丹參多酚酸鹽對急診PCI患者術后MDA、NADPH氧化酶p22phox活性的影響

李光彩 姚宗芹 楊樹國 付存玉

急性心肌梗死的發病率及就診率逐年提高，急診PCI術大大提高了患者生存率，然而慢復流或無復流現象成為影響患者生存率的重要問題，其機制尚不明確。急診PCI術后氧化應激的增強對再灌注的影響是近年來學者關注的焦點，有學者研究發現丹參多酚酸鹽可改善冠脈慢血流現象[1]，其機制尚待進一步研究。因此設立本課題，旨在從氧化應激的角度探討丹參多酚酸鹽的臨床療效。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6月-2014年6月在臨沂市沂水中心醫院就診的83例急性ST段抬高型心肌梗死行急診PCI治療的患者，隨機數字表法分為治療組46例，其中男29例，女17例，平均年齡（68.4±17.1）歲；和對照組37例，其中男24例，女13例，平均年齡（66.3±14.2）歲。對照組包括雙抗血小板、抗凝、調脂等治療，治療組在對照組治療的基礎上+丹參多酚酸鹽注射液200 mg/d靜滴。急性ST段抬高型心肌梗死的診斷符合2010年中華醫學會急性ST段抬高型心肌梗死診斷及治療指南。本次研究經醫院醫學倫理委員會審核通過，入選研究對象均在知情同意下簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1 急診PCI術 所有患者入院立即行急診PCI術，時間窗均在6 h內，由經驗豐富介入醫師進行操作。

1.2.2 MDA測定 所有研究對象均于入院即刻及治療后2周抽取肘靜脈血各2 mL，分離血清用于MDA測定。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。通過繪制標準曲線求出標本中MDA濃度。由上海西唐生物工程研究所提供試劑盒，按照說明書測定。

1.2.3 NADPH氧化酶p22phox活性測定 入院即刻及治療后2周取肘靜脈血各2 mL，采用明膠自然沉淀法聯合紅細胞裂解液法提取外周血吞噬細胞；硫氰酸胍一步法提取吞噬細胞總RNA；NADPH氧化酶p22phox（317bp）及GAPDH內參基因（572bp）的引物序列由上海生物工程技術服務有限公司提供。其中p22phox：上游 5’-TGGGCGGC TGCTTGATGGT-3’；下游5’-TGGGCGGCTGCTTGATGGT-3’；GAPDH mRNA： 上游 5’-TCACCATCTTCCAGGAGCG-3’； 下 游 5’-CTGCTTCACCACCTTCTTGA-3’。PCR擴增體系采用50 μL反應體系。凝膠成像儀成像并保存結果。通過目的基因p22phox mRNA表達條帶與內參條帶的灰度比值比代表吞噬細NADPH氧化酶p22phox的表達水平。

1.3 統計學處理 所得數據使用SPSS 16.0軟件包進行統計分析，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，符合正態分布且方差齊性兩組間比較及兩獨立樣本比較采用t檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組治療前后MDA水平的變化 治療組治療前后MDA水平分別為（2562.28±920.17）nmol/mL、（1867.72±836.20）nmol/mL，對照組分別為（2448.41±872.81）nmol/mL、（2352.79±870.01）nmol/mL，治療組治療后MDA水平較治療前明顯下降，比較差異有統計學意義（P<0.05），治療組治療后MDA水平較對照組治療后明顯下降，比較差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 治療組及對照組治療前后p22phox活性的變化 治療組治療后NADPH氧化酶p22phox表達（0.61±0.30）較治療前（0.98±0.45）明顯下降，比較差異有統計學意義（P<0.05）（圖1）。對照組治療后NADPH氧化酶p22phox（0.88±0.32）與入院時（0.96±0.42）比較，差異無統計學意義。治療組治療后2周NADPH氧化酶p22phox活性較對照組治療后明顯降低，比較差異有統計學意義（P<0.05）（圖2）。

圖1 治療組治療前后凝膠電泳結果

圖2 治療組與對照組治療后凝膠電泳結果

3 討論

良好的心肌再灌注是行PCI術的最終目標，也是改善患者預后的關鍵環節。目前研究表明，影響心肌再灌注的機制復雜，不能用單一的機制來防范和解決，而采用藥物預防和治療是研究的主要方向。氧化應激是近年來提出的影響PCI術后慢血流或無復流現象發生的重要機制之一[2-3]，近來動物實驗研究發現丹參多酚酸鹽預處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷具有較好的防護作用[4]，可對抗心肌細胞凋亡的發生[5]，減少自由基的生成及增加對自由基的清除，再灌注損傷減輕，從側面提示氧化應激對再灌注的影響[6]。NADPH氧化酶，是機體產生活性氧族的主要來源[7-8]，是參與氧化應激的主要的酶系，該途徑促進大鼠心肌缺血再灌注氧化損傷[9]。MDA是脂質過氧化反應的產物之一，脂質過氧化在氧化應激研究中最為廣泛，其水平高低常常可反映脂質過氧化的程度，間接地反映出機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度和細胞損傷的程度，是評價心肌缺血損傷的較好指標[10]。

本研究中，治療組經治療后NADPH氧化酶p22phox活性較治療前明顯降低，MDA水平下降，提示急性ST段抬高型心肌梗死患者經治療后體內氧化應激水平下降，脂質過氧化水平降低，與張學軍等[11]研究結論一致。而丹參多酚酸鹽治療組較對照組NADPH氧化酶p22phox活性及MDA水平下降更加明顯，提示在常規治療的基礎上，加用丹參多酚酸鹽可進一步抑制氧化應激的水平。丹參多酚酸鹽可明顯減弱NADPH氧化酶p22phox活性及降低MDA水平，在抑制氧化應激方面發揮重要作用，與相關研究結果一致[12]。對照組二者均有降低趨勢，但差別無統計學意義，可能與PCI本身及時進行血運重建，且進行了規范的抗血小板、抗凝、調脂等治療有關。且在丹參多酚酸鹽的整個治療過程中，無不良反應發生，提示丹參多酚酸鹽臨床用安全、有效。

中藥丹參的成分可分為水溶性和脂溶性，而水溶性成分主要為酚類物質，對心血管疾病有益。而丹參多酚酸鹽是酚類物質的高度純化，其可降低急性ST段抬高型心肌梗死PCI術后氧化應激水平[13]，改善微循環，提高組織灌注，但潛含著多元化的藥理作用機制[14]，其中之一可能與減弱吞噬細胞NADPH氧化酶p22phox的活性有關，但由于病例組發病機制本身較為復雜，氧化應激影響因素眾多，尚需在以后的臨床工作中進一步研究。

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