斷奶幼兔日糧中添加Tu—569菌劑對其生長性能及腸道微生物區系的影響

姜軍坡　高同國　王世英

摘要：將90只30日齡斷奶健康幼兔隨機分成對照組和試驗組，試驗組日糧中添加Tu-569菌劑，對照組不添加，分別飼喂10、20和30 d后，計算相應的日均增重、料重比、飼料轉化率、腹瀉率等指標。解剖幼兔后收集小腸、大腸內容物，通過選擇性培養基測定其芽孢桿菌、大腸桿菌、乳酸菌、酵母菌的數量。結果表明，試驗組幼兔的日均增重比對照組增加9.4%～22.6%，料重比低5.7%～18.9%，飼料轉化率高6.9%～23.7%，胴體重高13.4%～26.1%，幼兔腹瀉率降低了33.43%，小腸內的芽孢桿菌數量增加了15.9倍；而幼兔小腸內的大腸桿菌數量、乳酸菌數量、酵母菌數量差異不大。與對照組相比，試驗組幼兔大腸內的芽孢桿菌數量增加了26.8倍；試驗組幼兔大腸內的大腸桿菌數量減少了53.0%；試驗組幼兔大腸內的乳酸菌數量增加了9.2倍；試驗組幼兔大腸內的酵母菌數量增加了2.2倍。故飼喂Tu-569菌劑可使幼兔的日均增重、飼料轉化率、胴體重增加，料重比下降；還可增加幼兔大腸內芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌的數量，降低幼兔大腸內大腸桿菌數量，防止幼兔腹瀉。

關鍵詞：兔；生長性能；芽孢桿菌；大腸桿菌；乳酸菌；酵母菌

中圖分類號：S829.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）19-4779-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.19.031

Abstract： 90 healthy weaned rabbits， 30 days old， were randomly divided into the control group and the test group. Agent Tu-569 was only added into the diet of rabbits in the test group. Indexes， such as daily weight gain， feed-gain ratio， feed conversion rate and diarrhea rate， were calculated when rabbits were fed for 10 days， 20 days and 30days， respectively. Intestine contents were collected after dissecting. Amount of Bacillus， Escherichia coli， lactic bacteria and yeast were determined with selective medium. Results showed that the daily weight gain of rabbits in the test group was increased by 9.4% ～22.6%， compared with that of the control group. Feed-gain ratio was decreased by 5.7% ～ 18.9%. Feed conversion rate increased by 6.9%～23.7%. Carcass weight was increased by 13.4%～26.1%. Meanwhile， diarrhea rate in the test group was decreased by 33.43%. Amount of Bacillus in the small intestine of rabbits in the test group was increased by 15.9 times， compared with that of the control group. But amounts of Escherichia coli， lactic bacteria and yeast in the small intestine had no significant difference between the two groups. Amount of Bacillus in the large intestine of rabbits in the test group was increased by 26.8 times， compared with that of the control group. Amount of Escherichia coli in the large intestine was decreased by 53.0%. Amount of lactic bacteria in the large intestine was increased by 9.2 times. Amount of yeast in the large intestine was increased by 2.2 times. Conclusion could be draw that agent Tu-569 had functions of increasing daily weight gain， feed conversion rate and carcass weight， decreasing feed-gain ratio， increasing amounts of beneficial bacteria， such as Bacillus， lactic bacteria and yeast， decreasing the amount of Escherichia coli and preventing young rabbit diarrhea.

