葉瓜參長鏈堿抑制3T3-L1前脂肪細胞分化作用機制

毛　磊，徐　慧，田迎櫻，徐　杰，王玉明，王靜鳳*，薛長湖

（中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島　266003）

葉瓜參長鏈堿抑制3T3-L1前脂肪細胞分化作用機制

毛磊，徐慧，田迎櫻，徐杰，王玉明，王靜鳳*，薛長湖

（中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島266003）

目的：研究葉瓜參長鏈堿（long-chain base from the sea cucumber Cucumaria frondosa，Cf-LCB）對3T3-L1前脂肪細胞分化的作用，并探 討其作用機制。方法：以四甲基偶氮唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法檢測Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞增殖活性的影響；采用傳統(tǒng)雞尾酒法誘導3T3-L1前脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞，分別采用油紅O染色和甘油三酯（triglycerides，TG）含量測定法評價其對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響；反轉錄實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantity real-time reverse transcript polymerase chain reaction，qRT-PCR）法檢測脂肪細胞分化關鍵基因CCAAT增強子結合蛋白α（CCAAT/enhancer binding protein alpha，C/EBPα）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferators-activated receptors gamma，PPARγ）以及WNT/β-catenin通路關鍵基因WNT10b（wingless-type MMTV integration site family members）、卷曲蛋白1（frizzled protein1，F(xiàn)Z1）、低密度脂蛋白受體相關蛋白6（LDL-receptor-related protein6，LRP6）和β-連環(huán)蛋白（β-catenin）的mRNA表達水平；Western blotting法檢測WNT/β-catenin通路關鍵基因LRP6和β-catenin的蛋白表達量。結果：Cf-LCB能顯著抑制3T3-L1前 脂肪細胞的增殖；抑制3T3-L1細胞脂滴形成以及C/EBPα和PPARγ mRNA表達；顯著上調WNT/β-catenin通路關鍵基因FZ1、LRP6和β-catenin mRNA表達，對WNT10b的表達無影響；顯著促進LRP6和β-catenin的蛋白表達，提高核內β-catenin含量。結論：Cf-LCB能夠顯著抑制3T3-L1前脂肪細胞分化，其作用機制與激活WNT/β-catenin通路有關。

葉瓜參；長鏈堿；3T3-L1前脂肪細胞；分化；WN T/β-catenin信號通路

肥胖是胰島素抵抗、2型糖尿病和心血管疾病等代謝綜合征的共同誘因，給人類健康和社會發(fā)展帶來嚴重危害［1］。研究表明，脂肪細胞過度分化是引起肥胖的重要原因［2］，因此，控制脂肪細胞分化是預防和治療肥胖的重要途徑。Ahn等［3］研究發(fā)現(xiàn)WNT/β-catenin通路是脂肪細胞分化的“總開關”，WNT/β-catenin通路被激活后，最終通過抑制轉錄調控因子CCAAT增強子結合蛋白α（CCAAT/ enhancer binding protein alpha，C/EBPα）和過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferators-activated receptors gamma，PPARγ）的表達抑制脂肪細胞分化。

長鏈堿（long-chain base，LCB）是鞘脂的特征性結構，屬于最簡單的鞘脂類化合物［4］。海洋無脊椎動物的LCB更易被機體吸收，且具有更強的生理活性［5］。目前國內外關于海參LCB的研究較少，主要發(fā)現(xiàn)其具有抗腫瘤［6-7］、改善糖脂代謝［4］功能。然而，關于海參長鏈 堿對脂肪細胞功能影響的研究尚未見報道。

不同海參中鞘脂含量差異較大，有研究表明，葉瓜參是鞘脂含量較高的物種，可作為制備LCB的原料［8］。徐杰［9］通過液相色譜-質譜聯(lián)用儀分析確認葉瓜參長鏈堿（long-chain base from the sea cucumber Cucumaria frondosa，Cf-LCB）主要包括d18∶2、d17∶1、d18∶3和d19∶34 種，其相對分子質量范圍為238.4～320.5。本實驗從葉瓜參中制備得長鏈堿，研究Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞增殖和分化的作用，并對其作用機制進行探討，為葉瓜參長鏈堿的進一步開發(fā)利用提供理論依據(jù)，為預防和治療肥胖等代謝綜合征藥物的篩選提供科學依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

