DC-CIK細胞聯合化療治療晚期結直腸癌的臨床探討

張建剛　葉知鋒　黃伶　黃挺　張志娣

DC-CIK細胞聯合化療治療晚期結直腸癌的臨床探討

張建剛葉知鋒黃伶黃挺張志娣

目的 探討樹突狀細胞-細胞因子誘導的殺傷細胞（DC-CIK）聯合化療對晚期結直腸癌的療效。方法 回顧性分析42例行DCCIK細胞療法聯合化療的晚期結直腸癌患者的臨床資料，采用1：1配對的方法，選擇同期單獨行化療的42例晚期結直腸癌患者作為對照組。對兩組的有效率（RR）、疾病控制率（DCR）、生存期及無疾病進展時間進行觀察比較。結果 DC-CIK治療組患者的疾病控制率（DCR）明顯高于化療組（76.19% VS 52.38%），差異有統計學意義（P＜0.05）；治療組的中位生存期明顯高于化療組（17.5個月VS 13.3個月），差異有統計學意義（P=0.008）。結論 DC-CIK細胞聯合化療可以明顯提高晚期結直腸癌患者的疾病控制率，延長生存期。

晚期結直腸癌 DC-CIK細胞 疾病控制率 生存期

近30年來，隨著我國經濟的迅速發展及國民生活飲食方式的改變，結直腸癌的發病率和病死率已明顯升高，目前已位居常見惡性腫瘤的第4名。其中20%～25%的初診患者即為Ⅳ期，失去手術根治機會，治療以化療為主，但療效不滿意。因此需探索新的大腸癌治療手段，改善患者預后。以樹突狀細胞（Dendritic cell，DC）和細胞因子誘導的殺傷細胞（Cytokine-induced killer cells，CIK）為基礎的腫瘤細胞免疫治療成為目前研究的熱點之一。自2010年4月至2014年6月間，作者采用DC-CIK細胞免疫治療聯合化療治療42例晚期結直腸癌患者，取得了較好的療效，現總結報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 所選病例為本院行DC-CIK細胞免疫治療聯合化療的42例Ⅳ期結直腸癌患者，設為治療組；并按1：1配對選擇同期單獨行化療的42例Ⅳ期結直腸癌患者，設為對照組。治療組男24例，女18例；年齡≤60歲16例、＞60歲26例。對照組男22例，女20例；年齡≤60歲15例、＞60歲27例。入組標準：均為病理組織學或細胞學檢查確診的Ⅳ期結直腸癌患者；KPS評分≥60分；預計生存期≥3個月；血常規、肝腎功能及心肺功能基本正常；所有患者均簽署知情同意書。排除標準：心臟及肝腎功能不全；合并其它惡性腫瘤者；不能配合治療及無法評估療效者。兩組性別、年齡、病理類型、轉移部位、化療方案等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2DC-CIK細胞的制備及回輸 取患者抗凝外周血50ml，常規Ficoll分離單個核細胞（PBMC）。PBMC用pH 7.4的PBS洗滌3次，將細胞按2×106/ml數量懸浮于10%的RPMI-1640培養基培養2h，棄上清液，獲得貼壁的PBMC。每孔加入rhGM-CSF、rhIL-4的完全培養基誘導DC，第5天加入IL-1β、PGE-2、TNF-α，置37℃ 5% CO2培養箱中繼續培養48h，獲得成熟的DC。PBMC經pH 7.4的PBS洗滌3次，將細胞按2×106/ml數量懸浮于10%的RPMI-1640培養基培養，加入TNF-γ、anti-CD3mAb、IL-2，誘導產生CIK。第7天將DC與CIK按照1：5比例混合培養5～7d，產生DC-CIK。收集12d誘導擴增后獲得的DCCIK，用0.9%生理鹽水配成200ml液體靜脈回輸，1次/d，每次回輸細胞數約1×109，連續6次為1個療程。

1.3治療方法 患者按治療方式不同分為兩組：（1）DC-CIK治療組：接受FOLFOX、XELOX、希羅達單藥等方案化療，聯合DC-CIK細胞免疫治療。化療結束后5～7d開始行DC-CIK細胞回輸治療，回輸前予地塞米松或異丙嗪針常規抗過敏預處理。每例患者行≥2個療程的DC-CIK細胞免疫治療。（2）對照組：單純接受FOLFOX、XELOX、希羅達單藥等方案化療。

1.4觀察指標 主要終點評價指標為生存時間，次要終點評價指標為無進展生存時間、近期療效及不良反應。生存時間（OS）的計算由患者入組接受治療開始，直至任何原因的死亡或最后1次隨訪。無進展生存時間（PFS）的計算由患者入組接受治療開始，直至腫瘤進展或最后1次隨訪。

1.5療效評價 根據1999年美國臨床腫瘤學年會提出的實體瘤療效評價標準進行療效評價，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）和疾病進展（PD），有效率（RR）=（CR+PR）/（CR+PR+SD+PD），疾病控制率（DCR）=（CR+PR+SD）/（CR+PR+SD+PD）。

1.6不良反應和隨訪 （1）不良反應：根據美國國立癌癥研究所制定的通用藥物毒性反應標準，將各種不良事件分為0～Ⅳ度。（2）隨訪：全部病例隨訪至2014年6月30日，無失訪病例，隨訪率為100%。

1.7統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件。采用Kaplan-Meier生存曲線和Logrank test檢驗比較兩組總生存率及無進展生存率。計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1療效評價 DC-CIK治療組的RR為45.24%，對照組的RR為28.57%，兩組比較差異無統計學意義（P=0.113）；DC-CIK治療組的DCR為76.19%，對照組的DCR為52.38%，兩組比較差異有統計學意義（P=0.023），見表1。