Key words：rabbits；growth performance；Bacillus；Escherichia coli；Lactic bacteria； yeast

據統計，腹瀉引起的兔死亡約占家兔死亡總數的70%～80%[1]。造成幼兔腹瀉的原因包括寄生蟲、病毒性、細菌性等傳染性因素和自身消化機能、應激、飼料等非傳染性因素，其中細菌性因素包括大腸桿菌、魏氏梭菌等病原菌[2]。研究證明，微生態制劑可較好地預防幼兔腹瀉的發生和降低死亡率，并可減少耗料量，降低料重比[3]。本研究組從健康獺兔腸道中篩選到的Bacillus velezensis Tu-569菌株，可在胞外產生抑制大腸桿菌、沙門氏菌和痢疾桿菌等致腹瀉病原菌的抑菌蛋白，并可在胞外產生消化酶，對幼兔安全，具有作為飼料添加劑飼喂幼兔的潛力，可制備成菌劑用于防治幼兔腹瀉及提高幼兔生產性能[4]。Tu-569菌劑系由Tu-569菌株制備而成。本試驗擬研究Tu-569菌劑對幼兔生長性能及腸道內微生物區系的影響，為Tu-569菌劑的進一步推廣應用奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 Tu-569菌劑 Tu-569菌劑（菌濃為1×1010 CFU/g）由河北眾邦生物技術有限公司生產，系Bacillus velezensis Tu-569菌株經發酵制備。Tu-569菌株由河北農業大學生命科學學院制藥工程系分離并保存。

1.1.2 試驗動物 30日齡斷奶健康幼兔90只，購自河北省保定市曲陽縣吳少偉獺兔養殖廠。

1.1.3 主要培養基 NA培養基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化鈉15 g，瓊脂15 g，水1 000 mL，pH 7.2～7.4。

EMB培養基：蛋白胨10 g，乳糖10 g，K2HPO4 2 g，瓊脂25 g，2%曙紅水溶液20 mL，0.5%美藍水溶液13 mL，水1 000 mL，pH 7.4。

MRS培養基：蛋白胨10 g，牛肉膏10 g，酵母膏10 g，KH2PO4 2 g，K2HPO4 2 g，葡萄糖20 g，吐溫80 1 mL，CH3COONa·3H2O 5 g，MgSO4·7H2O 0.58 g，MnSO4·H2O 0.25 g，瓊脂18 g，水1 000 mL，pH 6.2～6.6。

YPD培養基：蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g，葡萄糖20 g，瓊脂14 g，水1 000 mL，pH 7.0。

1.2 試驗方法

1.2.1 飼喂方案 將90只30日齡斷奶健康幼兔隨機分為對照組、試驗組，每組45只。試驗組幼兔日糧中添加0.1%的Tu-569菌劑，對照組幼兔日糧中不添加Tu-569菌劑。每天6：00和18：00人工飼喂日糧，按每只幼兔每天定量添加75 g日糧進行喂養，自由飲水，正常管理。

1.2.2 幼兔生長性能及腹瀉率、死亡率的測定 每天觀察兔舍的臭味，記錄群兔狀態、采食量、腹瀉、糞便及死亡情況。

1.2.3 取樣及菌群變化的測定 飼喂10 d后，對照組和試驗組分別隨機選取3只幼兔停食24 h后稱重，處死，解剖，測定酮體重。飼喂20 d后，對照組和試驗組分別隨機選取3只幼兔停食24 h后稱重，處死，解剖，測定酮體重。飼喂20 d后，對照組和試驗組分別隨機選取3只幼兔停食24 h后稱重，處死，解剖，測定酮體重。

幼兔解剖時，將腸道按小腸、大腸分段，分別收集其內容物。各取大約1 g腸道內容物于滅菌錐形瓶中，放入已滅菌的研缽中快速研細。將研細的腸道內容物轉移至裝有10 mL無菌水的試管中，并用渦旋振蕩儀混勻。大腸內容物依次進行10-1～10-9倍梯度稀釋，小腸進行10-1～10-6倍梯度稀釋。

（1）芽孢桿菌數量的測定。測定芽孢桿菌時，先將腸道內容物80 ℃水浴處理30 min。采用平板稀釋涂布法，以NA培養基平板測定芽孢桿菌的數量。37 ℃培養12 h，觀察并記數。