葉瓜參（Cucumaria frondosa）干品，購自青島市南山水產市場；3T3-L1前脂肪細胞株，購自美國模式培養(yǎng)物保藏所（American Type Culture Collection，ATCC）。

1.2試劑

DMEM培養(yǎng)基美國Gibco公司；胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）美國Hyclone公司；四甲基偶氮唑藍（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）、二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX）、地塞米松（dexamethasone，DEX）、胰島素、油紅O染料、胰蛋白酶美國Sigma公司；乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase，LDH）活性檢測試劑盒南京建成生物工程研究所；甘油三酯（triglycerides，TG）測定試劑盒北京Aibio公司；Trizol美國Invitrogen公司；M-MLV逆轉錄酶日本TaKaRa公司；SYBR Green熒光染料瑞士Roche公司；C/EBPα抗體、PPARγ抗體美國Abcam公司；30%丙烯酰胺、四甲基乙二胺（tetramethylethylenediamine，TEMED）、RIPA裂解液、牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）北京索萊寶科技有限公司；超敏發(fā)光液北京普利萊基因有限公司；脫脂牛奶美國BD公司；所有檢測基因引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成；其他試劑均為國產分析純。

1.3儀器與設備

2711型CO2培養(yǎng)箱德國Heraeus公司；DL-CJ-1N型超凈工作臺北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；IX51型倒置顯微鏡日本Olympus公司；HH-8型數(shù)顯恒溫水浴鍋金壇市雙捷實驗儀器廠；iQ5型實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantity real-time polymerase chain reaction，qPCR）儀、680型酶標儀美國Bio-Rad公司；DYCP-40C型半干型轉膜工作儀、WD-9405A型脫色搖床北京六一儀器廠；EPS 600型電泳儀上海天能科技有限公司；PVDF膜美國Milipore公司；JS-780型全自動凝膠成像分析儀上海培清科技有限公司；Laborota 4000型旋轉蒸發(fā)儀德國Heidolph公司；1260型高效液相色譜儀美國Agilent公司。

1.4方法

1.4.1Cf-LCB的制備

稱取1 kg葉瓜參粉末，用4.5 L氯仿-甲醇（2∶1，V/V）浸提12 h，過濾。反復浸提3 次，合并浸提液，并旋轉蒸發(fā)至干，得脂質粗提物。將脂質粗提物經4 mol/L KOH在37 ℃條件下皂化1 h，冷卻后用氯仿萃取3 次（氯仿、甲醇、水的體積比為2∶1∶0.9），收集下層組分，減壓濃縮至干。然后，用1 mol/L鹽酸80 ℃酸解反應16 h，冷卻后用相同體積的正己烷萃取3 次，舍棄正己烷相，并調pH值至10。最后以0.5 倍體積乙醚萃取得到長鏈堿粗提物。采用正向硅膠柱層析法分離得到較純的Cf-LCB。經高效液相色譜法分析，其純度在86%以上。實驗前，Cf-LCB溶解于DMSO中，且細胞培養(yǎng)液中DMSO的終體積分數(shù)小于0.1%。

1.4.23T3-L1前脂肪細胞的培養(yǎng)與分化

3T3-L1前脂肪細胞培養(yǎng)于含有體積分數(shù)10% FBS、100 μg/mL鏈霉素以及100 U/mL青霉素的DMEM培養(yǎng)基中，以0.25%胰酶消化傳代，于37 ℃、5% CO2且相對濕潤的孵箱中常規(guī)傳代貼壁培養(yǎng)。

