衍生化GC法測定乙酰氧基丙酰氯中R型含量

蘭紅梅　王 偉　陳小君　懷哲明

（浙江海洲制藥有限公司，浙江 臺州 318000）

衍生化GC法測定乙酰氧基丙酰氯中R型含量

蘭紅梅王 偉陳小君懷哲明

（浙江海洲制藥有限公司，浙江 臺州 318000）

目的 R-乙酰氧基乙酰氯和S-乙酰氧基乙酰氯與L-α-苯甲基甲胺衍生化，形成非對映異構(gòu)體產(chǎn)物，在GC中達(dá)到分離。方法 衍生產(chǎn)物在DB-FFAP 30 m×0.53 mm×1.0 μm色譜柱中分離，測定R型對映體含量。結(jié)果 在選定色譜條件下，回收率為95.8%～99.8%；精密度為3.9%；R型對映體的LOQ為0.017 ng，LOD為0.005 ng；在固定S型質(zhì)量下，R型和S型峰面積比值與R型對映體的量呈良好線性關(guān)系，R=0.9995。結(jié)論 該法是測定R-乙酰氧基乙酰氯中S-乙酰氧基乙酰氯的含量的一種靈敏、準(zhǔn)確、可靠地分析方法。

衍生化GC法；R-乙酰氧基乙酰氯；含量

S-乙酰氧基丙酰氯（CAS No. 36394-75-9）是一種醫(yī)藥中間體，可由三光氣法合成［1］，用于合成對比劑碘帕醇等原料藥，分子式C5H7ClO3，無色透明發(fā)煙液體，有強(qiáng)烈的刺激性氣味，遇水分和醇極易分解。普通色譜法不能將R-型乙酰氧基丙酰氯和S-型乙酰氧基丙酰氯分離，而直接進(jìn)樣法又會對色譜系統(tǒng)易造成嚴(yán)重腐蝕性，雖然氣相色譜法對酰鹵類物質(zhì)分析已有報(bào)道［2-3］，也有利用手性酰化試劑對胺及氨基酸拆分［4］，但對于手性拆分后定量測定乙酰氧基丙酰氯國內(nèi)尚無報(bào)道。本文以L-α-苯甲基甲胺在吡啶條件下與乙酰氧基丙酰氯進(jìn)行衍生化，將衍生產(chǎn)物采用氣相色譜法分離測定，該法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)，是S-乙酰氧基乙酰氯中R型對映體含量測定的一種可靠的分析方法。

1　試驗(yàn)部分

1.1儀器和試藥：FOCUS氣相色譜儀（Thermo Fisher），F(xiàn)ID檢測器，Triplus自動進(jìn)樣器。無水吡啶、L-α-苯甲基甲胺、甲醇和二氯甲烷均為分析純，R-乙酰氧基乙酰氯和S-乙酰氧基乙酰氯對照品均為公司自制。

1.2色譜條件。色譜柱：DB-FFAP 30 m×0.53 mm×1.0 μm；載氣：高純氮?dú)猓粴饣覝囟龋?00 ℃；柱溫：200 ℃；檢測器溫度：250 ℃；流速：2.5 mL/min；分流比：1∶5；進(jìn)樣量：0.5 μL。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1樣品衍生化：精密量取20 μL樣品至5 mL量瓶中，冰浴條件下加1 mL無水吡啶，再精密加入100 μL的L-α-苯甲基甲胺，反應(yīng)趨于平穩(wěn)后搖勻，靜置2 h，再加入0.25 mL甲醇和1 mL二氯甲烷，搖勻。

1.3.2衍生化樣品測定：精密吸取0.5 μL衍生化后的試液，進(jìn)樣，記錄色譜圖。計(jì)算R-型對映體含量。

1.3.3專屬性和靈敏度：同“1.3.1”項(xiàng)下分別配制R-乙酰氧基乙酰氯對照品衍生化溶液和S-乙酰氧基乙酰氯對照品衍生化溶液，平行配制空白溶液，進(jìn)樣分析，結(jié)果在空白溶液色譜圖（圖1）中，R-乙酰氧基乙酰氯衍生物和S-乙酰氧基乙酰氯衍生物峰位處均無干擾峰；在樣品溶液色譜圖（圖2）中，R-乙酰氧基乙酰氯衍生物保留時(shí)間約31 min，S-乙酰氧基乙酰氯衍生物保留時(shí)間約33 min，二者前后均無干擾峰，分離度＞1.5，以R-乙酰氧基乙酰氯衍生物計(jì)，N≥8000。

將R-乙酰氧基乙酰氯對照品衍生后試液逐步稀釋，s/n=10相當(dāng)于配樣時(shí)所含R-乙酰氧基乙酰氯的量為0.017 ng，s/n=3相當(dāng)于配樣時(shí)所含R-乙酰氧基乙酰氯的量為0.005 ng。

1.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍：取20.0 mL S-乙酰氧基乙酰氯對照品，分別精密加入25、50、100、250、500 μL R-乙酰氧基乙酰氯對照品，搖勻，精密量取20 μL按 “1.3.1”項(xiàng)下配制溶液，進(jìn)樣，測定。以每20 μL樣品種所含R-乙酰氧基乙酰氯的量（μg）對所測得的R-乙酰氧基乙酰氯與S-乙酰氧基乙酰氯峰面積比值進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=59237X-1.548，相關(guān)系數(shù)r=0.9998。

圖1　空白溶液色譜圖

圖2　樣品溶液色譜圖

1.3.5加樣回收率：取20.0 mL S-乙酰氧基乙酰氯樣品，分別加入50、100、250 μL R-乙酰氧基乙酰氯對照品，搖勻，精密量取20 μL按“1.3.1”項(xiàng)下配制溶液，進(jìn)樣，測定，計(jì)算回收率，見表1。

表1　加樣回收率結(jié)果

1.3.6精密度試驗(yàn)：同一樣品平行配樣并測定6次，結(jié)果見表2。

表2　精密度結(jié)果

2　小結(jié)和討論

乙酰氧基乙酰氯和L-α-苯甲基甲胺反應(yīng)劇烈，常溫操作會濺出反應(yīng)液甚至?xí)ǎ恃苌襟E必須在冰浴條件下進(jìn)行。由于本品極易揮發(fā)，整個(gè)反應(yīng)過程需快速、密封。防止在空氣中吸潮分解。

衍生化所用堿性試劑吡啶，必須用無水吡啶，防止其中所含水分會和本品反應(yīng)。

衍生化時(shí)間需要放置2 h，以達(dá)到充分衍生的目的。試驗(yàn)還考察了衍生化后的溶液的穩(wěn)定性，結(jié)果表明放置24 h之內(nèi)仍穩(wěn)定。

［1］章慶新，曾青峰，邱遠(yuǎn)星，等.三光氣法合成2-乙酰氧基丙酰氯的研究［J］.廣東化工，2013，40（1）:48-49.

［2］葉余原，賈文平，李芳，等.柱前衍生氣相色譜法測定2-乙酰氧基異丁酰溴［J］.科學(xué)技術(shù)與工程，2007，7（10）:1671-1819.

［3］付磊，張?zhí)抑?2，4-二氯苯氧乙酰氯的氣相色譜分析［J］.分析測試學(xué)報(bào)，2003，22（6）:104-105.

［4］黃可新，馬梅玉，尹承烈.L-α-三氟乙酰氧基丙酰氯對外消旋胺及氨基酸的氣相色譜拆分［J］.有機(jī)化學(xué)，1995，15（2）:145-149.

O657.7+1

B

1671-8194（2015）20-0050-01