腦脊液中CD4+CD25+Tr細(xì)胞和sICAM-1與蛛網(wǎng)膜下腔出血相關(guān)性研究

馬恒飛，　朱　潔，　李靈軍，　馬慧賢，　王黎洲，　周　石

·神經(jīng)介入Neurointervention·

腦脊液中CD4+CD25+Tr細(xì)胞和sICAM-1與蛛網(wǎng)膜下腔出血相關(guān)性研究

馬恒飛，朱潔，李靈軍，馬慧賢，王黎洲，周石

目的探討腦脊液中CD4+CD25+Tr細(xì)胞（Treg）、可溶性細(xì)胞間黏附分子（sICAM）-1與蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性。方法隨機(jī)選取住院治療的SAH患者108例（觀察組）和非器質(zhì)性神經(jīng)病變伴頭痛患者100例（對(duì)照組），采用流式細(xì)胞儀多色技術(shù)檢測(cè)腦脊液中Treg，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)白細(xì)胞介素（IL）-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）-β1、IL-6、sICAM-1。比較兩組患者Glasgow昏迷量表（GCS）評(píng)分、美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評(píng)分、視覺(jué)模擬評(píng)分（VAS），分析它們與Treg的關(guān)系。分析Hunt-Hess分級(jí)、腦血管痙攣與sICAM-1的關(guān)系。結(jié)果觀察組患者Treg、IL-10、TGF-β1分別為（1.09±0.21）%、（0.67±0.17）%、（0.29±0.08）%，顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；sICAM-1、IL-6分別為（793.1±84.8）pg/ml、（47.2±24.9）pg/ml，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。自發(fā)性SAH患者Treg、NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分顯著低于外傷性SAH患者，GCS評(píng)分顯著高于外傷性SAH患者（P＜0.05）。Treg、IL-10、TGF-β1與GCS評(píng)分呈正相關(guān)，與NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。隨著Hunt-Hess分級(jí)增加，sICAM-1與IL-6逐漸升高，各Hunt-Hess分級(jí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腦血管痙攣患者sICAM-1、IL-6顯著高于腦血管非痙攣患者（P＜0.05）。結(jié)論Treg下降對(duì)自發(fā)性SAH發(fā)生影響較大，sICAM-1升高可加速SAH病情并向腦血管痙攣發(fā)展。

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；可溶性細(xì)胞間黏附分子-1；蛛網(wǎng)膜下腔出血

蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）是臨床常見(jiàn)急性腦血管疾病，其病理生理機(jī)制與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。CD4+CD25+Tr細(xì)胞（Treg）屬T細(xì)胞亞群，具有明顯的免疫抑制功能［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈瘤患者Treg水平較正常人顯著降低，是導(dǎo)致動(dòng)脈瘤發(fā)生的重要免疫學(xué)機(jī)制之一［3］。可溶性細(xì)胞間黏附分子（sICAM）-1在參與介導(dǎo)SAH后腦血管痙攣與炎性反應(yīng)中起關(guān)鍵作用［4］，有助于預(yù)測(cè)SAH病情發(fā)展。Treg和sICAM-1在SAH病情發(fā)生發(fā)展中的作用研究較少，現(xiàn)將我們的研究結(jié)果報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1臨床資料

隨機(jī)選取2011年1月至2014年1月在貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院治療的SAH患者108例（觀察組），其中男65例，女43例，年齡27～62歲，平均（53.4±11.7）歲；Fisher分級(jí)Ⅰ級(jí)16例，Ⅱ級(jí)33例，Ⅲ級(jí)45例，Ⅳ級(jí)14例；Hunt-Hess分級(jí)Ⅰ級(jí)22例，Ⅱ級(jí)44例，Ⅲ級(jí)24例，Ⅳ～Ⅴ級(jí)18例。108例中55例為自發(fā)性SAH，入組標(biāo)準(zhǔn)［5］：①CT確診SAH伴劇烈頭痛；②MRI或DSA確診動(dòng)脈瘤破裂出血；③有腰穿刺和腦脊液檢查適應(yīng)證，簽署知情同意書(shū)。53例為外傷性SAH，入組標(biāo)準(zhǔn)［6］：①CT確診為SAH伴閉合性顱腦損傷，采用保守治療；②排除外傷性頭暈和頭痛；③自愿接受腰穿刺和腦脊液檢查。另外選取非器質(zhì)性神經(jīng)病變伴頭痛患者100例（對(duì)照組），其中男59例，女41例，年齡26～64歲，平均（53.0± 12.1）歲。觀察組和對(duì)照組患者性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2檢測(cè)方法

全部患者住院期間經(jīng)腰椎穿刺采集腦脊液，低溫下放置備用，準(zhǔn)備好全部標(biāo)本后集中檢測(cè)。檢測(cè)所用CD4-PE和CD25-FITC抗體購(gòu)自南京建城生物工程研究所。采用流式細(xì)胞儀（美國(guó)Beckman Coulter公司）多色技術(shù)檢測(cè)腦脊液Treg百分含量，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)白細(xì)胞介素（IL）-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）-β1、IL-6、sICAM-1水平。