取對數(shù)生長期的3T3-L1前脂肪細胞，以2×104個/孔接種于24 孔板中。待細胞融合后接觸抑制48 h（記為分化第0天），將細胞培養(yǎng)液換為含有0.5 mmol/L IBMX、1 μmol/L DEX、10 μg/mL胰島素和10% FBS的DMEM培養(yǎng)基。培養(yǎng)48 h后，再換用含10 μg/mL胰島素和10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h。以后每2 d更換1 次完全培養(yǎng)液（含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基），并于第8天檢測脂肪含量。

1.4.3Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞增殖活性的影響

取對數(shù)生長期的3T3-L1前脂肪細胞，以2×103個/孔接種于96 孔板中。貼壁培養(yǎng)24 h后棄培養(yǎng)基，將細胞分為對照組和Cf-LCB低、中、高劑量組，其中對照組不添加Cf-LCB，Cf-LCB低、中、高劑量組中Cf-LCB的含量分別為25、50、100 μg/mL，每組4 個復孔，每孔200 μL。培養(yǎng)96 h后，采用MTT法測定各處理組細胞在570 nm波長處吸光度（A570nm），按照下式計算細胞增殖率。

1.4.4Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞培養(yǎng)上清液中乳酸脫氫酶活性的影響

細胞接種及加樣方法同1.4.3節(jié)。3T3-L1前脂肪細胞經Cf-LCB作用96 h后，收集細胞培養(yǎng)上清液，采用試劑盒說明書方法測定上清液中LDH活性。

1.4.5Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響

3T3-L1前脂肪細胞以2×104個/孔接種于24 孔板中，按1.4.2節(jié)所述方法誘導細胞分化，在細胞分化第0天將細胞分為對照組和Cf-LCB低、中、高劑量組，加樣量同1.4.3節(jié)。將分化第8天的脂肪細胞用10%多聚甲醛固定1 h，0.5%油紅O染色30 min后，于倒置顯微鏡下觀察并拍照。拍照結束后，每孔加入800 μL異丙醇溶解與脂肪細胞結合的油紅O染液，并于490 nm波長處測定吸光度，半定量檢測脂肪細胞內的脂肪含量。

1.4.6脂肪細胞中TG含量測定

3T3-L1前脂肪細胞以2×104個/孔接種于24 孔板中，按1.4.2節(jié)所述方法誘導細胞分化。至分化第8天，將脂肪細胞以0.5% BSA饑餓處理12 h，將細胞分為對照組和Cf-LCB低、中、高劑量組，加樣量同1.4.3節(jié)。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，用冰預冷的裂解液裂解細胞30 min，收集細胞裂解液，離心后收集上清液，采用試劑盒測定上清液中TG及蛋白質含量。細胞中TG含量表示為TG質量/蛋白質質量（mg/mg）。

1.4.7qRT-PCR法檢測脂肪細胞分化關鍵基因C/EBPα、PPARγ和WNT/β-catenin通路關鍵基因WNT10b、FZ1、LRP6、β-catenin mRNA的表達

3T3-L1前脂肪細胞以4.5×104個/孔接種于6 孔板中，按1.4.2節(jié)所述方法誘導細胞分化，于分化第0天時，分為對照組和Cf-LCB高劑量組（100 μg/mL）。分別至分化第0、2、4、8天時，采用Trizol法提取細胞中RNA。每組取1 μg RNA逆轉錄成cDNA，以逆轉錄得到的cDNA為模板，qRT-PCR法檢測C/EBPα、PPARγ、WNT10b（wingless-type MMTV integration site family members）、卷曲蛋白1（frizzled protein1，F(xiàn)Z1）、低密度脂蛋白受體相關蛋白6（LDL-receptor-related protein6，LRP6）和β-連環(huán)蛋白（β-catenin）的mRNA表達。以β-actin作為內參校正基因，基因的相對表達量以目的基因表達量/ β-actin表達量表示，引物序列見表1。

表1　3T3-L1前脂肪細胞分化和WNT/ -catenin通路關鍵基因引物序列Table 1 Primer sequences of the key factors for adipocytes differentiation and WNT/ -catenin pathway

