氨糖膠囊的急性和亞急性毒理學(xué)評(píng)價(jià)

林麗萍，杜芳瓊，莫杰明，呂曄，席建紅

（1.江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，江蘇南京210014；2.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)，江蘇南京210014；3.福建省腫瘤醫(yī)院，福建福州350014；4.廣西嘉盈生物科技有限公司，廣西南寧530000；5.托爾專用化學(xué)品（鎮(zhèn)江）有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212132）

氨糖膠囊的急性和亞急性毒理學(xué)評(píng)價(jià)

林麗萍1，2，杜芳瓊3，莫杰明4，呂曄1，席建紅5，*

（1.江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所藥用植物研究開(kāi)發(fā)中心，江蘇南京210014；2.江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)，江蘇南京210014；3.福建省腫瘤醫(yī)院，福建福州350014；4.廣西嘉盈生物科技有限公司，廣西南寧530000；5.托爾專用化學(xué)品（鎮(zhèn)江）有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212132）

氨糖膠囊系由氨基葡萄糖鹽酸鹽、硫酸軟骨素、碳酸鈣和維生素D組成的具有增加骨密度功能的保健食品，為判定其對(duì)人體健康是否產(chǎn)生危害，特進(jìn)行了安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)。依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》，對(duì)氨糖膠囊進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)和30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)。結(jié)果表明，氨糖膠囊對(duì)雌、雄小鼠的急性經(jīng)口的最大耐受劑量（MTD）大于20.0 g/kg·bw，根據(jù)急性毒性分級(jí)，氨糖膠囊屬無(wú)毒級(jí)。連續(xù)氨糖膠囊喂養(yǎng)30天，各劑量組動(dòng)物生長(zhǎng)良好，體重、進(jìn)食量及食物利用率、血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)、臟器絕對(duì)重量及臟/體比值與陰性對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異（P＞0.05）；病理組織學(xué)檢查結(jié)果也表明氨糖膠囊對(duì)受檢臟器無(wú)明顯損害。因此，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，判定氨糖膠囊為安全性保健食品

急性毒性；MTD；30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)；亞急性毒性；氨糖膠囊

氨糖膠囊系由氨基葡萄糖鹽酸鹽、硫酸軟骨素、碳酸鈣和維生素D組成的保健食品，功能學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示其具有增加骨密度的作用。文獻(xiàn)報(bào)道氨基葡萄糖和硫酸軟骨素常用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的輔助治療［1-2］。這兩種原料聯(lián)合使用的毒理學(xué)研究也有些報(bào)道［3-4］。但是氨糖膠囊四種組分用于增加骨密度的保健食品，未見(jiàn)其安全毒理學(xué)評(píng)價(jià)，因此，根據(jù)食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序［5］對(duì)該受試物進(jìn)行了急性毒性和亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)研究。

1材料和方法

1.1受試物

氨糖膠囊由廣西嘉盈生物科技有限公司提供。樣品為膠囊，內(nèi)容物為灰白色粉末，生產(chǎn)批號(hào)為20110928。人體每日推薦用量為3.0 g/60 kg·bw。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

選用山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的健康SPF級(jí)昆明種小鼠和SPF級(jí)Wistar大鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（魯）20090001。SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)為魯動(dòng)環(huán)字SYXK（魯）20100011號(hào)。實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度（50±10）%。

1.3方法

1.3.1小鼠急性毒性試驗(yàn)［6］

采用最大耐受量（MTD）試驗(yàn)。健康昆明種小鼠20只，雌雄各半，體重為18 g～22 g。稱取受試物10 g，用蒸餾水溶解并定容至20 mL，小鼠空腹16 h后，間隔4 h，以0.20 mL/10 g·bw容量灌胃2次，總劑量為20.0 g/kg·bw灌胃，連續(xù)觀察14 d，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況。

1.3.230d喂養(yǎng)試驗(yàn)［7］

選斷乳SD大鼠80只，體重60 g～80 g，隨機(jī)分為陰性對(duì)照組及3個(gè)受試樣品組，每組20只，雌雄各半。3個(gè)受試樣品組劑量分別為1.25、2.50、5.00 g/kg·bw。將送檢樣品分別按1.25%、2.50%、5.00%的比例（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）摻入飼料，制備相當(dāng)于原產(chǎn)品人體每日推薦用量25倍、50倍、100倍的飼料；三組大鼠分別喂飼以上飼料，陰性對(duì)照組喂飼常規(guī)飼料。單籠喂養(yǎng)，自由飲食，連續(xù)30 d。每天觀察并記錄動(dòng)物的一般表現(xiàn)、行為、中毒表現(xiàn)和死亡情況。每周稱1次體重和2次食物攝入量，計(jì)算每周及總的食物利用率。試驗(yàn)結(jié)束觀察以下指標(biāo)：（1）血液學(xué)指標(biāo)：測(cè)定血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類。（2）血液生化學(xué)指標(biāo)：測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、甘油三酯、膽固醇、血糖、血清白蛋白、總蛋白。（3）病理檢查：對(duì)所有動(dòng)物進(jìn)行大體檢查，將重要器官和組織固定保存，將臟器（肝、脾、腎、睪丸）稱重，計(jì)算相對(duì)重量（臟/體比值），并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查（肝、腎、脾、胃及十二指腸、睪丸或卵巢）。

