加味黃芪建中顆粒對類風濕性關節炎大鼠相關細胞因子及免疫球蛋白影響的實驗研究

高金良

（長春中醫藥大學附屬醫院風濕科，吉林 長春 130117）

加味黃芪建中顆粒對類風濕性關節炎大鼠相關細胞因子及免疫球蛋白影響的實驗研究

高金良

（長春中醫藥大學附屬醫院風濕科，吉林 長春 130117）

目的 探討加味黃芪建中顆粒對類風濕性關節炎大鼠相關細胞因子及免疫球蛋白的影響。方法 選取清潔級Wistar大鼠48只，隨機分4組，正常組、模型組、雷公藤多苷片組、加味黃芪建中顆粒組，每組12只，均行細胞因子、免疫球蛋白檢測。結果 模型組細胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關節炎指數、免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）高于正常組，細胞因子（IL-4、IL-10）低于正常組。雷公藤多苷片組與加味黃芪建中顆粒組細胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關節炎指數、免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）較模型組降低，細胞因子（IL-4、IL-10）較模型升高，加味黃芪建中顆粒組變異幅度大于雷公藤多苷片組（P＜0.05）。結論 加味黃芪建中顆粒可顯著改善類風濕性關節炎大鼠的細胞因子及免疫球蛋白狀況。

加味黃芪建中顆粒；類風濕性關節炎；細胞因子；免疫球蛋白；影響

類風濕性關節炎是以關節滑膜慢性炎癥為主的自身免疫性疾病，傳統治療方案中，多采用抗風濕藥物治療，患者幾年后常常會出現明顯的不良反應［1］，逐漸失去臨床療效結果多數患者的病情不能得到長期有效的控制，因此合理用藥，在疾病的早期控制病情的發展和轉歸，已成為國內外研究的熱點。中藥治療類風濕性關節炎是具有一定優勢的［2］，不良反應小，安全性較高，報道如下。

1　材料與方法

1.1實驗動物：雄性Wistar大鼠48只，體質量180～250 g。

1.2試劑：加味黃芪建中顆粒：藥物組成：飴糖30 g、桂枝15 g、芍藥18 g、生姜9 g、大棗6枚、黃芪30 g、炙甘草6 g、秦艽10 g、雞矢藤10 g。采用免煎顆粒制劑，取自正規醫院顆粒藥房，每日1劑。雷公藤多苷片：10毫克/片，浙江普洛康裕天然藥物有限公司生產，國藥準字Z33020778。

1.3方法：取凍干卡介苗素1支（50 mg），80 ℃、1 h滅活，混入滅菌液體石蠟油和羊毛脂（2∶1）10 mL中，制成Freund's完全佐劑。除正常組外，在每鼠右后足拓皮內注射Freund's完全佐劑0.05 mL致炎，復制佐劑性關節炎大鼠模型。致炎后第19天開始給藥，連續30 d，各組的給藥量相當于臨床用量的5倍，具體給藥方法如下：①正常對照組：給予9 g/L氯化鈉溶液灌胃，10 mL/kg，每天1次。②模型對照組：給予9 g/L氯化鈉溶液灌胃，10 mL/kg，每天1次。③雷公藤多甙治療組：將雷公藤多苷片研成細末，加9 g/L氯化鈉溶液，配制成混懸液，按照10 mL/kg的劑量灌胃，每天1次。④加味黃芪建中顆粒治療組：將加味黃芪建中顆粒，加9 g/L氯化鈉溶液，配制成混懸液，按照10 mL/kg的劑量灌胃，每天1次。末次用藥24 h后，用20 g/L烏拉坦溶液按大鼠體質量5 mL/kg劑量，腹腔注射麻醉，由腹主動脈抽取4～6 mL血液，4000 r/min，離心10 min，取血清測定細胞因子（TNF-α、IL-1、IL-4、IL-10、ESR、RF、CRP）及免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA），均采用ELISA法測定，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。檢測指標的時間節點為末次用藥24 h。

1.4評定標準。關節炎指數［3］：全身病變按5級評分法評價，根據未注射佐劑的其余3只肢體的病變程度合計積分，計算出關節炎指數。①0分：無紅腫。②1分：小趾關節紅腫。③2分：趾關節和足拓腫脹。④3分：踝關節以下的足爪腫脹。⑤4分：包括踝關節在內的全部足爪腫脹。滿分12分，分數越高，關節炎越嚴重。

1.5統計學方法：SPSS16.0軟件行統計學分析，組間差異用方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

2.1各組大鼠細胞因子與關節炎指數比較：模型組細胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關節炎指數高于正常組，細胞因子（IL-4、IL-10）低于正常組。雷公藤多苷片組與加味黃芪建中顆粒組細胞因子（TNF-α、IL-1、ESR、RF、CRP）、關節炎指數較模型組降低，細胞因子（IL-4、IL-10）較模型升高，加味黃芪建中顆粒組變異幅度大于雷公藤多苷片組（P＜0.05）。見表1。

2.2各組大鼠免疫球蛋白比較：模型組免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）高于正常組。雷公藤多苷片組與加味黃芪建中顆粒組免疫球蛋白（IgM、IgG、IgA）較模型組降低，加味黃芪建中顆粒組降低幅度大于雷公藤多苷片組（P＜0.05）。見表2。