1.4.8Western blotting法檢測WNT/β-catenin通路關鍵基因蛋白表達

3T3-L1前脂肪細胞以4.5×104個/孔接種于6 孔板中，按1.4.2節(jié)所述方法誘導細胞分化，于分化第0天時，分為對照組和Cf-LCB高劑量組（100 μg/mL）。于分化第4天時，提取細胞內總蛋白和細胞核蛋白。采用Western blotting法測定LRP6、β-catenin的蛋白表達量。以β-actin作為總蛋白內參，TATA結合蛋白（TATA-binding protein，TBP）為核蛋白內參，蛋白質的相對表達以目的蛋白表達量/β-actin（TBP）表達量表示。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

2　結果與分析

2.1Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞增殖的影響

圖1　1　CfCf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞增殖活性的影響Fig.1　Effect of Cf-LCB on the proliferation of 3T3-L1 preadipocytes

由圖1可知，Cf-LCB作用96 h后，能極顯著抑制3T3-L1前脂肪細胞的增殖（P＜0.01），平均抑制率為20.07%。

2.2Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞的毒性作用

LDH廣泛存在于所有組織細胞的胞質中，當細胞膜結構受到損傷時，細胞質中的LDH會釋放到培養(yǎng)液中［10］，因此，測定培養(yǎng)液中LDH活性可以反映受試物對細胞的損傷情況［11］。由圖2可知，Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞培養(yǎng)上清液中LDH活性無顯著影響，說明其對3T3-L1前脂肪細胞無毒性作用，進一步證明了Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞的增殖具有抑制作用。

圖2　2　CfCf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞培養(yǎng)上清液中LDH活性的影響Fig.2　Effect of Cf-LCB on the activity of LDH in the supernatant of 3T3-L1 preadipocytes

2.3Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響

油紅O是一種脂溶性染料，可特異性地使細胞中的中性脂肪著色。油紅O染色結果顯示（圖3），從分化第0天開始加樣，Cf-LCB能顯著地降低3T3-L1成熟脂肪細胞數(shù)目及脂肪細胞中脂滴含量。半定量結果顯示，Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞分化的平均抑制率為29.05%（P＜0.01）。

圖3　3　CfCf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞分化的影響Fig.3　Effect of Cf-LCB on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes

2.4Cf-LCB對已分化的3T3-L1前脂肪細胞TG含量的影響

圖4　4　CfCf-LCB對已分化的3T3-L1前脂肪細胞脂質積累的影響Fig.4　Effect of Cf-LCB on the lipid accumulation of differentiated 3T3-L1 adipocytes

如圖4所示，與對照組相比，Cf-LCB能顯著降低細胞中TG含量，且劑量-效應關系明顯，Cf-LCB劑量組TG含量平均降低20.44%（P＜0.01）。

2.5Cf-LCB對3T3-L1前脂肪細胞分化關鍵基因C/EBPα和PPARγ mRNA相對表達量的影響

圖5　分化不同時期CCff--LLCCBB對　C/EEBBPPα、PPPPAARRγ mRNA相對表達量的影響Fig.5　Effect of Cf-LCB on mRNA expression of C/EBPα and PPARγ at different differentiation stages of 3T3-L1 preadipocytes

由圖5可知，隨著脂肪細胞分化過程的進行，C/EBPα和PPARγ的mRNA相對表達量逐漸升高，且PPARγ mRNA的相對表達量在分化第4天時達到最大。經Cf-LCB干預后，C/EBPα mRNA的相對表達量在第4天和第8天分別降低了35.34%和50.00%（P＜0.01）；PPARγ mRNA的相對表達量在第4天和第8天分別降低了53.18%和47.71%（P＜0.01）。