1.3.3數(shù)據(jù)處理

采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)分別進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、Fisher精確概率法、One-way ANOVA分析及Dunnett檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果與分析

2.1急性毒性試驗(yàn)

氨糖膠囊對(duì)小鼠經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

本研究依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》［5］的規(guī)定，保健食品的急性毒性結(jié)果須滿足動(dòng)物未現(xiàn)死亡≥10.0 g/kg·bw（即涵蓋人體推薦量的100倍），才能進(jìn)行第2階段的毒理學(xué)研究。由表1可見(jiàn)，試驗(yàn)期間兩種性別的小鼠均未見(jiàn)明顯的中毒癥狀，也無(wú)死亡。將受試動(dòng)物處死后進(jìn)行解剖檢查，肝臟、脾臟、腎臟、心臟、肺、胃、腸等主要器官，均未見(jiàn)明顯異常改變。受試樣品對(duì)兩種性別小鼠的最大耐受劑量（MTD）均大于20.0 g/kg·bw，根據(jù)急性毒性分級(jí)，氨糖膠囊屬無(wú)毒級(jí)。

表1　氨糖膠囊對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果Table 1Acute toxicity test results of An’tang capsule in mice

2.230d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.2.1一般情況觀察

試驗(yàn)期間各組動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、活動(dòng)均正常，無(wú)中毒表現(xiàn)和死亡發(fā)生。

2.2.2氨糖膠囊對(duì)大鼠體重、增重的影響

以1.25、2.50、5.00 g/kg·bw劑量的氨糖膠囊制備飼料喂飼大鼠，連續(xù)30 d，與陰性對(duì)照組相比，受試樣品各劑量組動(dòng)物每周體重、體重增加量、進(jìn)食量和食物利用率及總體重增加量、進(jìn)食量和食物利用率差異無(wú)顯著性，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　氨糖膠囊對(duì)大鼠體重（g）的影響（±s，n=10）Table2EffectofAn’tangcapsuleonbodymassinrats（±s，n=10）

表2　氨糖膠囊對(duì)大鼠體重（g）的影響（±s，n=10）Table2EffectofAn’tangcapsuleonbodymassinrats（±s，n=10）

注：與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

性別劑量/（g/kg·bw）始重第一周第二周第三周第四周雄陰性對(duì)照73.9±4.9 122.5±7.4 166.6±10.5 205.5±14.1240.1±16.1 1.2574.6±4.4 123.8±7.3168.4±9.5208.2±12.0243.3±14.8 2.5073.8±5.2 121.9±6.1165.3±8.5204.9±10.4238.7±12.1 5.0074.1±5.1 123.0±6.5167.4±7.6206.5±10.1240.8±12.3雌陰性對(duì)照72.3±3.9 111.2±4.7145.5±5.5174.4±6.3196.8±9.2 1.2571.7±3.9 110.2±6.0144.1±7.5172.5±9.2194.6±10.2 2.5072.1±4.6 109.9±5.3144.4±6.0172.2±7.4193.8±9.4 5.0073.2±3.8 112.3±4.5147.2±6.1175.2±6.6198.4±8.0

2.2.3氨糖膠囊對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

以1.25、2.50、5.00 g/kg·bw劑量的氨糖膠囊制備飼料喂飼大鼠，連續(xù)30 d，各劑量組大鼠的血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)表3。

2.2.4氨糖膠囊對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)

以1.25g、2.50、5.00 g/kg·bw劑量的氨糖膠囊制備飼料喂飼大鼠，連續(xù)30 d，各劑量組大鼠的血生化指標(biāo)與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表3　氨糖膠囊30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)血液學(xué)檢查結(jié)果（±s，n=10）Table 3Effect of An’tang capsule on blood in rats（±s，n=10）

表3　氨糖膠囊30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)血液學(xué)檢查結(jié)果（±s，n=10）Table 3Effect of An’tang capsule on blood in rats（±s，n=10）

注：與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

性別劑量/（g/kg·bw）血紅蛋白/（g/L）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)/（×1012/L）白細(xì)胞計(jì)數(shù)/（×109/L）中性/%淋巴/%雄陰性對(duì)照150.00±9.757.73±0.628.08±2.2632.23±10.7467.77±10.74 1.25155.70±14.807.88±0.688.00±2.1331.80±4.0968.20±4.09 2.50146.90±12.097.54±0.588.13±2.1926.55±3.4373.45±3.43 5.00147.10±10.227.74±0.528.11±2.9431.09±5.3968.91±5.39雌陰性對(duì)照149.30±5.917.70±0.478.13±2.2028.08±6.7871.92±6.78 1.25147.70±8.127.47±0.438.13±1.5027.95±6.0072.05±6.00 2.50142.60±24.477.17±1.198.03±2.1330.12±6.5369.88±6.53 5.00149.10±15.217.71±0.628.37±2.8632.84±7.4367.16±7.43