（2）大腸桿菌數量的測定。采用平板稀釋涂布法，以EMB培養基平板測定大腸桿菌的數量。37 ℃培養12 h，觀察并記數。

（3）乳酸菌數量的測定。采用平板稀釋涂布法，以MRS培養基平板測定乳酸菌。37 ℃培養12 h，觀察并記數。

（4）酵母菌數量的測定。采用平板稀釋涂布法，以YPD培養基平板測定酵母菌的數量。37 ℃培養12 h，觀察并記數。

2 結果與分析

2.1 飼喂Tu-569菌劑對幼兔生長性能的影響

由表1可知，飼喂期間，試驗組和對照組的日均采食量保持同一水平。與對照組相比，飼喂至10 d時，試驗組的日均增重高9.4%；20 d時，試驗組的日均增重高22.6%；30 d時，試驗組的日均增重高12.9%。與對照組相比，飼喂至10 d時，試驗組的料重比下降5.7%；飼喂至20 d時，試驗組的料重比下降18.9%；飼喂至30 d時，試驗組的料重比下降12.4%。與對照組相比，飼喂至10 d時，試驗組的飼料轉化率增加6.9%；飼喂至20 d時，試驗組的飼料轉化率增加23.7%；飼喂至30 d時，試驗組的飼料轉化率增加13.1%。與對照組相比，飼喂至10 d時，試驗組的胴體重增加26.1%；飼喂至20 d時，試驗組的胴體重增加16.0%；飼喂至20 d時，試驗組的胴體重增加13.4%。

2.2 飼喂Tu-569菌劑對幼兔腹瀉的影響

由表2可知，試驗組的腹瀉率為4.44%，與對照組相比，下降了33.43%。試驗組有2只幼兔僅表現出輕微腹瀉癥狀；對照組幼兔有2只腹瀉表現出輕微腹瀉癥狀，1只表現出嚴重腹瀉癥狀，4 d后輕微腹瀉幼兔恢復正常，嚴重腹瀉幼兔死亡。

2.3 飼喂Tu-569菌劑對幼兔腸道菌群的影響

2.3.1 飼喂Tu-569菌劑對幼兔小腸內菌群的影響 由表3可知，試驗組幼兔小腸內的芽孢桿菌數量增加明顯，為對照組幼兔小腸內的芽孢桿菌數量的16.9倍。與對照組幼兔相比，試驗組幼兔小腸內的大腸桿菌數量、乳酸菌數量、酵母菌數量相差不大。故飼喂Tu-569菌劑可明顯增加幼兔小腸內的芽孢桿菌數量。

2.3.2 飼喂Tu-569菌劑對幼兔大腸內菌群的影響 由表4可知，與對照組幼兔相比，試驗組幼兔大腸內的芽孢桿菌數量明顯增加，為對照組幼兔大腸內芽孢桿菌數量的27.8倍。試驗組幼兔大腸內的大腸桿菌數量減少，為對照組幼兔大腸內的大腸桿菌數量的47.0%。試驗組幼兔大腸內的乳酸菌數量增加，為對照組幼兔大腸內的乳酸菌數量的10.2倍。試驗組幼兔大腸內的酵母菌數量增加，為對照組幼兔大腸內的乳酸菌數量的3.2倍。故飼喂Tu-569菌劑可顯著增加幼兔大腸內芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌的數量，可降低幼兔大腸內大腸桿菌數量。