表1　各組大鼠細胞因子與關節炎指數比較（）

表1　各組大鼠細胞因子與關節炎指數比較（）

注：TNF-α為腫瘤壞死因子α，IL-1為白細胞介素1，IL-4為白細胞介素4，IL-10為白細胞介素10，ESR為血沉，RF為類風濕因子，CRP為C反應蛋白。與正常組比較，aP＜0.05。與模型組比較，bP＜0.05。與雷公藤多苷片組比較，cP＜0.05

組別　例數　TNF-α（g/L）　IL-1（μg/L）　IL-4（μg/L）　IL-10（μg/L）正常組　12　7.8±1.2　0.7±0.3　7.8±1.0　52.8±6.7模型組　12　27.1±2.6a　2.0±0.9 a　4.3±1.2 a　15.6±1.9 a雷公藤多苷片組　12　15.4±2.3ab　1.4±0.7ab　5.2±0.8ab　31.4±2.3ab加味黃芪建中顆粒組　12　8.6±1.4 abc　0.8±0.2abc　7.1±1.3abc　46.7±4.1abc組別　例數　ESR（mm/h）　RF（ng /L）　CRP（mg/L）　關節炎指數（分）正常組　12　0.8±0.2　33.1±4.8　1.6±0.4　0.0±0.0模型組　12　12.7±2.9a　89.2±17.6a　3.7±1.3a　6.8±2.9a雷公藤多苷片組　12　4.3±1.5ab　64.7±10.3ab　2.3±1.0ab　4.2±1.2ab加味黃芪建中顆粒組　12　1.2±0.5abc　38.5±6.2abc　1.7±0.6abc　1.7±0.3abc

表2　各組大鼠免疫球蛋白比較（）

表2　各組大鼠免疫球蛋白比較（）

注：IgM為免疫球蛋白M，IgG為免疫球蛋白G，IgA為免疫球蛋白A。與正常組比較，aP＜0.05。與模型組比較，bP＜0.05。與雷公藤多苷片組比較，cP＜0.05

組別　例數　IgM（mg/L）　IgG（mg/L）　IgA（mg/L）正常組　12　261.5±24.3　395.7±34.6　71.2±5.8模型組　12　517.2±43.8a　978.1±91.7a134.7±13.2a雷公藤多苷片組　12　397.4±35.0ab672.9±80.3ab109.8±10.6ab加味黃芪建中顆粒組　12　272.7±31.8abc449.5±51.7abc80.3±6.4abc

3　討 論

類風濕性關節炎的發生發展與體內諸多因子的改變密切相關［4］。中藥治療類風濕性關節炎的效果較好［5］。黃芪建中湯加秦艽、雞矢藤、青風藤、三七、薏苡仁組成核心方：加味黃芪建中湯。方中重用黃芪、飴糖為君增強益氣建中之力，臣以辛溫之桂枝溫陽氣，祛寒邪；酸甘之白芍養營陰；生姜溫胃散寒，甘溫質潤之飴糖，溫補中焦，緩急止痛大棗補脾益氣；佐以秦艽、雞矢藤、青風藤助黃芪、飴糖健脾祛風濕，舒筋絡，散瘀止痛，解毒消腫；薏苡仁健脾舒筋，祛濕除痹。方中在健脾祛濕的基礎上加三七，活血化瘀生新，入胃經，養胃止血不留瘀，化瘀通絡不傷正。炙甘草為使藥益氣和中，調和諸藥。其中飴糖配桂枝，辛甘化陽，溫中焦而補脾虛；芍藥配甘草，酸甘化陰，緩肝急協調雞矢藤而止痛。秦艽、雞矢藤、青風藤微寒以劫黃芪、桂枝而升陽助火，祛濕邪；黃芪、飴糖、薏苡仁益氣固本扶正祛邪；三七化瘀通絡貫穿疾病的始終；諸藥合用，共奏健脾益氣，散寒祛濕、通絡止痛之功效。本次研究的結果表明，雷公藤多苷片與加味黃芪建中顆粒均是類風濕性關節炎的有效治療藥物，且加味黃芪建中顆粒的治療效果更佳，可顯著改善類風濕性關節炎大鼠的細胞因子及免疫球蛋白狀況。但此次研究也存在一定的弊端，樣本量較少，仍需要進一步擴大。加味黃芪建中顆粒是否可以徹底治愈類風濕性關節炎，仍需要進一步研究。

［1］王旻晉，武永康，林輝.甲氨蝶呤治療類風濕性關節炎的不良反應及應對措施［J］.華西醫學，2013，28（6）:940-943.

［2］王俊杰，范永升.中藥治療類風濕性關節炎實驗研究進展［J］.中華中醫藥學刊，2013，31（7）:1588-1590.

［3］陳建雙，于海榮，張玉玲，等.赤雹根總皂甙對類風濕性關節炎大鼠血清細胞因子的影響［J］.時珍國醫國藥，2012，23（5）:1097-1098.

［4］施曉柯.類風濕性關節炎相關細胞因子的研究進展［J］.中山大學研究生學刊（自然科學·醫學版），2012，33（4）:1-5.

［5］曾海坤，曾灶英，郭大敏，等.中藥生地馬錢丸配合來氟米特治療類風濕性關節炎（RA）的療效及安全性［J］.當代醫學，2012，18（16）:153-154.

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1671-8194（2015）20-0052-02