海南糞箕篤根莖中總生物堿含量的測定

程 彬，戴 華，白麗麗*

(1.海南醫學院藥學院，海南海口571199;2.海南醫學院公共衛生學院，海南海口571199)

糞箕篤(Stephania longaL.)為防己科千金藤屬植物，多年生草質藤本，廣泛分布于廣東、福建、臺灣、海南等我國南部地區［1］。在海南全省各地可見，生于村邊或曠野灌木叢中，是天然的南藥資源。全株可入藥，味辛、性平，具有清熱解毒、利濕消腫、袪風活絡、抑菌、鎮靜和鎮痛等功效［2-3］。該屬植物富含生物堿，近年來對該屬植物的化學成分及藥理進行研究［4-8］，但有關糞箕篤總生物堿含量的測定鮮有報道。筆者主要采用分光光度法，以鹽酸小檗堿為對照品，對海南糞箕篤根莖中的總生物堿進行含量測定，為糞箕篤及其千金藤屬其他植物的藥用開發與利用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 儀器 UV1600型紫外可見分光光度計(北京瑞利分析儀器有限公司);PHS-3C型酸度計(上海精密科學儀器有限公司);B210S分析天平(北京賽多利斯有限公司)。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿標準品(中國藥品生物制品檢定所，批號110713-201212，純度86.7%);糞箕篤藥材(采自海南文昌)，經海南醫學院曾念開副教授鑒定為糞箕篤Stephania longaL.根莖，晾干粉碎后備用。所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 試驗方法

1.3.1 試液配制。

1.3.1.1 對照品溶液的制備。精密稱取在110℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品10.1 mg置于50 ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，按86.7%計算，即得175 μg/ml。

1.3.1.2 供試品溶液的制備。糞箕篤粉末約2.0 g精密稱量6份，置于圓底燒瓶中，用85%乙醇回流2 h，濃縮后經氯仿提取，于100 ml容量瓶中定容至刻度，低溫冷藏、備用。

1.3.1.3 顯色液和緩沖液的配制。按藥典方法配制溴甲酚綠酸性染料溶液，以及pH=5.4的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液［9］。

1.3.2 吸收波長的選擇。精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液各0.5 ml，置分液漏斗中，加檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液5.0 ml，溴甲酚綠溶液2.0 ml，搖勻，加入氯仿10.0 ml，充分振搖，靜置1 h，分出氯仿層，于200～600 nm波長范圍內進行掃描，同時以氯仿作為空白參比液。

1.3.3 方法學考察。

1.3.3.1 線性關系考察。精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，加水 0.9、0.8、0.7、0.5、0.3、0.1 ml，按“1.3.2”項操作，充分振搖后，靜置1 h，分出氯仿層。室溫放置40 min后，在421 nm下測定吸光度值，同時以氯仿為空白對照。

1.3.3.2 穩定性考察。取供試品溶液，在室溫和室內光照條件下密閉放置，分別在0、5、10、30、60、120 min 時測定吸光度值。

1.3.3.3 精密度試驗。精密量取對照品溶液0.5 ml，余下操作同“1.3.2”項，依次測得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.4 重復性試驗。取供試品溶液6份，操作同“1.3.2”項，依次測得吸光度值，以空白溶液作參比。

1.3.3.5 加標回收試驗。取6份供試品溶液，分別加入175 μg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液0.23 ml，依照“1.3.2”項操作，在421 nm波長處測定吸光度值。

1.3.4 總生物堿含量的測定。取供試品溶液6份，每份0.5 ml，用氯仿定容至10.0 ml，按“1.3.2”項操作，分別測得吸光度值，根據標準曲線進行含量計算。

2 結果與分析

2.1 波長的選擇 取供試品與對照品在200～600 nm的波長范圍內進行掃描，結果顯示(圖1)，鹽酸小檗堿對照品溶液和供試品溶液均在421 nm處有吸收峰，而空白參比液在 421 nm處沒有吸收，故該試驗選擇421 nm作為測定波長。

2.2 方法學考察

2.2.1 線性關系的考察。精確量取對照品溶液，在421 nm處測其吸光度。以吸光度值為縱坐標、濃度(μg/ml)為橫坐標繪制標準曲線(圖2)，得出線性回歸方程為A=0.074 0C+0.014 5，相關系數r=0.999 5，在濃度 0 ～15.75 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.2.2 穩定性試驗。平行測定6次，得其RSD=0.20%(n=6)，表明供試品溶液在0～120 min內基本穩定，滿足試驗要求。

2.2.3 精密度試驗。平行測定6次，得其RSD=0.16%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.2.4 重復性試驗。平行測定6次，得其RSD=2.20%(n=6)，表明重現性較好，符合試驗要求。

2.2.5 加標回收試驗。由表1可知，該法回收率為102.75% ～103.57%，平均回收率為103.21%，RSD=0.30%(n=6)，表明回收率較好，符合試驗要求。

表1 加標回收率試驗結果

2.3 總生物堿含量的測定 平行測定6份試液，由表2可知，糞箕篤根莖中總生物堿含量為0.38% ～0.40%，平均含量為0.39%，RSD=2.20%(n=6)。

表2 糞箕篤根莖中總生物堿含量測定結果

3 結論與討論

采用分光光度法測定糞箕篤根莖中總生物堿含量平均為0.39%，操作簡便快捷，靈敏度高，重現性好，測定結果準確可靠。溴甲酚綠顯色法測定總生物堿含量時，選擇合適的pH很重要，其他條件對測定結果影響較小［10］，故該試驗參考文獻［9］選定pH=5.4。該方法與液相色譜法比較，具有所用儀器簡單、操作方便、耗時少的優點。

［1］中國科學院中國植物志編寫委員會.中國植物志，第三十卷［M］.北京:科學出版社，1996:41.

［2］代正福，彭明，戴好富.海南中藥資源圖集 第1集［C］.昆明:云南科技出版社，2010.

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［4］林啟云，謝金鮮.糞箕篤利尿、鎮靜及鎮痛作用研究［J］.廣西中醫藥，2001，24(3):43-45.

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［6］利奕成，楊珂，黃立，等.千金藤屬植物地不容和云南地不容中多糖和葡聚糖的含量測定［J］.時珍國醫國藥，2009，20(12):2921-2922.

［7］黃建明，郭濟賢，段更利.RP-HPLC法測定千金藤屬植物中7種生物活性生物堿［J］.藥學學報，1998，33(7):528-533.

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［9］劉秀萍，黃祥衛，劉煒.小葉地不容中總生物堿含量的測定［J］.海南師范大學學報，2011，24(2):174-175.

［10］孟祥松，時軍.溴甲酚綠比色法測定苦參總堿含量的研究［J］.安徽醫藥，2007，11(1):41-42.