乳腺癌ASAH1、CDC6蛋白表達(dá)及其臨床意義

齊 攀　靳 艷　曹興玥　張 冰　謝振斌

（1 新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院，河南 新鄉(xiāng) 453002；2 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院組胚教研室，河南 新鄉(xiāng) 453002）

乳腺癌ASAH1、CDC6蛋白表達(dá)及其臨床意義

齊 攀1靳 艷2曹興玥2張 冰1謝振斌1

（1 新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院，河南 新鄉(xiāng) 453002；2 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院組胚教研室，河南 新鄉(xiāng) 453002）

目的 探討乳腺癌組織中ASAH1、CDC6蛋白表達(dá)和意義。方法 免疫組化方法檢測(cè)73例乳腺癌石蠟標(biāo)本中ASAH1及CDC6蛋白的表達(dá)，分析其與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 ①ASAH1陽(yáng)性表達(dá)率：乳腺癌中72.6%，正常乳腺組織中44%，表達(dá)具有差異性（P＜0.05）；CDC6陽(yáng)性表達(dá)率：乳腺癌中65.8%，正常乳腺組織中40%，表達(dá)具有差異性（P＜0.05）。②ASAH1蛋白表達(dá)與HER-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；CDC6蛋白表達(dá)與HER-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)。③ASAH1與CDC6蛋白表達(dá)具有正相關(guān)性。④ASAH1及CDC6蛋白表達(dá)增強(qiáng)預(yù)示5年生存率低。結(jié)論 ASAH1、CDC6蛋白表達(dá)與乳腺癌關(guān)系密切，聯(lián)合檢測(cè)其表達(dá)對(duì)進(jìn)一步了解乳腺癌的生物學(xué)行為及判斷預(yù)后有一定價(jià)值。

乳腺癌；ASAH1；CDC6

乳腺癌嚴(yán)重威脅女性健康，且發(fā)病年齡有年輕化趨勢(shì)。早期預(yù)防，早期診斷，早期治療是防治乳腺癌的主要手段。本研究通過(guò)探討ASAH1及CDC6蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)，研究他們?cè)谌橄侔┰\治中的價(jià)值及作為一種新型腫瘤標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)的可能性。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料：收集乳腺癌標(biāo)本73例，均為蠟塊，其中71例為浸潤(rùn)性癌，2例為導(dǎo)管內(nèi)癌；25例對(duì)照組為正常乳腺組織。

1.2試驗(yàn)步驟和結(jié)果判定方法及統(tǒng)計(jì)方法：應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)標(biāo)本中ASAH1及CDC6蛋白的表達(dá)，染色過(guò)程中設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。CDC6以胞核和胞質(zhì)出現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽(yáng)性，ASAH1以胞質(zhì)中出現(xiàn)澄清的棕黃色顆粒為陽(yáng)性，采用半定量積分法判斷結(jié)果。統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0，應(yīng)用卡方檢驗(yàn)比較組間差異。

2　結(jié) 果

2.1ASAH1及CDC6在乳腺正常組織及乳腺惡性腫瘤中的表達(dá)情況，見(jiàn)表1。

2.2ASAH1及CDC6表達(dá)與乳腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系，見(jiàn)表2。

表2　ASAH1及CDC6表達(dá)與乳腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

表1顯示，73例乳腺癌ASAH1蛋白陽(yáng)性率為72.6%，CDC6蛋白陽(yáng)性率為65.8%，二者在乳腺組織及正常組織中表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表2顯示，ER、HER-2不同狀態(tài)間，ASAH1表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ER表達(dá)增強(qiáng)，ASAH1表達(dá)減弱，HER-2表達(dá)增強(qiáng)，ASAH1表達(dá)增強(qiáng)；HER-2不同狀態(tài)間，CDC6的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），HER-2表達(dá)增強(qiáng)，CDC6表達(dá)增強(qiáng)。ASAH1及CDC6蛋白二者間表達(dá)成正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）。

3　討 論

3.1ASAH1與乳腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系：ASAH1（N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶1）是一個(gè)成熟的異二聚體酶。本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織及正常乳腺組織中ASAH1表達(dá)具有顯著性差異（P＜0.05），提示ASAH1蛋白在乳腺癌表達(dá)上調(diào)，可能參與乳腺癌的發(fā)生。ASAH1是細(xì)胞內(nèi)水解神經(jīng)酰胺的關(guān)鍵酶，ASAH1表達(dá)增加，神經(jīng)酰胺分解增加，凋亡信號(hào)受到抑制，反過(guò)來(lái)促進(jìn)增值。ASAH1在小鼠L929細(xì)胞中的過(guò)度表達(dá)就抑制了腫瘤壞死因子所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡［1］，ASAH1抑制劑能誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞的凋亡［2］。