表4　氨糖膠囊30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)生化檢驗(yàn)結(jié)果（x+s，n=10）Table 4Biochemical indexes results ofthe blood of Rats with An'tang capsule in 30 days feeding test（x+s，n=10）

2.2.5病理檢查

以1.25、2.50、5.00 g/kg·bw劑量的氨糖膠囊制備飼料喂飼大鼠，連續(xù)30 d，各組大鼠大體觀察未發(fā)現(xiàn)異常，臟器絕對(duì)重量及臟/體比值與陰性對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，送檢臟器肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸或卵巢組織未見(jiàn)有意義的病理改變。

3討論與結(jié)論

氨基葡萄糖和硫酸軟骨素成為世界范圍內(nèi)保健食品中廣泛使用的添加劑，與碳酸鈣和維生素D聯(lián)合使用，具有很好的增加骨密度保健功能，為了驗(yàn)證其是否具有毒性，讓消費(fèi)者放心，其毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)意義十分重大。本研究依據(jù)《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序》的規(guī)定，本實(shí)驗(yàn)中氨糖膠囊第1階段急性毒性試驗(yàn)表明，雌雄兩性小鼠MTD均大于20.0 g/kg·bw，屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)，可以進(jìn)入第2階段毒理學(xué)試驗(yàn)。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示其對(duì)雌雄大鼠體重、總食物利用率、血常規(guī)以及血液生化指標(biāo)無(wú)明顯影響，肝、腎、胃及十二指腸均未見(jiàn)病理組織學(xué)改變，因此認(rèn)為該受試物屬安全性保健食品，可以長(zhǎng)期服用。

［1］Susanne X.Wang，Sheila Laverty，MirceaDumitriu，et al.The Effects of Glucosamine Hydrochloride on Subchondral Bone Changes in an Animal Model of Osteoarthritis［J］.Arthritis&Rheumatism，2007，56（5）:1537-1548

［2］Olivier B，Jean-Yves R.Glucosamine and Chondroitin Sulfate as Therapeutic Agents for Knee and Hip Osteoarthritis［J］.Drugs&Aging，2007，24（7）:573-580

［3］John N.Hathcock，Andrew Shao.Risk assessment for glucosamine and chondroitin sulfate［J］.Regulatory Toxicology and Pharmacology，2007，47（1）:78-83

［4］Pavelka K，Gatterova J，Olejarova M，et al.Glucosamine sulfate use and delay of progression of knee osteoarthritis:a 3-year，randomized，placebo-controlled，double-blind study［J］.Arch Intern Med，2002，162（18）:2113-2123

［5］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 15193.1-2003食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003:1-8

［6］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 15193.3-2003急性毒性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003:17-31

［7］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB 15193.13-2003 30天和90天喂養(yǎng)試驗(yàn)［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003:85-88

Acute and Subacute Toxicological Assessment of An'tang Caspsule

LIN Li-ping1，2，DU Fang-qiong3，MO Jie-ming4，Lü Ye1，XI Jian-hong5，*
（1.Jiangsu Center for Research&Development of Medicinal Plants，Institute of Botany，Jiangsu Province and Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，Jiangsu，China；2.The Jiangsu Provincial Platform for Conservation and Utilization of Agricultural Germplasm，Nanjing 210014，Jiangsu，China；3.Tumor Hospital of Fujian Province，F(xiàn)uzhou 350014，F(xiàn)ujian，China；4.Guangxi Giant Bio-Tech Co.，Ltd.，Nanning 530000，Guangxi，China；5.Thor Specialty Chemical（Zhenjiang）Co.，Ltd.，Zhenjiang 212132，Jiangsu，China）

An'tang capsule was a functional food by increasing bone mineral density which comprising glucosamine hydrochloride，chondroitin sulfate，calcium carbonate and Vitamin D.Inorder to provide scientific basis for rational development and utilization of An'tang capsule，its dietary safety was studied.Acute toxicity test and thirty-day feeding test set on for An'tang capsule were investigated according to the health food inspection and evaluation of technical specifications.Male and female rats acute oral maximum tolerated dose（MTD）of An'tang capsule was greater than 20.0 g/kg.bw which indicated that it was actually non-toxicity.Furthermore，the results indicated that no significant difference of the rat growth，body weight，food intake and food utilization，rout blood and biochemical index，which indentified that An'tang capsule was safety for human being.

acute toxicity；maximum tolerated dose（MTD）；thirty-day feeding；subacute toxicity；An'tang capsule

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.14.033

2014-03-20

林麗萍（1979—），女（漢），助理研究員，博士，研究方向：天然活性成分和保健食品的研究與開(kāi)發(fā)。

席建紅（漢）。