采用經(jīng)顱多普勒（TCD）超聲檢測(cè)大腦中動(dòng)脈血流速度（VMCA），＞120 cm/s評(píng)定為腦血管痙攣［7］，反之為非腦血管痙攣。

1.3觀察指標(biāo)

根據(jù)Glasgow昏迷量表（GCS）評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)［8］評(píng)價(jià)顱腦損傷程度，美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評(píng)分［8］評(píng)價(jià)神經(jīng)功能缺損程度，視覺(jué)模擬評(píng)分（VAS）［8］評(píng)價(jià)頭痛程度，F(xiàn)isher分級(jí)［9］評(píng)價(jià)出血量，Hunt-Hess分級(jí)［9］評(píng)價(jià)病情程度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間計(jì)量資料用T檢驗(yàn)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，相關(guān)性分析用Pearson檢驗(yàn)，P＜0.05提示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

觀察組患者腦脊液Treg、IL-10、TGF-β1水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組患者sICAM-1、IL-6水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。自發(fā)性SAH患者Treg水平、NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分顯著低于外傷性SAH患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。自發(fā)性SAH患者GCS評(píng)分顯著高于外傷性SAH患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。Treg、IL-10、TGF-β1水平與GCS評(píng)分呈正相關(guān)（均r＞0，P＜0.05），Treg、IL-10、TGF-β1水平與NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（均r＜0，P＜0.05）（表3）。隨著患者Hunt-Hess分級(jí)增加，sICAM-1和IL-6水平也逐漸升高，各Hunt-Hess分級(jí)間比較之差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；腦血管痙攣患者sICAM-1與IL-6水平顯著高于腦血管非痙攣患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖1）。

表1兩組腦脊液Treg、sICAM-1水平比較　（）

表1兩組腦脊液Treg、sICAM-1水平比較　（）

表2　SAH患者Treg水平與臨床評(píng)分之間差異　（）

表2　SAH患者Treg水平與臨床評(píng)分之間差異　（）

類型　Treg（%）　GCS評(píng)分　NIHSS評(píng)分　VAS評(píng)分自發(fā)性SAH　1.07±0.18　14.31±1.25　7.96±2.43　5.53±1.37外傷性SAH　2.12±0.34　10.09±1.17　11.46±2.58　8.02±1.21 T值　3.07　4.13　3.97　3.65 P值　＜0.05　＜0.05　＜0.05　＜0.05

表3　Treg、IL-10、TGF-β1水平與臨床評(píng)分相關(guān)性

圖1　不同病情程度（Hunt-Hess分級(jí)）SAH患者sICAM-1和IL-6水平比較

3　討論

Treg是一群CD4與CD25同時(shí)表達(dá)的T細(xì)胞，通過(guò)減輕免疫反應(yīng)降低機(jī)體組織及器官損害。研究表明，動(dòng)脈管壁免疫性損害可導(dǎo)致動(dòng)脈瘤破裂出血后自發(fā)性SAH［10］。此外，Treg減少引起的血管內(nèi)炎性反應(yīng)抑制，可不完全地加重血管內(nèi)膜損傷，從而導(dǎo)致動(dòng)脈瘤破裂出血并出現(xiàn)自發(fā)性SAH。IL-10、TGF-β1是特異性細(xì)胞因子，也是Treg執(zhí)行免疫抑制功能的關(guān)鍵物質(zhì)［11］。TGF-β1百分含量降低可引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，導(dǎo)致血管內(nèi)膜不穩(wěn)定并形成血管斑塊［12］；Treg分泌的TGF-β1是血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制炎性反應(yīng)的主要物質(zhì)，其降低可引起不可控制的炎性作用，引發(fā)動(dòng)脈瘤破裂而導(dǎo)致SAH發(fā)生［13-14］。SAH受免疫學(xué)機(jī)制影響還表現(xiàn)在SAH發(fā)生后血管壁繼發(fā)免疫炎性反應(yīng)，引起腦血管痙攣，其病情隨著炎性細(xì)胞因子和sICAM-1逐漸增多而逐漸加重，促進(jìn)SAH發(fā)展。sICAM-1是一種常見(jiàn)炎性介質(zhì)，其正常表達(dá)利于機(jī)體抑制炎性反應(yīng)，但過(guò)度表達(dá)可對(duì)機(jī)體產(chǎn)生較大損害。有研究表明，sICAM-1含量增加是白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞激活或損害的標(biāo)志［15］。本實(shí)驗(yàn)研究Treg、sICAM-1在SAH發(fā)生發(fā)展中的作用，旨在探討Treg、sICAM-1檢測(cè)在SAH診斷和治療中的價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)表明，SAH患者Treg、IL-10、TGF-β1水平顯著低于非SAH患者，sICAM-1、IL-6水平顯著高于非SAH患者；自發(fā)性SAH患者Treg水平、NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分顯著低于外傷性SAH患者，GCS評(píng)分顯著高于外傷性SAH患者；Treg、IL-10、TGF-β1水平與GCS評(píng)分呈正相關(guān)，與NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)；隨著Hunt-Hess分級(jí)增加，sICAM-1、IL-6水平逐漸升高，各Hunt-Hess分級(jí)間比較之差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；并發(fā)腦血管痙攣患者sICAM-1、IL-6水平顯著高于未并發(fā)腦血管痙攣患者。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：①IL-10、TGF-β1、Treg對(duì)自發(fā)性SAH診斷具有特異性，可作為鑒別診斷自發(fā)性和外傷性SAH的依據(jù)；②Treg水平與NIHSS評(píng)分、VAS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)，與GCS評(píng)分呈正相關(guān)，說(shuō)明Treg與SAH發(fā)生密切相關(guān)；③sICAM-1水平升高與并發(fā)腦血管痙攣、SAH病情向較嚴(yán)重程度發(fā)展相一致，說(shuō)明sICAM-1參與SAH并發(fā)腦血管痙攣發(fā)生。Treg在自發(fā)性SAH發(fā)生中起著非常重要的作用，而sICAM-1升高可加速SAH并發(fā)腦血管痙攣發(fā)生。