表1　兩組患者的臨床療效比較（n）

2.2生存分析 DC-CIK治療組和對照組的中位生存期（mOS）分別為17.5個月（95%CI，15.34～19.66）、13.3個月（95%CI，12.22～14.38）。Kaplan-Meier生存曲線和Logrank test檢驗結果表明，治療組的生存期明顯長于化療組（χ2=7.024，P=0.008）。見圖1。

2.3無進展生存分析 DC-CIK治療組和化療組的中位無進展生存期（mPFS）分別為6.3個月（95%CI，5.41～7.19）、5.1個月（95%CI，4.52～5.68）。Kaplan-Meier生存曲線和Logrank test檢驗結果表明，治療組的無進展生存期明顯長于對照組（χ2=8.384，P=0.004）。見圖2。

2.4不良反應觀察 治療組42例患者，有4例在回輸DC-CIK細胞的過程中出現低熱（體溫＜38.5℃），無需特殊處理，自行降至正常。對心、肝和腎功能未見有明顯影響，亦未見其它嚴重不良反應。

3　討論

圖1　兩組總生存率比較

圖2　兩組無進展生存率比較

目前晚期結直腸癌的主要治療方法為化療及支持治療，但常規化療的療效已達平臺期，故需聯合其他治療方法以改善患者的預后。腫瘤免疫治療既能直接殺滅腫瘤細胞又能增加機體的免疫功能，無明顯不良反應，已成為抗腫瘤治療的第4個主要治療方法［1］。其中，DC-CIK是該領域中極具發展前景的免疫細胞，已在多種惡性腫瘤的治療中取得一定的療效，但在晚期結直腸癌中運用報道較少。

CIK是一種新型的過繼免疫細胞，兼有T淋巴細胞特異性殺傷及自然殺傷（NK）細胞非主要組織相容性復合體（MHC）限制性殺傷能力［2］，其抗腫瘤活性強于以往的LAK細胞、CD3AK細胞。多項研究發現，CIK細胞對耐藥的腫瘤細胞也有殺傷作用［3，4］，故CIK細胞治療與化療聯合運用可產生協同效應。DC作為已知功能最強的抗原遞呈細胞，是激活機體特異性抗瘤應答的關鍵，可有效抵制腫瘤細胞的免疫逃逸機制。國內有研究［5］表明：實體腫瘤病灶內DC浸潤程度與患者預后有關，浸潤DC數量高者，預后好。DC與CIK是高效和諧的腫瘤免疫治療的兩個重要組成部分，前者識別病原，激活獲得性免疫系統，后者通過發揮自身細胞毒性和分泌細胞因子殺傷腫瘤細胞。DC與CIK共同培養后不僅能促進CIK細胞增殖、分化和增強細胞毒活性，而且能提高DC遞呈抗原的特異性和促進DC的成熟［6］，從而發揮協同抗腫瘤的作用。

CIK抗腫瘤作用機制尚未完全明了，既往研究提示可能為以下途徑：（1）CIK對腫瘤細胞的直接殺傷作用。CIK通過粘附因子LFA/ICAM-1途徑與腫瘤細胞結合，釋放顆粒酶和穿孔素，使腫瘤細胞裂解死亡［7］；（2）CIK能促進凋亡相關蛋白合成，誘導腫瘤細胞凋亡及壞死［8］；（3）CIK可分泌多種細胞因子，對腫瘤細胞有直接抑制作用，還能調節免疫系統間接殺傷腫瘤細胞。國內有學者［9］報道，化療聯合CIK治療的結直腸癌患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、NK均顯著高于化療前，提示CIK治療可顯著改善患者的免疫功能。

多項研究［10，11］亦表明，化療聯合DC-CIK細胞免疫治療比單純化療不僅可以提高晚期腫瘤患者的免疫功能，還可以提高患者的DCR，延長無疾病進展時間，改善生活質量，且不良反應少。本資料結果顯示，化療聯合DC-CIK細胞免疫治療比單純化療可以提高晚期結直腸癌患者的DCR，延長總生存期及無進展生存期，不良反應可耐受。至于兩組患者的RR差異不明顯的原因，考慮可能與入組患者腫瘤分期晚（均為Ⅳ期）、惡性度高（低分化腺癌占比較高）及病例數較少有關，也有可能與免疫治療起效較慢而不適合目前實體瘤療效評價標準有關。因此，DC-CIK細胞免疫治療作為一種新興的抗腫瘤輔助治療手段，只有與手術、放化療等有機結合，才能獲得更好的臨床療效。

綜上所述，DC-CIK細胞聯合化療治療晚期結直腸癌患者的療效確切，不良反應少，值得臨床推廣。

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Objective To evaluate the effect of DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy in the treatment of advanced colorectal cancer. Methods We retrospectively analyzed 42 patients of advanced colorectal cancer treated with DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy and choose 42 patients at the same period as control treated only with chemotherapy.The response rate（RR），disease control rate（DCR），median overall survival time and progression-free survival time were investigated and compared between the two groups. Results The disease control rate in the DC-CIK treatment group was significantly higher than that in the chemotherapy group（76.19% VS 52.38%），and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The median overall survival time in the DC-CIK treatment group was significantly longer than that in the chemotherapy group（17.5 VS 13.3months），and the difference was statistically significant（P=0.008）. Conclusion DC-CIK adoptive immunotherapy combined with chemotherapy could significantly improve the disease control rate and the overall survival time of patients with advanced colorectal cancer.

Advanced colorectal cancer DC-CIK cells Disease control rate Survival time

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