲得了良好的分離效果。建立的方法色譜分離度、線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性、回收率均良好，適用于半夏糖漿中麻黃堿和偽麻黃堿的含量測(cè)定。

表1 鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（μg/mL）

［1］WS3-B-1527-93.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第八冊(cè)）［S］.

［2］鄭萍，戴貴東，李漢青.麻黃堿及偽麻黃堿藥理作用研究進(jìn)展［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2002，24（2）：126-127.

［3］宣信長(zhǎng).紫外分光光度法測(cè)定麻地滴鼻液的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2001，5（2）：65.

［4］黃洪.麻杏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定［J］.中國(guó)藥業(yè)，2001，10（10）：96.

［5］趙成.HPLC法測(cè)定散痰寧糖漿中鹽酸麻黃堿的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2004，8（5）：361.

［6］林月英，李紅梅，竇國(guó)義.高效液相色譜法測(cè)定小兒咳喘靈沖劑中麻黃堿的含量［J］.天津藥學(xué)，2004，16（4）：18.

［7］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：190-191.

［8］楊文遠(yuǎn)，楊美君.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定麻黃中麻黃堿和偽麻黃堿［J］.寧夏大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1998，19（3）：253-254.

［9］成紅娟，曲婷麗，劉銳玲，等.HPLC同時(shí)測(cè)定止嗽立效口服液中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量［J］.中成藥，2009，31（2）：240-242.

［10］劉惠軍，陳睿，王娟.HPLC測(cè)定宣肺清熱合劑中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量［J］.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2010，28（3）：199-200.

Determination of Pseudoephedrine in Pinellia Syrup by HPLC

Fu Jing，Zhu Yueyue，Nie Shiming
（College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan，Hubei，China 430065）

Objective To establish a method for determining ephedrine and pseudoephedrine in pinellia syrup by HPLC.Methods Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）column was used.0.02 mo/L sodium dihydrogen phosphate was used as buffer（0.4%Triethylamine，pH=3.0）-methanol（10∶90）was used as mobile phase.The flow rate was 1 mL/min.The detection wavelength was at 210 nm.Results The liner range of ephderine and pseudoephedrine were 1.934 4-92.85μg/mL and 2.481 3-119.10μg/mL.The equations of linear regression were Y=0.888 8X-0.067 2，r=1.000 0（n=6）and Y=0.691 1X-0.139 6，r=1.000 0（n=6）.The average recovery of ephedrine and pseudoephedrine were all＞95.00%（n=6）.Conclusion This method is simple，can separate the contents completely，and can be used as content determination method of ephedrine and pseudoephedrine in pinellia syrup.

pinellia syrup；ephderine；pseudoephderine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0114-02

付靜（1991-），女，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿?、新技術(shù)，（電子信箱）565403063@qq.com；聶詩明，男，教授，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿?、新劑型，本文通訊作者，（電子信箱?63nsm@163.com。

2014-10-27；

2015-05-05）