斑禿患者血清對人頭皮毛囊體外生長的影響及自擬生發方的干預作用

郁 輝侯占英楊小秋謝小軍

（1 深圳市南山區西麗人民醫院皮膚科，廣東 深圳 518055；2 深圳市龍華新區觀瀾人民醫院皮膚科，廣東 深圳 511180）

斑禿患者血清對人頭皮毛囊體外生長的影響及自擬生發方的干預作用

郁 輝1侯占英2楊小秋1謝小軍1

（1 深圳市南山區西麗人民醫院皮膚科，廣東 深圳 518055；2 深圳市龍華新區觀瀾人民醫院皮膚科，廣東 深圳 511180）

目的 觀察斑禿患者血清對人頭皮毛囊體外生長的影響及自擬生發方的干預作用。方法 門診斑禿患者1例，服藥前空腹采血制備不含藥血清；給予20 g/kg劑量的自擬生發方口服，連續10 d，于第11天清晨空腹服藥后采血制備含藥血清。復制人頭皮游離毛囊體外培養模型，分為3組：空白對照組加Williams E無血清培養基，不含藥斑禿血清組加入體積分數為20%血清，含藥斑禿血清組加入體積分數為20%的自擬生發方含藥血清。采用倒置顯微鏡觀察毛囊大體形態變化，并測量毛囊生長長度和生長時間，計算前4 d平均生長速度和最終生長長度。結果 不含藥斑禿血清組前4 d平均生長速度、生長時間、最終生長長度均減少，與空白對照組比較，差異具有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；而含藥斑禿血清均可不同程度升高以上指標（P＜0.05或P＜0.01）。結論 自擬生發方具有促進毛囊生長、維持毛囊正常形態的作用，而斑禿血清對毛囊生長具有一定的負影響。

斑禿；自擬生發方；器官培養

斑禿的病因和發病機制尚未完全清楚，暫無特效的治療方法[1-2]。我們通過取健康成人正常頭皮，建立體外游離毛囊培養模型，觀察斑禿患者血清對毛囊生長的影響及自擬生發方的干預作用。

1　材料與方法

表1　各組毛囊生長情況的比較（）

表1　各組毛囊生長情況的比較（）

注：與空白對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與B組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　毛囊數　　前4 d的平均生長速度（mm/d)　　生長時間（d)　　最終生長長度（mm) A組　20　0.22±0.03　8.7±1.8　1.25±0.26 B組　9　0.16±0.02　5.4±0.5　0.71±0.12 C組　13　0.21±0.03**　6.5±0.7*　1.03±0.5**△

1.1材料：整形外科手術中獲得的枕部頭皮（年齡28歲）。毛囊培養基，L-谷氨酰胺2 mmol/L，Hepes 20 mmol/L、牛胰島素10 μg/mL、轉鐵蛋白10 μg/mL，氫化可的松0.4 μg/mL；青霉素、鏈霉素100 U/mL。手術顯微鏡YZ20P5；倒置顯微鏡Nikon T300帶目鏡測微尺；CO2培養箱HSO 301T-VBA；電熱恒溫水浴箱HH W21 600；凈化工作臺SW-CT-IF。

1.2血清的制備

1.2.1不含藥斑禿血清的制備，門診斑禿患者（初次發病，未治療，無合并其他自身免疫性疾病者）1例，清晨空腹時肘部淺靜脈采血，取血于無抗凝試管中，常溫靜置一段時間后，在離心機內分離血清，取上清液，經56、30 min滅活處理后，用針頭濾器濾過除菌，-20 ℃以下保存備用。