2.6Cf-LCB對WNT/β-catenin通路關鍵基因mRNA表達量的影響

由圖6可知，隨著3T3-L1前脂肪細胞分化過程的進行，WNT10b、FZ1、LRP6和β-catenin的mRNA相對表達量均呈下降趨勢。加入Cf-LCB干預后，F(xiàn)Z1、LRP6和β-catenin的mRNA相對表達量極顯著升高（P＜0.01）。在分化的第4天，F(xiàn)Z1、LRP6和β-catenin的mRNA相對表達量分別升高了39.00%、52.68%和56.98%，在分化的第8天，F(xiàn)Z1、LRP6和β-catenin的mRNA相對表達量分別升高了25.80%、39%和137.11%。加入Cf-LCB干預后，WNT10b mRNA的相對表達量較對照組無顯著性變化，均處于較低水平。

圖6　分化不同時期CCff-LCB對WWNNTT//β-catenin通路關鍵基因mRRNNAA相對表達量的影響Fig.6　Effect of Cf-LCB on mRNA expressions of the key factors for WNT/β-catenin pathway at different differentiation stages of 3T3-L1 preadipocytes

2.7Cf-LCB對WNT/β-catenin通路關鍵基因蛋白表達的影響

LRP6和β-catenin是WNT/β-catenin通路的重要組成部分，也是脂肪細胞分化的重要負調控因子。上述實驗已經證明在脂肪細胞分化第4天時，Cf-LCB增強WNT/ β-catenin通路的作用效果最佳。為了進一步驗證Cf-LCB對WNT/β-catenin的影響，本實驗測定了分化第4天時，100 μg/mL Cf-LCB對LRP6和β-catenin蛋白表達的影響。如圖7所示，Cf-LCB能顯著促進LRP6和β-catenin蛋白表達（P＜0.01）。與對照組細胞相比，經100 μg/mL Cf-LCB干預后，LRP6和β-catenin蛋白的相對表達量分別升高了286.84%和55.40%。WNT/β-catenin通路激活后，β-catenin在細胞質中積累并轉移到細胞核中調控與脂肪細胞分化有關基因的表達。如圖7c所示，Cf-LCB能顯著促進細胞核內β-catenin的含量。100 μg/mL Cf-LCB作用后的細胞，其細胞核內β-catenin的含量比對照組增加了46.97%（P＜0.01）。

圖7　分化第4天　時CCff-LCB對WWNNTT//β-catenin通路關鍵基因蛋白表達的影響Fig.7　Effect of Cf-LCB on protein expression in WNT/β-catenin pathway at day 4 of differentiation

3　討 論

脂肪細胞在機體能量代謝及平衡中發(fā)揮著重要作用［1］。脂肪細胞分化是細胞數(shù)量增加、體積增大及TG累積的過程［12］。研究表明，脂肪細胞分化過程紊亂可能是誘發(fā)肥胖及其他代謝綜合征的一個重要原因［13］。本實驗以3T3-L1前脂肪細胞為研究對象，考察了Cf-LCB對其分化的影響。結果表明，Cf-LCB能顯著抑制3T3-L1前脂肪細胞的增殖，降低3T3-L1成熟脂肪細胞數(shù)目及脂肪細胞中脂滴含量，減少TG在脂肪細胞內的積累，提示其具有潛在的抗肥胖功效。

C/EBPα和PPARγ主要存在于脂肪細胞中，是脂肪細胞分化的兩個最重要的轉錄調控因子［14］。研究證明，在沒有任何外界激素的刺激下，C/EBPα的激活可以單獨誘導脂肪細胞的分化［15］。PPARγ是唯一被證明在脂肪細胞分化中必不可少的轉錄調控因子，功能喪失實驗證明PPARγ在脂肪細胞分化中是不可取代的［16］。本研究結果表明，Cf-LCB能顯著抑制C/EBPα和PPARγ的表達，證明其對脂肪細胞分化具有抑制作用。