3 小結與討論

吳建忠等[5]向兔日糧中添加乳酸芽孢桿菌制劑，發現與對照組相比，試驗組的平均日增重可提高7.98%～15.16%，料肉比降低2.83%～3.40%，。潘康成等[6]向兔基礎日糧中添加0.1%蠟樣芽孢桿菌PAS38制劑，發現可使試驗組的料重比比對照組下降13.8%。胡艷等[7]向兔飼料中添加枯草芽孢桿菌，使試驗組兔子平均日增重比對照組提高了33.35%，料肉比降低了13.96%，成活率提高了10%。孫寶麗等[8]對仔兔灌服利生菌王（芽孢桿菌為其主要成分之一），發現灌服后仔兔的生長速度可提高2.3%～13.0%，斷奶后料肉比可下降11.5%～14.0%。任永軍等[9，10]向35日齡斷奶肉兔日糧中添加由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌組成的復合芽孢桿菌制劑，發現在飼糧中添加復合芽孢桿菌制劑可以促進肉兔腸道發育，刺激盲腸有益菌的增殖并抑制有害菌的增殖；還發現該復合芽孢桿菌制劑可有效提高新西蘭兔生產性能、屠宰性能和免疫器官指數，并可改善兔肉肉品質。本研究證明，Tu-569菌劑可使試驗組幼兔的日均增重增加9.4%～22.6%；試驗組幼兔的料重比下降5.7%～18.9%；試驗組幼兔的飼料轉化率增加6.9%～23.7%；試驗組幼兔的胴體重增加13.4%～26.1%；同時，試驗組幼兔腹瀉率降低了50.0%；與對照組幼兔相比，可使試驗組幼兔大腸內的芽孢桿菌數量增加26.8倍；試驗組幼兔大腸內的大腸桿菌數量減少53.0%；試驗組幼兔大腸內的乳酸菌數量增加9.2倍；試驗組幼兔大腸內的酵母菌數量增加2.2倍。日糧中添加Tu-569菌劑導致有益菌數量增加及有害菌數量減少與Tu-569菌株產生抑制腹瀉病原菌生長的物質相關[4]。日糧中添加Tu-569菌劑導致幼兔的日均增重、飼料轉化率、胴體重增加的原因可能與Tu-569菌株特性有關，該菌株富產胞外消化酶[4]，但這一相關性尚需測定日糧添加Tu-569菌劑后小腸、大腸的消化酶活力變化來加以證實。

飼喂Tu-569菌劑可使幼兔的日均增重、飼料轉化率、胴體重顯著增加，料重比顯著下降，還可顯著增加幼兔大腸內芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌的數量，顯著降低幼兔大腸內大腸桿菌數量，防止幼兔腹瀉。

參考文獻：

[1] 李炳勝，趙鳳傳.家兔腹瀉病的綜合防治[J].中國養兔，2013（7）：42，38.

[2] 張林海，張代寶，馬文濤，等.淺析仔兔腹瀉病因及防治措施[J].當代畜牧，2014（14）：63-64.

[3] 王仲兵.微生態制劑對幼兔腹瀉治療的研究[J].中國預防獸醫學報，2007，29（6）：475-479.

[4] 尚 偉.抗兔腹瀉芽孢桿菌Tu-569菌株的篩選、發酵及應用[D].河北保定：河北農業大學，2012.

[5] 吳建忠，劉清神，馮定遠.乳酸芽孢桿菌制劑對齊卡肉兔的促生長作用研究[J].飼料工業，2008，29（15）：48-49.

[6] 潘康成，馮 軾，崔恒敏，等.微生物制劑對幼兔生長及HPA軸5-HT能細胞的影響[J].動物營養學報，2009，21（6）：945-952.

[7] 胡 艷，蘇 州，郭禮榮.枯草芽孢桿菌對普通級實驗兔生產性能的初探[J].科技廣場，2012（12）：230-231.

[8] 孫寶麗，何英俊，傅沖云，等.益生菌添加劑對天露山黑兔仔兔生產性能的影響[J].中國草食動物科學，2013，33（2）：75-77.

[9] 任永軍，雷 珉，鄺良德，等.復合芽孢桿菌制劑對肉兔腸道發育和免疫功能的影響[J].動物營養學報，2014，26（1）：144-152.

[10] 任永軍，雷 珉，鄺良德.復合芽孢桿菌制劑對肉兔生產性能、免疫器官指數及肉質的影響[J].中國畜牧雜志，2014，50（3）：73-77.