1.2.2含藥斑禿血清的制備[3-4]：服用自擬生發方（配方顆粒），顆粒劑，藥材制造商：廣東省一方藥業有限公司，方藥組成：黨參10 g，生地10 g，熟地10 g，天冬10 g，麥冬10 g，黃精10 g，制首烏10 g，茯苓10 g，女貞子10 g，墨旱蓮10 g，枸杞10 g，菟絲子10 g，桑椹子10 g，甘草 6 g。每日1劑，給同一門診斑禿患者服用（20 g/kg），分兩次開水沖服，每次250 mL，連服7 d，于第8天清晨空腹服藥（服藥前應禁食12 h）后1 h采血，血清制備方法同“1.2.1”。

1.3游離毛囊的分離與培養[5]：參考文獻[5]的方法，分離和培養游離毛囊。

1.4試驗分組：試驗共分為3組，第1組為空白對照組（A組）；第2組分別為體積分數為20%的不含藥斑禿血清組（B組）；第3組分別為體積分數為20%的含藥斑禿血清組（C組）。

1.5統計學方法：應用統計軟件SPSS 10.0對數據進行統計學處理，數據用（）表示，組間比較采用t檢驗和方差分析，P＜0.05具有統計學差異。

2　結 果

2.1毛囊大體形態變化：觀察顯示，各組毛囊逐日延長。A組的毛囊在培養的第1周形態完好，層次清晰；部分毛囊于9～10 d后毛囊停止生長，呈早期退行變化。B組的大部分毛囊形態第6天開始發生改變，毛母質已萎縮，遠離毛乳頭，毛乳頭也變得模糊，呈現退行休止期樣毛囊的毛球部形態。C組的毛囊培養的第2天兩組的毛母質都呈倒漏斗形，形態豐滿，色素明顯。毛乳頭清晰可見。培養第6天毛母質略呈縮小的倒漏斗形，毛乳頭緊鄰于其底部，仍然表現為生長期樣毛球部形態，8 d后逐漸進入退行期。毛囊快速生長主要集中在前4 d，此時各組毛囊總的形態沒有明顯變化，毛囊各層結構清晰，毛球部飽滿，毛乳頭與毛母質界線分明且呈錐形嵌入其內。隨著培養時間的延長，生長速度明顯減慢（圖1）。

2.2各組毛囊的生長情況：B組前4 d平均生長速度、生長時間、最終生長長度均減少，與空白對照組比較具有顯著性差異（均P＜0.05或P＜0.01）；C組可不同程度升高以上指標（P＜0.05或P＜0.01），見表1。

3　討 論

圖1　培養第6天后的毛囊形態（×40）

斑禿的病因復雜，其發病機制涉及眾多的分子與細胞因子，但其作用尚未明確，Philpott[6]1990年首先建立了人頭皮游離毛囊的生長模型，我國從1996年始也逐漸建立了游離毛囊體外培養（小鼠觸須、人頭皮毛囊和豬耳毛囊）的方法，并就一些細胞因子、皮質類固醇及藥物對毛囊生長的影響進行了探討[7]。有報道，在斑禿患者的外周血中可見抗甲狀腺、胃壁細胞、腎上腺細胞等多種自身抗體，并檢測到抗毛囊水平細胞成分的自身抗體[8-9]。

中醫認為本病的發生為肝、腎、氣、血功能失調，風邪入侵，致經脈不暢，發根失養所致。故本病以滋補肝腎、養血益精、祛風生發為治療原則[10]。我們觀察了斑禿患者服用自擬生發方后的血清對健康成人正常頭皮毛囊的干預作用，盡可能真實反映藥物在患者體內環境中產生的藥理效應，在一定程度上更能體現整體給藥的效果。方中制何首烏、黃精、菟絲子、枸杞子、黃芪等，具有益氣補血、滋養肝、腎作用，不僅能促進生發，還能促進毛發由白變黑。本研究結果表明自擬生發方能夠促進毛囊生長、維持毛囊正常形態，從而達到減少毛發脫落、促進毛發生長的效果，這可能是該方治療斑禿的作用機制之一，但其作用方式和靶點尚不清楚，有待于從分子生物學角度作進一步探討。

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R285.5

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1671-8194（2015）25-0096-02