綜上所述，Treg水平下降對(duì)自發(fā)性SAH發(fā)生影響較大，sICAM-1水平升高可加速SAH病情并向腦血管痙攣發(fā)展。臨床上檢測(cè)腦脊液Treg對(duì)鑒別診斷自發(fā)性與外傷性SAH有一定價(jià)值，檢測(cè)sICAM-1對(duì)預(yù)測(cè)SAH病情發(fā)展與并發(fā)腦血管痙攣有重要意義。

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Study on the correlation of CD4+CD25+Tr cells and sICAM-1 in cerebrospinal fluid with subarachnoid hemorrhage

MA Heng-fei，ZHU Jie，LI Ling-jun，MA Hui-xian，WANG Li-zhou，ZHOU Shi.Department of Interventional Radiology，F(xiàn)irst People's Hospital of Pingdingshan，Pingdingshan，Henan Province 467000，China

ZHOU Shi，E-mail：156722229@qq.com

ObjectiveTo investigate the correlation between CD4+CD25+Tr cells（Treg），soluble intercellular adhesion molecule-1（sICAM-1）in cerebrospinal fluid and the development of subarachnoid hemorrhage（SAH）.MethodsA total of 108 hospitalized patients with SAH （observation group）and 100 hospitalized patients with non-organic neuropathy associated with headache（control group）were randomly selected.Flow cytometry was used to detect Treg in cerebrospinal fluid，and enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）was employed to determine（IL）-10 and transforming growth factor beta 1（TGF-β1），IL-6 and sICAM-1.Glasgow Coma Scale（GCS）scores，stroke scale（NIHSS）scores and visual analog scale（VAS）scores of the two groups were determined，and results were compared between the two groups.The relationship between Hunt-Hess grade，cerebral vasospasm and sICAM-1 was analyzed.ResultsThe Treg，IL-10，TGF-β1 of the observation group were（1.09±0.21）%，（0.67±0.17）%and（0.29±0.08）%respectively，which were significantly lower than those of the control group（P＜0.05）；the sICAM-1 and IL-6 of the observation group were（793.1±84.8）pg/ml and（47.2±24.9）pg/ml respectively，which were significantlyhigher than those of the control group（P＜0.05）.The Treg，NIHSS scores and VAS scores in the patients with spontaneous SAH were significantly lower than those in the patients with traumatic SAH，while the GCS scores in the patients with spontaneous SAH were significantly higher than those in the patients with traumatic SAH （P＜0.05）.Treg，IL-10 and TGF-β1 carried a parallel correlation with GCS scores，while a negative correlation with NIHSS scores and VAS scores（P＜0.05）.With the increase of Hunt grade，IL-6 and sICAM-1 gradually increased，and the differences between different Hunt-Hess grades were statistically significant（P＜0.05）.The sICAM-1 and IL-6 of the patients with cerebral vasospasm were significantly higher than those of patients with no cerebral vasospasm（P＜0.05）.ConclusionThe decrease of Treg has a strong influence on the development of spontaneous SAH，and the increase of sICAM-1 can accelerate the development of SAH toward cerebral vasospasm.（J Intervent Radiol，2015，24：939-942）

CD4+CD25+regulatory T cells；soluble intercellular adhesion molecule-1；subarachnoid hemorrhage

R743.4

A

1008-794X（2015）-11-0939-04

2015-03-25）

（本文編輯：邊佶）

10.3969/j.issn.1008-794X.2015.11.002

國(guó)家自然科學(xué)基金（81460276）

467000河南平頂山市第一人民醫(yī)院介入科（馬恒飛）；貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院放射科（王黎洲、周石）

周石E-mail：156722229@qq.com