WNT/β-catenin通路在細胞增殖及分化中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)，在脂肪組織中激活WNT/β-catenin通路，不僅會引起脂肪細胞分化受阻，甚至導致成熟脂肪細胞去分化［17］。WNT10b是參與WNT/β-catenin通路的主要WNT蛋白，WNT10b與前脂肪細胞細胞膜上的FZ受體及LRPs輔助受體結合可導致WNT/β-catenin通路被激活［18］。WNT10b在前脂肪細胞中高表達，而隨著脂肪細胞分化的進行，其表達量急劇降低，與脂肪含量成負相關［19］，本實驗結果與此結論一致。FZ及LRPs對于WNT/ β-catenin通路也具有重要的調控作用［20］。研究表明，LRP6缺失型小鼠胚胎可以自發(fā)地誘導脂肪細胞分化［21］。體外添加FZ的抑制劑可以在沒有任何外界刺激的情況下誘導3T3-L1細胞分化為成熟脂肪細胞［3］。本研究發(fā)現(xiàn)，Cf-LCB可以顯著增強FZ1和LRP6的表達，這提示Cf-LCB可能通過提高FZ1及LRP6的表達而激活WNT/β-catenin通路。WNT/β-catenin通路被激活后，細胞質中的β-catenin積累并轉移到細胞核中［22］。作為WNT/β-catenin通路的關鍵因子，β-catenin的高表達對于抑制脂肪細胞分化具有重要作用［23］。本研究發(fā)現(xiàn)，Cf-LCB增強了β-catenin的表達，并促進其向細胞核轉移，這提示Cf-LCB通過激活WNT/β-catenin通路抑制脂肪細胞分化。

綜上所述，Cf-LCB通過上調WNT/β-catenin通路中關鍵受體FZ1和LRP6的表達啟動WNT/β-catenin通路，并通過提高β-catenin的表達及穩(wěn)定性，從而增強β-catenin向細胞核轉移及轉錄活性，抑制C/EBPα和PPARγ的表達，進而抑制3T3-L1前脂肪細胞向成熟脂肪細胞分化。

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Suppressive Effect of Long-Chain Base from Sea Cucumber Cucumaria frondosa on the Differentiation of 3T3-L1 Preadipocytes and Underlying Mechanism

MAO Lei， XU Hui， TIAN Yingying， XU Jie， WANG Yuming， WANG Jingfeng*， XUE Changhu
（College of Food Science and Engineering， Ocean University of China， Qingdao266003， China）

The aim of the present study was to observe the effect of Cf-LCB on the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes and to investigate the possible underlying mechanism. The effect of Cf-LCB on the proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was evaluated by MTT assay. After using differentiation cocktail to differentiate 3T3-L1 preadipocytes， the effect of Cf-LCB on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes was evaluated by oil red O-staining and determining TG content. mRNA expression levels of key genes associated with differentiation and WNT/β-catenin signal pathway in 3T3-L1 preadipocytes were measured by qRT-PCR. Expression levels of key prote ins in WNT/β-catenin signal pathway were measured by Western blotting. Results showed that Cf-LCB significantly inhibited the proliferation o f 3T3-L1 preadi pocytes， prevented the formation of lipid droplets in mature 3T3-L1 adipocytes and down-regulated C/EBPα and PPARγ. The mRNA expression of FZ1， LRP6 and β-catenin was distinctly enhanced by Cf-LCB， suggesting activation of WNT/β-catenin pathway. The increased protein expressions of key factors in WNT/β-catenin pathway including LRP6，total and nuclear β-catenin further demonstrated that Cf-LCB could markedly suppress the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes by activating WNT/β-catenin pathway.

Cucumaria frondosa； long-chain base； 3T3-L1 preadipocytes； adipogenesis； WNT/β-catenin signal pathway

R282.77

A

1002-6630（2015）23-0241-06

10.7506/spkx1002-6630-201523044

2015-06-25

國家自然科學基金面上項目（31371876；31201329）

毛磊（1991—），女，碩士研究生，研究方向為海洋生物活性物質。E-mail：1164161817@qq.com

王靜鳳（1964—），女，教授，博士，研究方向為海洋生物活性物質及分子營養(yǎng)學。E-mail：jfwang@ouc.edu.cn