我們可以觀察到分化中的細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量升高，加入外源性神經(jīng)酰胺促使細(xì)胞分化［3］。目前，神經(jīng)酰胺促進(jìn)細(xì)胞分化的機(jī)制尚不明確，ASAH1分解神經(jīng)酰胺的過(guò)程中受哪些因素影響也不清楚。ASAH1蛋白表達(dá)與HER-2表達(dá)成正相關(guān)，其表達(dá)增高提示預(yù)后不良，但也可能受到與腫瘤大小及組織學(xué)分級(jí)正相關(guān)的影響；實(shí)驗(yàn)還顯示ASAH1蛋白表達(dá)與ER水平成負(fù)相關(guān)，ER蛋白表達(dá)提示乳腺癌細(xì)胞尚在雌激素作用范圍內(nèi)，雌激素拮抗劑可控制癌細(xì)胞增殖，提示癌細(xì)胞惡性程度低，而ASAH1表達(dá)增高可能為不良預(yù)后因素。

3.2CDC6與乳腺癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系：CDC6（細(xì)胞周期分裂蛋白6）在真核細(xì)胞中是一種重要的DNA復(fù)制調(diào)節(jié)器。它完成細(xì)胞從G1期到分裂期DNA復(fù)制起始物的組裝［4］。研究發(fā)現(xiàn)CDC6表現(xiàn)出原癌基因的特征，參與腫瘤的形成機(jī)制CDC6的異常可造成染色體組的不完整。CDC6缺乏，DNA復(fù)制停止，細(xì)胞凋亡或進(jìn)入DNA復(fù)制的假分裂狀態(tài)［5］。本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)CDC6與HER-2表達(dá)成正相關(guān)，預(yù)示不良預(yù)后，其可以成為監(jiān)測(cè)癌癥病情、評(píng)價(jià)療效的重要分子生物學(xué)指標(biāo)。

3.3ASAH1與CDC6的關(guān)系：本實(shí)驗(yàn)得出，ASAH1表達(dá)越高，CDC6蛋白表達(dá)越高，當(dāng)然二者的作用機(jī)制可能各自獨(dú)立，也可能相互影響、相互協(xié)同，但因?yàn)橛绊懩[瘤發(fā)生發(fā)展的因素常常是相互聯(lián)系、相互作用的，所以將兩個(gè)指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用能克服單一指標(biāo)的不足之處，能更好地闡明腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，判斷預(yù)后。

4　結(jié) 論

乳腺癌組織中，ASAH1、CDC6蛋白表達(dá)較正常組織中強(qiáng)，腫瘤組織HER-2蛋白表達(dá)強(qiáng)，則ASAH1蛋白表達(dá)增強(qiáng)，ER表達(dá)增強(qiáng)則ASAH1表達(dá)減弱；HER-2蛋白表達(dá)強(qiáng)，則CDC6蛋白表達(dá)增強(qiáng)；聯(lián)合檢測(cè)ASAH1及CDC6可用于更好的判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療。

表1　ASAH1及CDC6在乳腺癌及正常乳腺組織中的表達(dá)

［1］Strelow A，Bernardo K，Adam-Klages S，et al.Overexpression of acid ceramidase protects fromtumor necrosis factor-induced cell death［J］.J Exp Med，2000，192（5）:601-612.

［2］Maeda I，Takano T，Matsuzuka F，et al.Rapid screening of specific changes in mRNA inthyroid carcinomas by sequence specificdifferential display: decrease dexpression of acid ceramidase mRNA in malignant and benign thyroid tumors［J］.Int J Cancer，1999，81（5）:700-704.

［3］Feng L，Barnhart JR，Seeger RC，et al.CDC6:fromDNA replication to cell cycle checkrpoints an oncogenesis［J］.Carcinogenesis，2008，29（2）:237-243.

［4］Mathias S，Younes A，Kan CC，et al.Activation of the sphingomyelin signaling pathway in intact EL4 cells and in a cell-free system by IL-1 beta［J］.Science，1993，259（5094）:519-522.

［5］Ruckhaberle E.Acid ceramidase 1 expression correlates with a better prognosis in ER-positive breast cancer［J］.Climacteric，2009，12（6）:502.

R737.9

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